VIDUTINIS SIM: PAGRINDAS, PARUOŠIMAS IR PANAUDOJIMAS - BIOLOGIJA - 2025

SIM vidutinio yra pusiau kietas ir skirtumas agaras, specialiai sukurta siekiant padėti nustatyti kai kurių bakterijų, ypač Enterobacteriaceae. Jį sudaro tripteinas, peptonas, geležies sulfatas, amonio sulfatas, natrio tiosulfatas ir agaras.

Ši terpė leidžia atlikti tris svarbius testus: gaminti vandenilio sulfidą (H ₂ S), sudaryti indolį ir judrumą, taigi sutrumpinti SIM. Dėl didelio naudingumo jis negali nebūti bakteriologijos laboratorijoje.

A. Komercinė SIM terpė B. SIM H2S (-), indolo (-) ir judrumo (+) testas bei SIM H2S (+), indolo (-), judrumo (+) testas Šaltinis: A. Autoriaus padaryta nuotrauka Magistrantūra. Marielsa Gil B. Mfloayza

Skirtingai nuo kitų terpių, ji turi būti pusiau kieta, kad būtų galima aptikti kai kurių bakterijų judėjimą. Šia prasme šis testas labai gerai tinka enterobakterijoms, bet ne fermentuojant gramneigiamus strypus, kur pirmenybė teikiama kitiems metodams, pavyzdžiui, kabinamajam lašeliui.

SIM laikmena leidžia atskirti tam tikras specifines savybes, kurios apibūdina kai kurias bakterijas kitų atžvilgiu. Pavyzdžiui, Escherichia coli išsiskiria tuo, kad yra H ₂ S (-), indolas (+) ir judrumas (+), o Proteus mirabilis yra H ₂ S (+), indolis (-), judrumas (+).

Pagrindas

Tai kultūrinė terpė, kuri laikoma diferencine, nes jos paskirtis išskiria mikroorganizmus, galinčius gaminti vandenilio sulfidą, nuo tų, kurie neturi; jis taip pat išryškina tuos, kurie sudaro indolį nuo triptofano, nuo tų, kurie jo neturi, ir galiausiai atskiria judrias bakterijas nuo nejudrių.

Maitinimo šaltinis

Kaip ir bet kuri kultūrinė terpė, ji turi elementų, kurie aprūpina būtinomis maistinėmis medžiagomis, kad galėtų vystytis nereikalingi mikroorganizmai. Šiuos elementus vaizduoja peptonai ir tripteinas.

Mikroorganizmo vystymasis terpėje yra labai svarbus, kad būtų galima pastebėti, ar yra ar nėra savybių, kurias ši terpė vertina.

Vandenilio sulfido gamyba

Sutrumpinimo SIM raidė S nurodo vandenilio sulfido (H ₂ S) gamybą . Bakterijos, galinčios sudaryti vandenilio sulfidą, sierą paims iš natrio tiosulfato.

Vieną kartą H ₂ S -colourless dujoms yra suformuojamas, jis reaguoja su geležies druskos terpėje, formavimo geležies sulfido, aiškiai matoma (juoda nuosėdoms). Bakterijos, nesudarančios H ₂ S, paliekamos originalios spalvos terpės (smėlio spalvos).

Juodųjų nuosėdų buvimas gali trukdyti aiškinti judrumą. Tačiau žinoma, kad dauguma H ₂ S gaminančių enterobakterijų yra teigiamai judrios, tokios kaip Salmonella, Proteus ir Citrobacter. Be to, juodosios nuosėdos, apimančios beveik visą terpę, rodo teigiamą judrumą.

Indolo susidarymas

Antroji akronimo SIM raidė yra „I“, reiškianti indolo susidarymą.

Šia prasme tripteinas ne tik yra maistinių medžiagų šaltinis, bet ir atlieka dar vieną pagrindinę funkciją. Šiame peptone gausu aminorūgšties, vadinamos triptofanu, todėl jis gali parodyti bakterijas, gaminančias triptofanazę.

Šis fermentas yra atsakingas už aminorūgšties triptofano skaidymą, todėl susidaro indolis (bespalvė medžiaga), piruvo rūgštis ir amonis.

Štai kodėl norint parodyti šią reakciją, reikia pridėti atskleidžiančią medžiagą (Ehrlicho reagentą arba Kovaco reagentą). Bet kuris reaguoja su indoliu, agaro paviršiuje sudarydamas raudonos fuksijos žiedo pavidalo medžiagą. Jei atsiranda fuksijos žiedas, indolo testas aiškinamas kaip teigiamas.

Bakterijos, neturinčios šio fermento, nesudarys žiedo, ir jis aiškinamas kaip neigiamas indolio testas.

Svarbu atkreipti dėmesį, kad indolo testas turėtų būti aiškinamas paskutinis, nes įpylus reagento, terpė tampa drumsta, todėl sunku pastebėti judrumą.

Motilumas

Pagaliau žodžio SIM raidė „M“ reiškia judrumą. Norint įvertinti judrumą, ši terpė yra strategiškai pusiau kieta, nes ši savybė yra būtina norint įvertinti, ar nėra bakterijų judėjimo, ar ne. Bakterijos, turinčios flagella, yra tos, kurios pateikia šį teigiamą testą.

