TARPININKAVIMAS: PAGRINDIMAS, PARUOŠIMAS, NAUDOJIMAS IR APRIBOJIMAI - BIOLOGIJA - 2025

APIE arba gliukozės fermentacijos terpė yra pusiau kieto agaro, specialiai sukurta oksidacinio ir fermentacijos metabolizmas angliavandenių svarbi grupė, išskyrus Enterobacteriaceae mikroorganizmų, vadinamas ne enterinis gramneigiamų bacilos tyrimas.

Jį sukūrė Hugh ir Leifson; šie tyrinėtojai suprato, kad įprastos rūgšties gamybos iš angliavandenių tyrimo priemonės nebuvo tinkamos šiai specifinei bakterijų grupei.

A. Komercinės terpės bazinis pagrindas. B. Vamzdeliai su OF terpe. Šaltinis: A ir B Nuotraukos padarytos magistrantūros. Marielsa Gil.

Taip yra todėl, kad neelektriniai gramneigiami lazdelės, priešingai nei enterobakterijos, paprastai gamina mažą kiekį rūgščių.

Šia prasme OF terpė pasižymi ypatingomis savybėmis, kurios gali aptikti nedidelius susidarančių rūgščių kiekius tiek oksidaciniu, tiek fermentacijos būdu. Šie skirtumai yra susiję su peptonų, angliavandenių ir agaro kiekiu.

Šioje terpėje yra mažiau peptonų ir didesnė angliavandenių koncentracija, todėl sumažėja produktų, kurie šarmina terpę dėl baltymų apykaitos, ir padidėja rūgščių gamyba dėl angliavandenių vartojimo.

Kita vertus, sumažėjęs agaro kiekis skatina visos terpėje susidariusios rūgšties pasiskirstymą, be to, leidžia mums stebėti judrumą.

OF terpę sudaro peptonas, natrio chloridas, bromtimolio mėlynasis, dikalio fosfatas, agaras ir angliavandeniai. Labiausiai paplitęs angliavandenis yra gliukozė, tačiau galima naudoti ir kitus, pagal kuriuos norima mokytis, pvz., Laktozę, maltozę, ksilozę.

Pagrindas

Kaip ir bet kurioje kultūrinėje terpėje, OF terpėje turi būti maistinių medžiagų, užtikrinančių bakterijų dauginimąsi; šios medžiagos yra peptonai.

Savo ruožtu angliavandeniai suteikia energijos ir tuo pat metu yra naudojami tiriant mikroorganizmo elgesį su juo, tai yra, leidžia bakterijas klasifikuoti kaip oksidacinį, fermentacinį ar nesacharolitinį organizmą.

OF terpėje yra 1: 5 peptono / angliavandenių santykis, palyginti su 2: 1 įprastine terpe. Tai užtikrina, kad šarminių aminų, susidariusių dėl peptonų skilimo, kiekis neutralizuotų silpnų rūgščių susidarymą.

Kita vertus, terpėje yra natrio chlorido ir dikalio fosfato. Šie junginiai osmosiškai stabilizuoja terpę ir atitinkamai reguliuoja pH. Bromtimolio mėlynasis yra pH indikatorius, kuris terpės spalvą keičia iš žalios į geltoną ir susidaro rūgštis.

Kai kurie mikroorganizmai gali naudoti angliavandenius per oksidacijos ar fermentacijos būdus, o kiti - ne.

Tai priklauso nuo kiekvieno mikroorganizmo savybių. Pavyzdžiui, kai kurie griežti aerobiniai mikroorganizmai gali oksiduoti tam tikrus angliavandenius, o fakultatyvūs anaerobai gali oksiduotis ir fermentuoti priklausomai nuo juos supančios aplinkos, o kiti neoksiduoja ir nefermentuoja angliavandenių (asakarolitinių).

Galiausiai yra CDC rekomenduotos terpės modifikacija, kurioje yra speciali OF bazė, kurios indikatoriumi yra raudonasis fenolis.

Oksidacijos procesas

Gliukozės oksidacijos procesui, kaip ir fermentacijos procesui, nereikia fosforilinti gliukozės. Tokiu atveju aldehido grupė oksiduojama į karboksilo grupę, gaunant gliukono rūgštį. Tai savo ruožtu oksiduojasi iki 2-ketoglukono.

Pastaroji arba kaupiasi, arba suskyla iki dviejų piruvo rūgšties molekulių. Ši sistema reikalauja, kad galutinis elektronų akceptorius būtų deguonis arba koks nors neorganinis junginys.

Rūgštys gamina šį kelią silpniau, nei gaunama fermentuojant.

Fermentacijos procesas

Kad gliukozės fermentacija vyktų kokiu nors iš galimų būdų, ji pirmiausia turi būti fosforilinta ir virsta gliukozės-6-fosfatu.

Gliukozės fermentacija gali vykti keliais keliais, iš kurių pagrindinis yra Embden-Meyerhof-Parnas maršrutas, tačiau jie taip pat gali vykti Entner-Doudoroff keliu arba Warburg-Dickens heksozės monofosfato keliu, dar vadinamu maršrutu. nuo pentozių skilimo.

Pasirinktas kelias priklausys nuo fermentinės sistemos, kurią turi mikroorganizmas.

Via Embden-Meyerhof- Parnas

Fermentuojant gliukozę per Embden-Meyerhof-Parnas kelią, ji suskaidoma į dvi triose esančias molekules ir vėliau suskaidoma į įvairius anglies junginius, kol susidaro glicerraldehido-3-fosfatas. Iš ten atsiranda tarpinė medžiaga, kuri yra piruvo rūgštis.

Iš to susidarys įvairių rūšių mišrios rūgštys, kurios gali skirtis priklausomai nuo rūšies.

