EMB agaras yra selektyvus ir skirtumas vidutinio naudojamas kieto kultūros izoliacijos gramneigiamų bakterijų, ypač Enterobacteriaceae ir kitų gramneigiamų bakterijų nereiklus. Jis taip pat žinomas akronimu EAM, reiškiančiu eozino-metileno mėlynąją.
Šią terpę sukūrė Holtas-Harisas ir „Teague“ 1916 m. Jame yra peptono, laktozės, sacharozės, dikalio fosfato, agaro, eozino, metileno mėlynojo ir vandens. Tai labai panašu į „MacConkey Agar“, ypač kai naudojamas Levine modifikuotas EMB agaras, kuriame nėra sacharozės.
Metalinis Escherichia coli blizgesys ant EMB agaro. Šaltinis: Carmen Moreno González, iš „Wikimedia Commons“
Tiesą sakant, kiekviena laboratorija nusprendžia, ar dirbti su viena, ar su kita, nes jos atlieka tą pačią funkciją, nors biochemiškai ir skiriasi.
Jis netgi turi tą patį trūkumą kaip ir klasikinis „MacConkey“ agaras, kalbant apie „Proteus“ genties spiečių produkciją. Todėl, norint išvengti šio reiškinio, agaro koncentraciją galima padidinti iki 5%.
Pagrindas
Atrankinis
EMB agaras yra subtiliai selektyvus, nes jame yra anilino dažų (eozino ir metileno mėlynojo), kurie veikia kaip inhibitoriai ir neleidžia daugumai gramteigiamų bakterijų augti bei kai kuriems išrankiems gramneigiamiems lazdelei.
Tačiau šis agaras turi trūkumą, kad kai kurios gramteigiamos bakterijos gali atsispirti slopinančioms medžiagoms ir augti kaip mažos bespalvės punkcinės kolonijos, tokios kaip Enterococcus faecalis ir kai kurios Staphylococcus.
Taip pat gali augti tam tikros mielės, pavyzdžiui, Candida albicans kompleksas, kuris duos labai mažas rausvas kolonijas. Chlamydosporos gali išsivystyti net iš šių mielių, jei mėginys yra giliai pasėtas.
Diferencialas
Kita vertus, EMB agaras taip pat yra diferencinė terpė, nes šie dažikliai (eozinas ir metileno mėlynasis) kartu turi savybę susidaryti nuosėdoms rūgščiame pH, todėl jie naudojami kaip jo susidarymo rodikliai.
Taigi silpnai laktozę ar sacharozę fermentuojančios bakterijos per 24–48 valandas sukuria purpurines kolonijas. Pavyzdžiui, Klebsiella, Enterobacter ir Serratia gentys.
Tos bakterijos, kurios stipriai fermentuoja laktozę, tokias kaip Escherichia coli, arba sacharozę, tokias kaip Yersinia enterocolitica arba Proteus penneri, sudaro žalsvai juodos spalvos nuosėdas, suteikdamos šioms rūšims būdingą metalinį blizgesį.
Reikia pažymėti, kad jei naudojama EMB levino terpė (be sacharozės), Yersinia enterocolitica ir Proteus penneri sukels aiškias kolonijas.
Bakterijos, kurios nefermentuoja laktozės ar sacharozės, yra maitinamos peptonais, kurie suteikia aminorūgštis ir azotą, reikalingą bakterijų augimui, ir sukuria aiškias kolonijas. Pavyzdžiui, Salmonella ir Shigella gentys.
Taip pat svarbu pažymėti, kad Acinetobacter gentis gali turėti levandų mėlynos spalvos kolonijas, net jei tai nėra laktozės fermentatorius ar sacharozė, bet turi savybę pritvirtinti metileno mėlynąją savo ląstelių sienelėje. Tai gali nutikti ir su kitomis oksidacinėmis bakterijomis.
Paruošimas
Originali dehidratuota terpė yra šviesiai smėlio spalvos.
Norėdami paruošti šią terpę, 36 g dehidratuotos terpės reikia pasverti ir suspenduoti kolboje, kurioje yra vienas litras distiliuoto vandens.
Leisdami mišiniui pailsėti 5 minutes, kolba nukeliama į šilumos šaltinį, intensyviai ir nuolat maišydama, kol užvirs ir visiškai ištirps.
Vėliau jau ištirpintą terpę reikia sterilizuoti autoklavu, esant 121 ° C, 15 minučių.
Pasibaigus laikui, jis pašalinamas iš autoklavo ir paliekamas trumpam stovėti. Tada dar šiltai (45–50 ° C) į kiekvieną sterilų Petri indą įpilama 15–20 ml agaro. Terpė turėtų būti lakmuso mėlyna.
