VIDUTINIS MIO: PAGRINDAS, PARUOŠIMAS IR PANAUDOJIMAS - BIOLOGIJA - 2025

MIO vidutinio yra biocheminis tyrimas naudojamas pagalbos į rūšių, priklausančių Enterobacteriaceae šeimos bakterijų identifikavimui. Jis yra gana maistingas ir yra sudarytas iš gliukozės, mielių ekstrakto, peptono, tripteino, L-ornitino hidrochlorido, violetinio bromkrezolio ir agaro.

Jo akronimo (MIO) reikšmė apibūdina kiekvieną parametrą, kurį galima pastebėti šioje terpėje; judrumas, indolis ir ornitinas. Motilumas yra mikroorganizmo sugebėjimas judėti dėl žvynelinės buvimo. Kad būtų galima pastebėti šią savybę, terpės konsistencija turi būti pusiau kieta, todėl preparate yra mažiau agaro.

Rezultatų interpretavimo MIO terpėje brėžiniai. Šaltinis: Parengė autorė MSc. Marielsa gil

Indolio gamyba parodo fermento triptofanazės, veikiančios aminorūgštį triptofanas, poreikį naudoti atskleidžiantį reagentą, kad indolio gamyba būtų matoma.

Galiausiai, ornitinas nustato, ar bakterija sugeba dekarboksilinti aminorūgštį, tai yra, ar ji turi fermento orinitino dekarboksilazę.

Pagrindas

Peptonas, mielių ekstraktas ir tripteinas

Šie elementai prisideda prie šios terpės maistinės galios. Jie tarnauja kaip maistinių medžiagų ir būtinų aminorūgščių šaltinis bakterijų vystymuisi.

Be to, tripteinas yra triptofano šaltinis, kuris parodo fermento triptofanazės, kuris skaido triptofaną redukciniu deaminacija, atpalaiduodamas indolį, piruvo rūgštį, amoniaką ir energiją, buvimą.

Indolis yra bespalvis, todėl jo buvimas atskleidžiamas pridedant penkis lašus Ehrlich arba Kovacs reagento, abu kartu su p-dimetilaminobenzaldehidu.

Šio junginio aldehido grupė reaguoja su indoliu, agaro paviršiuje susidaro fuksija raudonos spalvos žiedo formos produktas.

Bet kokie spalvos pėdsakai turėtų būti laikomi teigiamais teste. Įrodymai turėtų būti nedelsiant perskaityti, nes laikui bėgant spalva blogėja.

Be to, šis tyrimas turėtų būti atskleistas po to, kai pastebimi ornitino judrumo ir dekarboksilinimo rezultatai.

Interpretacija

Teigiamas testas: raudonos fuksijos žiedo formavimas, įlašinus lašus Kovacs reagento.

Neigiamas testas: nesusidaro žiedas.

Motilumas

Bakterijų gebėjimas judėti bus akivaizdus stebint drumstą terpę arba aplink pradinę inokuliaciją besidriekiančią storą augimo liniją.

Neigiamas judrumo testas bus įrodytas stebint ploną augimo liniją, o viskas aplink ją bus be augimo.

Svarbu, kad motoroleris būtų perskaitytas prieš atskleidžiant indolį, nes pridėjus reagento, visa terpė užtemdo.

Judriose, bet lėtai augančiose bakterijose sunku įrodyti jų judrumą šia terpe. Tokiu atveju rekomenduojama naudoti kitus testus ar metodus, tokius kaip vidutinio judrumo arba lašinamojo lašo metodas.

Gliukozė

Gliukozė yra fermentuojamas angliavandenis, kuris ne tik suteikia energijos, bet ir rūgština aplinką, būtiną aminorūgšties ornitino dekarboksilinimo sąlygai.

Visada turi vykti gliukozės fermentacija, pradedant nuo principo, kad visos bakterijos, priklausančios Enterobacteriaceae šeimai, fermentuoja gliukozę.

L-ornitinas

Jei bakterijos gamina fermentą ornitino dekarboksilazę, tai gali veikti, kai terpė parūgštinta fermentuojant gliukozę.

Fermentas ornitino dekarboksilazė veikia aminorūgšties karboksilo grupę, sukurdamas aminą, vadinamą putresinu, kuris vėl šarmina terpę.

Šį testą reikia perskaityti po 24 valandų inkubacijos, nes jei bandysite perskaityti anksčiau, galite klaidingai interpretuoti testą su klaidingu neigiamu.

Reikėtų prisiminti, kad pirmoji pasireiškianti reakcija yra gliukozės fermentacija, todėl terpė pradinėje fazėje (per pirmąsias 10–12 valandų) pasidaro geltona. Jei vėliau įvyksta ornitino dekarboksilinimas, terpė taps purpurinė.

Prieš atskleidžiant indolį, svarbu išaiškinti ornitino dekarboksilinimo testą, nes pridėjus Kovacs reagento, keičiasi terpės spalva.

Interpretacija

Neigiamas testas: vidutiniškai geltonos arba geltonos spalvos.

Teigiamas testas: vidutinis visiškai purpurinis.

PH indikatorius

Tokiu atveju naudojama bromkrezolio violetinė spalva; atsakingas už atskleidimą, kai terpėje pasikeičia pH. Parūgštinęs, indikatorius pasidaro geltonas, o šarmindamas - violetiniu.

