HISTOCHEMIJA: LOGINIS PAGRINDAS, APDOROJIMAS, DAŽYMAS - BIOLOGIJA - 2025

Histocheminiu yra naudinga priemonė, atsižvelgiant į įvairių biologinių audinių (augalų ir gyvūnų) morfologijos tyrimo dėl jos reakcijos principu audinių sudedamųjų dalių, pavyzdžiui, angliavandenių, lipidų ir baltymų, be kita ko, cheminių dažų.

Ši vertinga priemonė leidžia ne tik nustatyti audinių ir ląstelių sudėtį ir struktūrą, bet ir įvairias jose vykstančias reakcijas. Taip pat galima įrodyti galimą audinių pažeidimą, atsirandantį dėl mikroorganizmų ar kitų patologijų.

Histocheminės dėmės. Nilo virusas, gramteigiamos ir gramneigiamos bakterijos (gramai), Histoplasma capsulatum (Grocott), Mycobacterium tuberculosis (Ziehl Neelsen). Šaltinis: Pixinio.com/Wikipedia.org/Nephron / CDC / Dr. George'as P. Kubica

Istorija, gauta iš praėjusių amžių, davė svarų indėlį, pavyzdžiui, Paulo Ehrlicho parodytą kraujo ir smegenų barjero egzistavimą. Tai buvo įmanoma dėl to, kad Ehrlicho naudojamos eksperimento gyvūno smegenys nebuvo dažytos anilinu, kuris yra pagrindinis dažiklis.

Dėl to buvo naudojami įvairūs dažai, tokie kaip metileno mėlynasis ir indofenolis, siekiant nudažyti skirtingų tipų ląsteles. Šis atradimas lėmė ląstelių klasifikavimą į acidofilines, bazofilines ir neutrofilines pagal jų specifinį dažymą.

Naujausi tyrimai taikė šią metodiką siekiant parodyti įvairių junginių, įskaitant fenolius, taip pat angliavandenius ir nestruktūrinius lipidus, Litsea glaucescens rūšies, geriau žinomo kaip lauro, audinius. Jų randama tiek lape, tiek medienoje.

Panašiai, 2016 m. Colares et al., Naudodamas histocheminius metodus, nustatė mediciniškai svarbų augalą Tarenaya hassleriana. Šioje rūšyje buvo įrodyta, kad yra krakmolo, myrosino, taip pat fenolinių ir lipofilinių junginių.

Pagrindas

Histochemija remiasi ląstelių struktūrų ar molekulių, esančių audiniuose, dažymu dėl jų giminingumo specifiniams dažams. Šių struktūrų ar molekulių spalvinimo reakcija jų originaliu formatu vėliau vaizduojama optiniame arba elektroniniame mikroskopu.

Dažymo specifiškumas atsiranda dėl jonus priimančių grupių, esančių ląstelėse ar audinių molekulėse.

Galiausiai, histocheminių reakcijų tikslas yra sugebėti parodyti jas dažant. Nuo didžiausių biologinių struktūrų iki mažiausių audinių ir ląstelių. Tai gali būti pasiekta dėl to, kad dažikliai chemiškai reaguoja su audinių, ląstelių ar organelių molekulėmis.

Baudžiamasis persekiojimas

Histocheminė reakcija gali apimti veiksmus prieš atliekant metodą, tokius kaip audinio fiksavimas, įdėjimas ir išpjaustymas. Todėl reikia atsižvelgti į tai, kad atliekant šiuos veiksmus identifikuojama struktūra gali būti pažeista ir duoti klaidingus neigiamus rezultatus, net jei ji yra.

Nepaisant to, svarbu tinkamai atlikti ankstesnį audinio fiksavimą, nes tai apsaugo nuo autolizės ar ląstelių sunaikinimo. Tam naudojamos cheminės reakcijos su organiniais tirpikliais, tokiais kaip: formaldehidas arba glutaraldehidas.

Audinys įtraukiamas taip, kad pjaustant jis išlaikytų tvirtumą ir apsaugotų jį nuo deformacijos. Galiausiai pjūvis atliekamas mikrotomu mėginių tyrimui optinės mikroskopijos būdu.