Po patiekimo lėkštės paliekamos šiek tiek neuždengtos, kol agaras šiek tiek atvės. Tada jie uždengiami ir jiems leidžiama visiškai sukietėti. Vėliau jie sudedami į apverstus plokštelių laikiklius ir iki naudojimo laikomi šaldytuve (8 ° C).
Norint išvengti užteršimo, šią procedūrą geriausia atlikti laminaraus srauto gaubte arba priešais Bunseno degiklį.
Svarbu nepamiršti, kad kiekviename komerciniame name bus nurodyta, kokią sumą reikia pasėti paruošiant kultūrinę terpę.
Galutinis terpės pH turi būti 7,2 ± 0,2
Programos
Ši terpė naudojama šlapimui ir išmatoms ar bet kokio tipo klinikiniams pavyzdžiams sėti, ypač jei įtariama, kad yra nepalankios gramneigiamos bacilos, pavyzdžiui, Enterobacteriaceae šeimai priklausančios bacilos, kurios šioje terpėje labai gerai auga.
Enteropatogeninės Shigella ir Salmonella genčių bakterijos išsiskiria bespalvėmis ar šiek tiek gintarinėmis kolonijomis.
Taip pat auga kitos ne laktozę fermentuojančios bakterijos, tokios kaip Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter.
Taip pat ši terpė yra labai naudinga atliekant mikrobiologinę maisto ir vandens analizę, nes ji yra ideali visam patvirtintam koliforminių bakterijų nustatymo etapui, tai yra, kad būtų galima patvirtinti, kad E. coli yra drumstų EB sultinių iš labiausiai tikėtino skaičiaus technika (MPN).
QA
Norint patikrinti, ar šviežiai paruošta terpė veikia gerai, galima pasodinti kontrolinius štamus, kad būtų galima pastebėti kolonijų savybes ir įsitikinti, ar jos duoda taip, kaip tikėtasi.
Tam galima naudoti ATCC padermes arba gerai identifikuotas E. coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa ir kai kurias gramneigiamas bakterijas, tokias kaip S. aureus.
Tikimasi, kad E. coli generuos gerai išsivysčiusias mėlynai juodų kolonijas su žaliu metaliniu blizgesiu. Kadangi Enterobacter aerogenes ir Klebsiella sp turėtų sudaryti gerai išsivysčiusias melsvai juodų gleivių kolonijas.
Kita vertus, Salmonella typhimurium ir Shigella flexneri turi išsivystyti didelės spalvos, bespalvės arba silpnos gintaro spalvos.
Galiausiai Pseudomonas aeruginosa gentis auga kaip bespalvės, netaisyklingo dydžio kolonijos, o gramteigiamos bakterijos turėtų būti visiškai slopinamos arba augti nedaug, turint labai mažas kolonijas.
Galutinės mintys
Dėl sterilizacijos kartais sumažėja metileno mėlynoji spalva, o jos spalva yra vidutiniškai oranžinė. Kad metileno mėlyna oksiduotųsi ir atgautų purpurinę spalvą, ją reikia švelniai maišyti, kol spalva atsigaus.
Taip pat po sterilizacijos dažai gali nusėsti, todėl prieš patiekiant Petri lėkštes, juos reikia gerai išmaišyti.
Nuorodos
- Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B ir Velázquez O. 2009. Maisto produktų mikrobiologinės analizės metodai. 2-asis leidimas UNAM Chemijos fakultetas. Meksika.
- Carranza C, León R, Falcón N, Neumann A, Kromm C. Potencialiai patogeniškų Escherichia coli padermių, išskirtų iš Peru paukštininkystės fermų viščiukų broilerių, apibūdinimas ir paplitimas. Kun. vet. Peru 2012 23 (2): 209–219. Galima rasti: scielo.org.
- „Laboratorios Conda SA“ eozinas ir metileno mėlynasis agaras. 2010. Galima rasti: condalab.com
- „Britannia“ laboratorijos. „Levine EMB“ (su eozinu ir metileno mėlyna) 2011. Prieinama šiuo adresu: britanialab.com
- BD laboratorijos. BD EMB agaras (eozino metileno mėlynasis agaras), modifikuotas. 2013.Atsiejama: bd.com
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinė diagnostika. (5-asis leidimas). Argentina, „Panamericana SA“ redakcija
- „Forbes B“, Sahm D, Weissfeld A. 2009. „Bailey & Scott“ mikrobiologinė diagnozė. 12 red. Argentina. „Panamericana SA“ redakcija