KOAGULIAZĖS TESTAS: PAGRINDIMAS, PROCEDŪRA IR PANAUDOJIMAS - BIOLOGIJA - 2025

Koagulazę testas yra laboratorija metodas atskleisti fermento koaguliazei buvimą. Šis fermentas pasižymi koaguliacija plazmoje. 1903 m. Loebas pirmasis aprašė šį fermentą.

Šis tyrimas atliekamas su gramneigiamais, katalazės teigiamais kokiais, leidžiančiais atskirti Staphylococcus aureus padermes nuo likusių stafilokokų, nes tai yra vienintelis klinikinės svarbos mikroorganizmas, kuris jį gamina.

Abu vaizdai rodo teigiamą koaguliazės testą. Šaltinis: vaizdas iš kairės: Philippinjl. Dešinysis vaizdas: nuotrauka padaryta autoriaus MSc. Marielsa Gil.

Šia prasme neigiami testai Staphylococaceae šeimos nariai dažnai vadinami koaguliazės neigiamais Staphylococcus.

Yra keletas štamų, išskyrus S. aureus, kurie gali gaminti koaguliaciją, pavyzdžiui, Staphylococcus schleiferi spp koagulanai, S. hyicus, S. intermedius ir S. delphini.

Tačiau pirmieji trys yra klinikinės svarbos veterinarijos lygmeniu ir labai retai gali būti randami kaip žmonių infekcijų sukėlėjas, tuo tarpu S. delphini randamas tik jūrų aplinkoje.

Be to, jie lengvai diferencijuojami, nes S. hyicus ir S. intermedius nefermentuoja manitolio, o S. schleiferi spp koagulanai nefermentuoja maltozės ar trehalozės, o S. aureus fermentuoja šiuos angliavandenius.

Koaguliazės fermento buvimas susijęs su štamų virulentiškumu. Tačiau ši teorija subyrėjo, nes pastebėtos kitos virulentiškos koaguliazės neigiamos rūšys, galinčios sukelti reikšmingą infekciją.

Pagrindas

Interpretacija

Aglutinacija per 5-20 s (stiprus teigiamas testas).

Kintama agliutinacija, vykstanti nuo 20 sekundžių iki vienos minutės (uždelstas teigiamas testas).

Tam tikras laipsnio agliutinacija po vienos minutės (abejotini įrodymai). Rekomenduojama pakartoti testą arba patvirtinti mėgintuvėlio metodu.

Agliutinacijos nėra (neigiamas testas).

Rezultatas su SSF. Jis visada turi būti neigiamas, jei jis automatiškai duoda teigiamą rezultatą, bandymo rezultatas yra negaliojantis.

-Tube koaguliazės testas

medžiagos

-Sterilus mėgintuvėlis

-Plasma

-Marijos vonia 37 ° C temperatūroje.

Technika

Į 12 x 75 mėgintuvėlį su sterilia pipete pipete įpilkite 0,5 ml plazmos. Įdėkite platinos kilpą su 2–4 grynomis kolonijomis, kad būtų galima ištirti iš kietos kultūros 18–24 valandas ir ištirpinkite plazmoje. atsargiai išmaišykite ir 4 valandas inkubuokite 37 ° C temperatūroje.

Ištirkite mėgintuvėlį per pirmą valandą jo nekratant, tiesiog švelniai pakreipkite. Jei krešulys vis dar nematomas, jį galima stebėti kas 30 minučių, kol baigsis 4 valandos. Jei po 4 valandų jis vis dar neigiamas, jį galima palikti iki 24 valandų, bet kambario temperatūroje. Stebėkite ir praneškite apie rezultatą.

Remdamiesi patirtimi, kai kurie mikrobiologai bandymui atlikti naudoja 500 µl bakterijų suspensijos iš 18 valandų auginimo skystoje terpėje.

Atrodo, kad rezultatai yra greitesni ir patikimesni nei emulsinant kolonijas iš kietos terpės, ypač jei buvo naudojama žmogaus kraujo plazma, gauta iš kraujo banko.

Padermių iš sultinio naudojimas praskiedžia galimą žmogaus antistafilokokų antikūnų kiekį kraujo plazmoje, kurie gali slopinti koaguliazės veikimą.

Interpretacija

Jei pastebimas krešulys, apimantis visą skysčio kiekį (visiškas krešėjimas), arba krešulys, kuriame nėra likusio skysčio (dalinis krešėjimas), tai testas turėtų būti laikomas teigiamu.

Jei nesusiformuoja krešulys, ty suspensija išlieka vienalytė, bandymas neigiamas.

- Koaguliazės tyrimas naudojant fibrinogeną

Fibrinogenas naudojamas taip pat kaip plazma ir naudojamas tiek skaidrių, tiek mėgintuvėlių tyrimams. Atlikite taip, kaip aprašyta plazmoje, ir interpretuokite tuo pačiu būdu.

Naudokite

Jis naudojamas atskirti Staphylococcus aureus nuo koaguliazės neigiamų stafilokokų.

QA

Turėkite šviežių S. aureus štamo kultūrų, kurias būtų galima naudoti kaip teigiamą kontrolę. S. epidermidis padermė taip pat yra neigiama kontrolinė medžiaga.

Apribojimai

-Teigiamas testas neturėtų būti inkubuojamas 24 valandas, nes S. aureus gamina fibrinoliziną, kuris tirpina krešulį.

- Patikimam tyrimui turėtų būti naudojama šviežia arba naujai ištirpinta plazma, taip pat svarbu naudoti šviežias bakterijų kultūras (nuo 18 iki 24 val.). Taip išvengiama klaidingų negatyvų.

- Bandymas turi būti atliekamas kartu su neigiama ir teigiama kontrole.

- Kai kurios kietos terpės gali trikdyti koaguliacijos testą. Nerekomenduojama naudoti kolonijų iš sūraus manitolio agaro.

-Jei naudojama citruota plazma, rekomenduojama įpilti 5 vienetus heparino į mililitre plazmos, kad būtų išvengta klaidingų teigiamų rezultatų. Taip yra todėl, kad kai kurie mikroorganizmai, išskyrus S. aureus, gali suskaidyti citratą ir sukelti plazmos krešėjimą. Tokiu atveju patartina atlikti „Gram“ ir katalazės testą.

- Atliekant mėgintuvėlio mėginį, svarbu kas 30 minučių stebėti reakciją, nes yra S. aureus padermių, kurios išskiria didelę fibrinolizino koncentraciją ir greitai praskiedžia naujai susidariusį krešulį. Venkite klaidingų negatyvų.

- Stebėdami bandymą, venkite mėgintuvėlio staigiai purtyti. Tai gali sunaikinti krešulio susidarymą, kuris vėliau nebus atstatytas, sukeldamas melagingus negatyvus.

Nuorodos

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinė diagnostika. 5-asis leidimas Redakcija Panamericana SA Argentina.
2. „Forbes B“, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey ir Scotto mikrobiologinė diagnozė. 12 red. Redakcija Panamericana SA Argentina.
3. Macas Faddinas J. (2003). Biocheminiai tyrimai klinikinės svarbos bakterijoms nustatyti. 3-asis leidimas Redakcija Panamericana. Buenos Airės. Argentina.
4. „Pro-Lab“ laboratorijos. Triušiai koaguliuoja plazmą. Galima rasti: pro-lab.com
5. "Koaguliacija". Vikipedija, nemokama enciklopedija. 2019 12 12, 04:23 UTC. 2019 m. Balandžio 22 d., 15:50 wikipedia.org.