Teigiamas testas bus akivaizdus pastebėjus drumstumą tiek pradiniame sėjimo taške, tiek aplink jį. Tuo tarpu nemotorinės bakterijos vystosi tik pradinio sėjimo kelyje.

Paruošimas

Vidutinė SIM kortelė

Pasveriama 30 g dehidratuotos terpės ir ištirpinama litre distiliuoto vandens. Mišinys paliekamas pastovėti 5 minutes ir tada kaitinamas iki virimo, dažnai maišant, kol visiškai ištirps.

Mišinį paskirstyti mėgintuvėliuose su medvilnės dangteliais ir 15 minučių autoklavu laikyti 121 ° C temperatūroje. Išimkite vamzdelių stovą iš autoklavo ir leiskite jam sukietėti vertikalioje padėtyje, kad terpė būtų bloko formos.

Jo išsaugojimui jis laikomas šaldytuve iki naudojimo. Paruoštos terpės galutinis pH turi būti 7,3 ± 0,2.

Inokuliuojant terpę, ji turi būti kambario temperatūros. Vidurinė spalva yra smėlio spalvos.

Kovaco reagentas

Išmatuokite 150 ml amilo, izoamilo arba butilo alkoholio. (Naudokite vieną iš trijų paminėtų).

Ištirpinkite 10 g p-dimetilaminobenzaldehido. Tada lėtai įpilkite 50 ml koncentruotos druskos rūgšties.

Paruoštas naudoti reagentas yra bespalvis arba šviesiai geltonas. Jis turėtų būti laikomas gintaro buteliuke ir laikomas šaldytuve. Nenaudokite, jei jis pasidaro tamsiai rudas; tai rodo, kad jis yra pažeistas. Šis reagentas yra tinkamiausias, kai kalbama apie enterobakterijas.

Erlicho reagentas

Pasverkite 2 g p-dimetilaminobenzaldehido ir ištirpinkite 190 ml absoliutaus etilo alkoholio ir lėtai sumaišykite su 40 ml koncentruotos druskos rūgšties. Tokiu pat būdu laikykite Kovac reagentą. Ehrlicho reagentas dažniausiai naudojamas nefermentuojančioms ir anaerobinėms bakterijoms.

Programos

SIM terpė labai naudojama bakteriologijos laboratorijose. Jo pranašumas yra tas, kad identifikuojant enterobakterijas, viename mėgintuvėlyje galima pastebėti tris pagrindines savybes.

Sėjama

Tinkamas būdas pasėti šią terpę yra adata, su kuria paimama tiriamos grynos kolonijos dalis ir įdedama vertikaliai į terpės centrą. Turėtų būti atliktas vienas įdubimas. Pradurta dalis neturi pasiekti vamzdžio dugno, teisinga uždengti tik du trečdalius gylio.

Nerekomenduojama pakartoti sėjimo, nes tai gali lemti klaidingą teigiamo judėjimo interpretaciją. Pasėjama terpė aerobiškai inkubuojama 37 ° C temperatūroje 24 valandas.

Kai laikas baigėsi, jis pastebėjo, ar ten buvo gamybos H ₂ S ir judrumas yra skaityti. Galiausiai indolis atskleidžiamas, pridedant 3–4 lašus Ehrlicho arba Kovaco reagento, švelniai sumaišykite ir interpretuokite.

Šaltinis: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinė diagnostika. 5-asis leidimas Redakcija Panamericana SA Argentina.

QA

Kaip sterilumo kontrolė, vienas arba du mėgintuvėliai 24 valandas inkubuojami be inokuliacijos krosnyje 37 ° C temperatūroje. Tikimasi, kad po šio laiko nei augimas, nei spalvos pasikeitimas.

Kaip kokybės kontrolė gali būti naudojami žinomi sertifikuoti štamai, tokie kaip: Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.

Laukiami rezultatai: Escherichia coli H ₂ S neigiamas, indolio ir teigiamas judrumas, Enterobacter aerogenes tik teigiamas judrumas, Salmonella typhimurium H ₂ S ir teigiamas judrumas, su neigiamu indoliu. Visi proteus vulgaris teigiami, o Klebsiella pneumoniae ir Shigella - visi neigiami.

Apribojimai

- Kai kurios Morganella morganii padermės, be kitų padermių, gali gaminti rusvą pigmentą šioje terpėje dėl melanino gamybos. Tai neturėtų būti painiojama su geležies sulfido nuosėdomis. Nepatyrusiems specialistams ši situacija gali duoti klaidingų teigiamų rezultatų aiškinant H ₂ S testą .

- Griežtos aerobinės bakterijos augs tik vamzdelio paviršiuje, todėl sunku suprasti jų judrumą.

Nuorodos

1. BD laboratorijos. „BBL SIM Medium“. 2008. Galima rasti: bd.com
2. Neogenų laboratorijos. SIM terpė. Galima rasti: maisto sauga
3. „Difco Francisco Soria Melguizo“. SIM terpė. 2009.Atsiejama: http://f-soria.es
4. „Brizuela-Lab“ laboratorija. Vidutinė SIM kortelė. Galima rasti: .brizuela-lab.com
5. „Britannia“ laboratorijos. Vidutinė SIM kortelė. 2015.Atsiejama: studyres.es/doc
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinė diagnostika. 5-asis leidimas Redakcija Panamericana SA Argentina.