Ši sistema atsiranda trūkstant deguonies ir jai reikalingas organinis junginys kaip galutinis elektronų akceptorius.

Entner-Doudoroff kelias

Fermentuojant gliukozę Entner-Doudoroff keliu, gliukozės 6-fosfatas tampa gliukono-ᵼ-lakton-6-fosfatu, o iš ten jis oksiduojamas į 6-fosfo-gliukonatą ir 2-keto-3-deoksi-6- fosforglikonato, kad galutinai susiformuotų piruvato rūgštis. Šiam keliui reikia deguonies, kad įvyktų glikolizė.

Pentozės skilimo kelias arba Warburg-Dickens Hexoxa monofosfato kelias

Šis maršrutas yra dviejų iš aukščiau pateiktų hibridų junginys. Jis prasideda panašiai kaip Entnerio-Doudoroffo kelias, tačiau vėliau glicerraldehidas-3-fosfatas susidaro kaip piruvos rūgšties pirmtakas, kaip pasitaiko „Embden-Meyerhof-Parnas“ kelyje.

Paruošimas

Sverti:

2 g peptono

5 g natrio chlorido

10 g D-gliukozės (arba angliavandenių, kuriuos reikia paruošti)

0,03 g bromtimolio mėlynos spalvos

3 gr agaro

0,30 g dikalio fosfato

1 litras distiliuoto vandens.

Sumaišykite visus junginius, išskyrus angliavandenius, ir ištirpinkite 1 litre distiliuoto vandens. Kaitinkite ir purtykite, kol visiškai ištirps.

Atvėsus iki 50 ° C, pridedama 100 ml 10% gliukozės (filtruojama).

Aseptiškai paskirstyti 5 ml terpės į mėgintuvėlius su medvilnės dangteliu ir 15 minučių autoklavu laikyti esant 121 ° C temperatūrai, esant 15 svarų slėgiui.

Leiskite sukietėti vertikalioje padėtyje.

Terpės pH turėtų būti 7,1 Paruoštos terpės spalva yra žalia.

Laikyti šaldytuve.

Programos

OF terpė yra ypatinga terpė mikroorganizmo metaboliniam elgesiui su angliavandeniu nustatyti. Ypač tiems, kurie sudaro mažai, silpnas arba neturi rūgščių.

Sėjama

Kiekvienam mikroorganizmui reikia 2 OF mėgintuvėlių, abu turi būti pasėti tiriamu mikroorganizmu. Kolonija imama tiesia rankena ir vamzdžio centre padaryta punkcija, nepasiekiant dugno; Galima atlikti keletą punkcijų, jei nėra intereso stebėti judrumą.

Į vieną mėgintuvėlį įpilamas sterilus skystas vazelino arba sterilaus išlydyto parafino (maždaug 1–2 ml) sluoksnis ir paženklinama raide „F“. Kitas mėgintuvėlis paliekamas originalus ir pažymėtas „O“. Abu mėgintuvėliai inkubuojami 35 ° C temperatūroje ir stebimi kasdien iki 3–4 dienų.

Interpretacija

Metabolizmas ir dujų gamyba

Lentelė: Mikroorganizmų klasifikacija pagal jų elgesį atviruose (oksidaciniuose) ir uždarytuose (fermentuojančiuose) mėgintuvėliuose

Šaltinis: Sudarė autorius MSc. Marielsa gil

Dujos stebimos susidarius burbulams arba išstumiant agarą.

Reikėtų pažymėti, kad organizmas, kuris tik oksiduoja gliukozę, bet jos nefermentuoja, negalės fermentuoti kitų angliavandenių, bet kokiu atveju tai tik oksiduos. Todėl šioje situacijoje uždarytas mėgintuvėlis kitų angliavandenių tyrimui bus praleistas.

Motilumas

Be to, judrumas gali būti matomas tarpinėje terpėje.

Teigiamas judrumas : augimas, neapsiribojantis inokuliacijos sritimi. Vamzdžio šonai auga.

Neigiamas judrumas : augimas tik pradiniame pasėlyje.

QA

Kaip kokybės kontrolę galima naudoti šias padermes: Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa ir Moraxella sp. Laukiami rezultatai:

1. coli: gliukozės fermentatorius (tiek geltoni, tiek putojantys vamzdeliai).
2. aeruginosa: Gliukozės oksidatorius (atviras geltonas vamzdelis ir žalias arba mėlynas sandariklis).
3. Moraxella sp: ne sacharolitinis (žalias arba mėlynas atviras vamzdelis, žaliai uždarytas vamzdelis).

Apribojimai

- Kai kurie mikroorganizmai negali augti OF terpėje. Tokiais atvejais bandymas kartojamas, tačiau į terpę pridedama 2% serumo arba 0,1% mielių ekstrakto.

-Oksidacijos reakcijos dažnai stebimos tik arti paviršiaus, o likusi terpė gali išlikti žalia, tokiu pat būdu ji laikoma teigiama.

Nuorodos

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinė diagnostika. 5-asis leidimas Redakcija Panamericana SA Argentina.
2. „Forbes B“, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey ir Scotto mikrobiologinė diagnozė. 12 red. Redakcija Panamericana SA Argentina.
3. Macas Faddinas J. (2003). Biocheminiai tyrimai klinikinės svarbos bakterijoms nustatyti. 3-asis leidimas Redakcija Panamericana. Buenos Airės. Argentina.
4. Francisco Soria Melguizo laboratorijos. 2009. OF Gliukozės terpė. Galima rasti: http://f-soria.es
5. „Conda Pronadisa“ laboratorijos. Gliukozės terpės. Galima rasti: condalab.com
6. BD laboratorijos. 2007. OF bazinės terpės. Galima rasti: bd.com