Be to, prieš atliekant histocheminį dažymą, rekomenduojama į kiekvieną bandymo partiją įtraukti teigiamą išorinę arba vidinę kontrolę. Taip pat kaip specifinių dažų naudojimas tiriamoms struktūroms.

Histocheminės dėmės

Nuo histocheminių metodų atsiradimo iki šių dienų buvo naudojamas platus dėmes, įskaitant dažniausiai naudojamas, tokias kaip: periodinė rūgštis Schiff (PAS), Grocott, Ziehl-Neelsen ir Gram.

Be to, rečiau buvo naudojami kiti dažai, tokie kaip Indijos rašalas, orceinas ar Massono trichromo dėmė.

Periodinis rūgščių šifras (PAS)

Tokiu dažymu gali būti stebimos molekulės, turinčios daug angliavandenių, tokios kaip: glikogenas ir mucinas. Tačiau jis taip pat naudingas mikroorganizmų, tokių kaip grybeliai ir parazitai, identifikavimui. Be tam tikrų struktūrų (rūsio membranos) odoje ir kituose audiniuose.

Šio dažymo pagrindas yra tai, kad dažiklis oksiduoja anglies ryšį tarp dviejų šalia esančių hidroksilo grupių. Dėl to išsiskiria aldehido grupė, ir tai aptinkama pagal Schiffo reagentą, suteikiantį purpurinę spalvą.

Šifo reagentą sudaro bazinis fuksinas, natrio metabisulfitas ir druskos rūgštis, šie komponentai yra atsakingi už purpurinę spalvą, kai yra aldehido grupės. Priešingu atveju susidaro bespalvė rūgštis.

Spalvos intensyvumas priklausys nuo hidroksilo grupių, esančių monosachariduose, kiekio. Pavyzdžiui, grybeliuose, rūsio membranose, mucinuose ir glikogene spalva gali būti nuo raudonos iki purpurinės, o branduoliai nusidažo mėlyna spalva.

Grokotas

Tai viena iš dėmių, kurių jautrumas nustatant grybelius parafino įterptuose audiniuose yra didžiausias. Tai leidžia identifikuoti įvairias grybelių struktūras: hyfae, sporas, endosporos, be kita ko. Todėl mikozės diagnozei ji laikoma įprastine dėme.

Jis ypač naudojamas diagnozuojant plaučių mikozes, tokias kaip pneumocistozė ir aspergiliozė, kurią sukelia atitinkamai kai kurie Pneumocystis ir Aspergillus genčių grybeliai.

Šiame tirpale yra sidabro nitrato ir chromo rūgšties, pastarosios yra fiksatoriai ir dažikliai. Priežastis yra ta, kad ši rūgštis sukelia mukopolisaharidų, esančių grybelinėse struktūrose, pavyzdžiui, grybelių sienelėse, hidroksilo grupes oksidaciją į aldehidus.

Galiausiai tirpale esantis sidabras oksiduojasi aldehidais, sukeldamas juodą spalvą, vadinamą argentafino reakcija. Taip pat gali būti naudojami kontrastiniai dažai, tokie kaip šviesiai žalia, todėl grybelinės struktūros bus pastebimos juodos spalvos su šviesiai žaliu fonu.

Ziehl-Neelsen

Šis dažymas pagrįstas kai kurių mikroorganizmų, tokių kaip Nocardia, Legionella ir Mycobacterium, atsparumu iš dalies ar visiškai rūgšties ir alkoholio kiekiu.

Rekomenduojama naudoti šią dėmę, nes anksčiau minėtų mikroorganizmų ląstelių sienelėse yra sudėtingų lipidų, kurie trukdo dažams prasiskverbti. Ypač mėginiuose iš kvėpavimo takų.

Jame naudojami stiprūs dažikliai, tokie kaip karbolas fuksinas (pagrindinis dažiklis), ir kaitinamas taip, kad mikroorganizmas galėtų išlaikyti dažiklį ir neišbluktų spalvos su rūgštimis ir alkoholiais. Galiausiai struktūros, kurių spalva pasikeitė, dažymas atliekamas metileno mėlynos spalvos tirpalu.