Sėjimo ir vystymosi technika

MIO terpei pasėti naudojama tiesi kilpa arba adata ir su ja surenkama tiriamos kolonijos dalis.

MIO viduryje tiesia linija atliekamas gilus pradūrimas. Nepatartina daryti dvigubos punkcijos, nes tai gali suteikti klaidingą judrumo vaizdą, jei punkcijos nėra atliekamos toje pačioje vietoje.

Inkubuokite 24–48 valandas 37 ° C temperatūroje aerobiozėje. Pažvelkite į rezultatus tokia tvarka: judrumas, ornitino dekarboksilinimas ir pagaliau atskleiskite indolį.

Patartina aseptiškai išimti 2 ml terpės, perpilti ją į sterilų mėgintuvėlį ir ten atlikti indolio testą, kad likusį originalų mėgintuvėlį būtų galima inkubuoti dar 24 valandas, jei indo vėl atsiskleistų, jei jis bus neigiamas.

Indolas vystomas taip: 3–5 lašai Kovacs reagento įpilama į MIO terpę ir intensyviai maišoma. Stebima, ar atsiranda raudonos fuksijos žiedas, ar ne.

Paruošimas

MIO terpė

Pasverkite 31 g MIO terpės ir ištirpinkite viename litre distiliuoto vandens.

Kaitinkite, kol mišinys užvirs vieną minutę, dažnai purtant, kol agaras visiškai ištirps. Paskirstykite 4 ml terpės į 13/100 mėgintuvėlius su medvilnės dangteliais.

Sterilizuokite autoklave 121 ° C temperatūroje 15 minučių. Išimkite iš autoklavo ir palikite tiesiai stovėti lentynėlėje taip, kad susidarytų pusiau kietas blokas.

Laikyti šaldytuve 2–8 ° C temperatūroje. Prieš sėjant bakterijų kamieną, leiskite jam sušilti.

Dehidratuota terpė yra smėlio spalvos, o paruoštos terpės spalva yra šiek tiek opalinė violetinė.

Galutinis paruoštos terpės pH yra 6,5 ​​± 0,2

Terpė tampa geltona esant rūgščiam pH ir purpurinė, kai šarminis pH.

„Kovacs“ reagentas (indolio testo kūrėjas)

Šis reagentas paruošiamas taip:

Išmatuojama 150 ml amilo, izoamilo arba butilo alkoholio (bet kurio iš trijų). Jame ištirpinama 10 g p-dimetilaminobenzaldehido. Po to lėtai pridedama 50 ml koncentruotos druskos rūgšties.

Paruoštas reagentas yra bespalvis arba šviesiai geltonas. Jis turėtų būti laikomas gintaro buteliuose ir laikomas šaldytuve. Tamsiai ruda spalva rodo jo pablogėjimą.

Taip pat Kovacso reagentą galima pakeisti Ehrlicho reagentu. Pastarajam, jautresniam, geriau atskleisti indolį bakterijose, kurios jį gamina nedideliais kiekiais, pavyzdžiui, kai kuriuose nefermentuojančiuose gramneigiamuose lazdelėse ir tam tikruose anaerobuose.

Naudokite

Ši terpė yra tyrimas, papildantis daugybę biocheminių bandymų, siekiant nustatyti bakterijas, priklausančias Enterobacteriaceae šeimai.

Ornitino dekarboksilinimo duomenys naudojami norint atskirti Shigella sonnei, kurio testas yra teigiamas, nuo Shigella boydii, Shigella flexneri ir S. dysenterieae, kurio testas neigiamas.

Tai taip pat skiria Klebsiella gentį, kurios testai neigiami, nuo Enterobacter genties, kur dauguma jos rūšių yra teigiamos.

Šaltinis: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinė diagnostika. 5-asis leidimas Redakcija Panamericana SA Argentina.

QA

Kiekvieną kartą paruošiant MIO terpės partiją, galima atlikti kontrolinį testą. Tam yra naudojami žinomi arba sertifikuoti padermės, kad būtų galima stebėti terpės elgesį.

Padermės, kurias galima naudoti, yra Escherichia coli, Morganella morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes ir Proteus mirabilis.

Laukiami rezultatai yra E. coli ir M. morganii. Danas M: +, I: + ir O: +.

Visi Klebsiella pneumoniae neigiami (M: -, I: -, O :-). Proteus mirabilis ir Enterobacter aerogenes suteikia M: + I: - ir O: +.

Nuorodos

1. Macas Faddinas J. (2003). Biocheminiai tyrimai klinikinės svarbos bakterijoms nustatyti. 3-asis leidimas Redakcija Panamericana. Buenos Airės. Argentina.
2. „Forbes B“, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey ir Scotto mikrobiologinė diagnozė. 12 red. Redakcija Panamericana SA Argentina.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinė diagnostika. 5-asis leidimas Redakcija Panamericana SA Argentina.
4. „Britannia“ laboratorijos. „MIO Medio 2015.“ prieinamas: britanialab.com
5. BD laboratorijos. Vidutinis BBL judrumo indolio ornitino (MIO) kiekis. 2007. Galima rasti: bd.com
6. „Valtek“ laboratorijos. Vidutinis MIO judrumas, indolis, ornitinas. 2010.Automa: andinamedica.com