KULTŪRINĖS TERPĖS PARUOŠIMAS: TIKSLAI IR ŽINGSNIAI - BIOLOGIJA - 2025

Iš terpes paruošimo yra įprastas metodika, laboratorijų pageidaujamas mikroorganizmų augimo. Kultūrų terpės yra kieti, skysti arba pusiau kieti preparatai, turintys visas būtinas maistines medžiagas mikrobų populiacijai vystytis.

Paprastai mikroorganizmų auginimo priemonėse yra daug baltymų ir aminorūgščių, jose paprastai yra keletas komponentų, kurie skatina tiriamo organizmo augimą, pavyzdžiui, vitaminai, kraujas, serumas.

Šaltinis: pixabay.com

Nėra nei bendros, nei universalios terpės, nes jos sudėtis skiriasi priklausomai nuo dominančio mikroorganizmo poreikių. Kai kurios bakterijos gali augti bet kurioje terpėje, tačiau kitos turi specialius reikalavimus.

Iš ko tai susideda?

Mikroorganizmai, tokie kaip grybeliai ir bakterijos, negali būti tiriami atskirai dėl mažo dydžio. Dėl šios priežasties jie turi būti auginami dirbtinėmis priemonėmis, leidžiančiomis žymiai padidinti populiaciją.

Pavyzdžiui, jei norime ištirti bakterijas, turime sudaryti joms tinkamas sąlygas, kad jos galėtų daugintis ir sudaryti koloniją (kurią galima pastebėti plika akimi).

Maitinimo terpės paruošimas labai skiriasi priklausomai nuo auginamų mikroorganizmų rūšies. Prieš ruošiant jį, būtina žinoti pagrindinius darbo organizmo mitybos poreikius.

Žemiau bus aprašyti labiausiai paplitę komponentai, naudojami kultūros terpėse, kad būtų galima susidaryti bendrą idėją apie jų paruošimą:

Agaras

Jis naudojamas kultūrose kaip gelinantis agentas ir pridedamas ieškant kietos arba pusiau kietos terpės. Pirmasis kietiklis, naudojamas terpėms ruošti, buvo želatina, tačiau 1883 m. Agarą į bakteriologijos pasaulį pristatė W. Hesse.

Bakteriologiniame agare pagrindinė sudedamoji dalis yra polisacharidas su sudėtingomis šakomis, išgaunamomis iš dumblių. Šis junginys naudojamas kaip tirštiklis įprastuose maisto produktuose, tokiuose kaip ledai ir uogienės.

Tai labai vertingas mikrobiologijos elementas dėl kelių priežasčių. Daugiausia todėl, kad mikroorganizmai jo neskaido, jis suskystėja 100 ° C temperatūroje ir yra skysto pavidalo, kol pasiekia 45 ° C ar žemesnę temperatūrą.

Jei norite paruošti kietą terpę, agaro koncentracija turėtų būti apie 1,5%, o pusiau kietos - nuo 0,3 iki 0,5%.

Skysčiai

Norint auginti patogeninius organizmus, reikia kūno skysčių, kad jie galėtų vystytis taip, kaip natūralioje aplinkoje. Dėl šios priežasties pridedamas visas arba defibriliuotas kraujas. Skystis paimamas iš sveiko gyvūno ir, jį sterilizavus, pridedamas prie auginimo terpės.

Ištraukos

Jie gaunami iš skirtingų gyvūnų dalių (pavyzdžiui, mėsos ar kepenų) arba daržovių (sėklų) ir yra perdirbami gaunant kietą koncentratą pastos ar miltelių pavidalu. Labiausiai paplitusios yra mielės, salyklas ir mėsa.

Peptonai

Šie organiniai junginiai gaunami fermentinės arba cheminės hidrolizės būdu iš gyvūnų ar augalų audinių. Tikslas yra pridėti turinį, kuriame gausu aminorūgščių, kurios yra pagrindiniai baltymų vienetai.

Amortizatoriai

„Buferiai“ arba buferinės sistemos leidžia išvengti staigių pH pokyčių ir padeda išlaikyti optimalų diapazoną, kurį organizmas toleruoja.