Raudonai nusidažiusiose struktūrose pastebimas atsparumas rūgštims ir alkoholiui, o blukimui neatsparios struktūros - mėlynos spalvos.

Gramų ir kinų rašalas

Gramas yra labai naudinga dėmė diagnozuojant bakterines ir grybelines infekcijas, be kita ko. Šis dažymas leidžia atskirti gramneigiamus ir gramneigiamus mikroorganizmus, aiškiai parodant skirtumus, kurie yra ląstelės sienos sudėtyje.

Nors Indijos rašalas yra dėmė, naudojama kontrastuojančioms struktūras, kuriose yra polisacharidų (kapsulės). Taip yra todėl, kad aplinkoje susidaro žiedas, galimas Cryptococcus neoformans organizme.

Orceinas

Tokiu dažymu dažomos įvairių ląstelių elastinės skaidulos ir chromosomos, leidžiančios įvertinti pastarųjų brendimo procesą. Dėl šios priežasties jis buvo labai naudingas atliekant citogenetinius tyrimus.

Tai pagrįsta dažų įsisavinimu, kai neigiamą krūvį turi molekulės, tokios kaip DNR, esančios daugybės ląstelių branduoliuose. Taigi jie dažomi nuo mėlynos iki tamsiai violetinės spalvos.

Masson trichromas

Ši dėmė naudojama kai kuriems mikroorganizmams ar medžiagoms, kurių sudėtyje yra melaninių pigmentų, nustatyti. Tai yra mikozių, kurias sukelia mažakraujystės grybeliai, feohifomikozė ir juodųjų grūdų ececetoma, atvejai.

Galutinės mintys

Pastaraisiais metais kuriant naujus diagnostikos metodus, susijusius su histochemija, tačiau jie yra susiję su kitais pagrindais ar principais, padaryta daug pažangos. Šios metodikos turi skirtingą tikslą, kaip ir imunohistochemijos ar enzimohistochemijos atveju.

Nuorodos

1. „Acuña U“, Elguero J. Histoquímica. Chem. 2012; 108 (2): 114–118. Galima rasti: are.iqm.csic.es
2. Mestanza R. PAS, Grocott ir Ziehl-Neelsen histocheminių dėmių, naudojamų mikroorganizmams identifikuoti, dažnis, atliktas 2015 m. Eugenio Espejo specialiosios ligoninės Patologinės anatomijos tarnyboje .. Ekvadoro centrinis universitetas, Kitas; 2016. Prieinamas adresu: dspace.uce.edu
3. Tapia-Torres N, Paz-Pérez-Olvera C, Román-Guerrero A, Quintanar-Isaías A, García-Márquez E, Cruz-Sosa F. Histochemija, bendras fenolio kiekis ir antioksidacinis aktyvumas leányos lapuose ir medienoje. glaucescens Kunth (Lauraceae). Mediena ir miškai. 2014; 20 (3): 125–137. Galima rasti: redalyc.org
4. Colares, MN, Martínez-Alonso, S, Arambarri, AM. Tarenaya hassleriana (Cleomaceae), mediciniškai svarbios rūšies, anatomija ir histochemija. Lotynų Amerikos ir Karibų jūros regiono vaistinių ir aromatinių augalų biuletenis 2016 m .; 15 (3): 182–191. Galima rasti: redalyc.org
5. Bonifazas A. Pagrindinė medicinos mikologija. 4-asis leidimas. Meksika: „McGraw-Hill Interamericana“ redaktoriai, SA de CV 2012.
6. Silva Diego Filipe Bezerra, Santos Hellen Bandeira de Pontes, León Jorge Esquiche, Gomes Daliana Queiroga de Castro, Alves Pollianna Muniz, Nonaka Cassiano Francisco Weege. Klinikinė patologinė ir imunohistocheminė liežuvio spindžio plokščiųjų ląstelių karcinomos analizė: retas atvejis. Einšteinas (San Paulas) 2019 m .; 17 (1): eRC4610. Galima įsigyti: scielo.br