Dauguma organizmų gali gerai klestėti, kai pH yra 7, nors kai kurios bakterijos teikia pirmenybę šarminėms terpėms. Tačiau yra bakterijų, kurios priešinasi pH pokyčiams tarp 6 ir 9 verčių.

Rūgoms, kurių pH yra jautrus, žalą daro ne per didelis vandenilio ar hidroksilo jonų kiekis, bet padidėjęs silpnų rūgščių ar bazių, kurios gali patekti į ląstelę, padidėjimas.

Taip pat pridedami pH rodikliai, kad būtų galima jį stebėti ir išvengti nukrypimų, kuriuos sukelia fermentacija ar kiti procesai.

tikslus

Pagrindinis tikslas ruošiant auginimo terpę yra pridėti visus būtinus komponentus, kad būtų galima išskirti sėkmingą organizmo vystymąsi. Turi būti nustatytas veiksmingiausias komponentų ir maistinių medžiagų derinys norint pasiekti norimą terpę.

Tiek terpės paruošimas, tiek laikymas yra labai svarbūs norint užtikrinti sėkmingą augimą, nes terpės sudėtis ir maistinių medžiagų prieinamumas priklauso nuo šių žingsnių.

Reikia atsižvelgti į tai, kad mikroorganizmų auginimas yra užduotis, kuriai įtakos turi keli faktoriai, nepriklausantys nuo mitybinės terpės, pavyzdžiui, gaunamos šviesos intensyvumas, temperatūra ir rūgštingumo lygis arba terpės šarmingumas. Todėl reikia atsižvelgti į kiekvieną iš šių kintamųjų.

Medijos tipai

Remiantis jo sudėtimi

Remiantis jų sudėtimi, yra trys pagrindinės pasėlių rūšys: natūrali arba empirinė, pusiau sintetinė ir apibrėžta sintetinė arba cheminė terpė.

Natūrali aplinka

Natūralioje aplinkoje tiksli sudėtis nežinoma. Tai apima tokius ingredientus kaip pienas, praskiestas kraujas, daržovių sultys, mėsos ir peptonų ekstraktai ir užpilai. Dėl ekonominių priežasčių dažnai pridedami nebrangūs komponentai, tokie kaip sojos ekstraktas, išrūgos, melasa ir kt.

Pusiau sintetinė terpė

Ji vadinama pusiau sintetiniu terpe, jei jos sudėtis iš dalies žinoma. Bet kuri terpė, kurioje yra agaro, tampa pusiau sintetiniu.

Tarp jų, be kitų pavyzdžių, turime bulvių dekstrozės agarą, czapek-dox agarą, avižų agarą, mėsos peptono agarą.

Sintetinė arba chemiškai apibrėžta terpė

Šiuo atveju terpės sudėtis, atsižvelgiant į anglies, azoto, sieros, fosforo ir bet kokių kitų augimo faktorių šaltinių kiekį, yra visiškai žinoma. Labai naudinga, jei norite gauti atkuriamus rezultatus kitiems tyrėjams.

Į vadinamuosius „mikroorganizmus, kuriems keliami specialūs augimo reikalavimai“, reikia pridėti reikiamų komponentų. Šio tipo pavyzdys yra Lactobacillus.

Remiantis mikroorganizmo tipu

Panašiai yra ir kita kultūrinių terpių klasifikacija pagal mikroorganizmų, galinčių augti juose, tipą. Vadovaudamiesi šiuo principu, mes turime šias bendrąsias, sodrinimo, selektyvines ir diferencines priemones. Kiekvienas iš jų aprašytas žemiau:

Bendra žiniasklaida

Tai palaiko įvairių mikroorganizmų vystymąsi. Jei kuriam nors organizmui reikia specialių sąlygų jo augimui, jis negalės sėkmingai vystytis tokio tipo kultūroje.

Praturtinimo terpės

Praturtinimo terpė palaiko tam tikro tipo mikroorganizmų augimą, tačiau nebuvo pridėta jokios medžiagos, kuri neleistų joje augti kitokio tipo mikrobams.

Atrankinės laikmenos

Jie ieško specifinio mikroorganizmo augimo, be kita ko, tai vadina grybais, bakterijomis, pirmuonimis. Norėdami tai padaryti, jie slopina kitų vystymąsi.

Norint pasiekti šį tikslą, galima pridėti cheminių junginių, kurie yra mirtini plačiai mikroorganizmų grupei ir nekenksmingi dominančiam organizmui, arba gali būti pridedami energijos šaltiniai, kuriuos gali asimiliuoti tik tikslinis mikrobas.

Paimant patogeninį mikroorganizmą, imant medicininius mėginius, naudojamos selektyviosios terpės. Čia būtina skatinti patogeno augimą ir slopinti normalios mikrobinės floros vystymąsi iš paciento pusės.

Pvz., Bismuto sulfito agaras neleidžia augti gramteigiamoms bakterijoms ir daugybei bakterijų, randamų virškinimo trakto ertmėje. Dėl šios priežasties jis naudojamas auginti gramteigiamas bakterijas, kurios sukelia vidurių šiltinę, Salmonella typhi išmatų mėginiuose.

Diferencialinė terpė

Šis tipas naudoja tam tikras dominančio organizmo diagnostines savybes (pavyzdžiui, jo metabolizmo ypatumus), kad galėtų jas atpažinti iš kitos rūšies, augančios toje pačioje aplinkoje.

Ir diferencinė terpė, ir selektyviosios terpės yra labai naudingos klinikinės mikrobiologijos ir visuomenės sveikatos srityje, nes šioms disciplinoms reikia nustatyti specifinius mikroorganizmus, susijusius su patologijomis ar prastomis higienos sąlygomis.

Į kultūrą galima įtraukti indikatorių, suteikiančių skiriamąjį požymį ieškomai kolonijai. Pavyzdžiui, laktozė ir pH rodiklis pridedami prie agaro-eozino-metileno mėlynojo (sutrumpintai EMB) ir MacConkey agaro.

Taigi, kai šiose terpėse vystosi kolonija, turinti galimybę fermentuoti laktozę ir gaminti aldehidus, jie gali būti pastebimi ypatingos spalvos.

Žingsniai

Šiuo metu auginimo terpę galima įsigyti liofilizuotoje formoje. Todėl paruošimas yra lengvesnis ir liko tik produktas rehidratuoti. Turinys turi būti pasvertas (atsižvelgiant į galutinį ruošiamą kiekį) ir ištirpinamas distiliuotame vandenyje pagal visas produkto nuorodas.

Skystos terpės turinį reikia padalyti į norimas talpyklas (Petri lėkšteles, mėgintuvėlius ir kt.), Kad vėliau būtų galima sterilizuoti. Norint paskirstyti kietą terpę, ją reikia išlydyti naudojant mikrobangų krosnelę arba medžiagą užpilant vandens vonia. Turi būti sureguliuotas terpės pH.

Paprastai agaras naudojamas mėgintuvėliuose arba Petri induose. Jei agaras sukietėja pasvirusioje padėtyje ir tinkamu kampu taip, kad galinis galinis kraštas būtų įstrižainė, šis išdėstymas žinomas kaip bukas arba pasvirę vamzdeliai. Kai agaras sukietėja visiškai vertikalioje padėtyje, jis vadinamas „giliu“.

Sterilizavus terpę - naudojant autoklavą, joms leidžiama atvėsti. Jie turi būti tvarkomi aplinkoje, kurioje nėra mikroorganizmų. Dažniausiai reikia dirbti su apšviestu žiebtuvėliu, užtikrinančiu aseptinę aplinką šalia.

Nuorodos

1. Celis, JE (2006). Ląstelių biologija: laboratorijos vadovas (2 tomas). Elsevier.
2. Finegold, SM, Bailey, WR, Baronas, EJ, Fineglod, SM, & Scott, EG (1991). Bailey Scott: mikrobiologinė diagnozė. Visos Amerikos medicina.
3. Olivas, E. (2004). I ir II mikrobiologijos ir parazitologijos praktikos vadovas. Ciudad Juarez autonominis universitetas.
4. Schlegel, HG, ir Zaborosch, C. (1993). Bendroji mikrobiologija. Cambridge University Press.
5. „Tortora“, G. J., „Funke“, „BR“ ir „Case“, CL (2007). Įvadas į mikrobiologiją. Panamerican Medical Ed.