MACCONKEY AGARAS: PAGRINDIMAS, PARUOŠIMAS IR PANAUDOJIMAS - BIOLOGIJA - 2025

„ MacConkey“ agaras yra kieta terpė, leidžianti išskirti gramneigiamas bakterijas. Dėl šios priežasties tai yra selektyvi terpė ir taip pat leidžia atskirti fermentuojančią laktozę ir nefermentuojančią bacilą, todėl ji yra diferencijuota terpė. Tai viena iš plačiausiai naudojamų terpių mikrobiologijos laboratorijoje.

Ši terpė daugiausia naudojama gramneigiamų bakterijų, priklausančių Enterobacteriaceae šeimai, izoliacijai, įskaitant oportunistines ir enteropatogenines rūšis.

„MacConkey“ agare sėjamos dviejų tipų bakterijos. Kairėje pusėje esančios laktozę fermentuojančios kolonijos, dešinėje - ne laktozę fermentuojančios kolonijos.

Jis taip pat gali būti naudojamas išskirti kitas žarnyno bakterijas, kurios gyvena virškinimo trakte, bet nepriklauso Enterobacteriaceae, pavyzdžiui, Aeromonas sp, Plesiomonas sp, be kita ko.

Galiausiai jis gali išskirti kitas ne gliukozę fermentuojančias gramneigiamas bakterijas, kurios randamos aplinkoje, vandenyje ar dirvožemyje, tačiau kartais tai gali būti oportunistiniai patogenai, tokie kaip Pseudomonas sp, Acinetobacter sp, Alcaligenes sp, Chromobacterium violaceum, Stenotrophomonas maltophilia.

Pagrindas

„MacConkey“ agaras

Šios terpės pagrindą galima paaiškinti apibūdinant jos sudedamąsias dalis, nes kiekviena jų turi tikslą, kuris lemia jos savybę.

Tulžies druskos ir krištolo violetinė

Šia prasme „MacConkey“ agaras turi sudėtingą sudėtį. Visų pirma, jame yra tulžies druskos ir krištolo violetinė.

Šie elementai yra atsakingi už gramneigiamų bakterijų ir kai kurių išrankių gramneigiamų bakterijų augimo slopinimą. Savo ruožtu jis palaiko gramneigiamų bacilų, kurioms šios medžiagos įtakos nedaro, vystymąsi. Todėl tai yra selektyvi terpė.

Teigiama, kad jis yra šiek tiek selektyvus, palyginti su kitomis terpėmis, kurios taip pat slopina gramneigiamų bakterijų ir daugumos gramneigiamų bakterijų augimą.

Peptonai, polipektonai ir laktozė

Jame yra medžiagų, kurios suteikia būtinas maistines medžiagas šioje aplinkoje besivystantiems mikroorganizmams, pavyzdžiui, peptonams, polipektonams ir laktozei.

Laktozė yra svarbiausia, kad terpė būtų diferencinė terpė, nes mikroorganizmai, kurie geba fermentuoti laktozę, išsivystys stipriose rožinėse kolonijose.

Kai kurios bakterijos gali lėtai arba silpnai fermentuoti laktozę, išsivystydamos blyškiai rožinės kolonijos ir likdamos teigiamos laktozės.

Tie, kurie nefermentuoja laktozės, kaip energijos šaltinį naudoja peptonus, gamindami amoniaką, šarmindami terpę. Dėl šios priežasties atsiradusios kolonijos yra bespalvės arba skaidrios.

PH indikatorius

Spalvos pokytis pasiekiamas kitu esminiu junginiu, kurį turi MacConkey agaras. Šis junginys yra pH rodiklis, kuris šiuo atveju yra neutraliai raudonas.

Fermentuojant laktozę susidaro mišrios rūgštys. Jie parūgština terpę iki pH 6,8.

Dėl to pH indikatorius pasisuka į giliai rausvą atspalvį. Spalvos intensyvumas gali skirtis priklausomai nuo galutinio pH.

Distiliuotas vanduo, natrio chloridas ir agaras

Kita vertus, jame yra distiliuoto vandens ir natrio chlorido, kurie užtikrina vidutinę hidrataciją ir osmosinę pusiausvyrą. Galiausiai terpėje yra agaras, kuris yra pagrindas, užtikrinantis kietos terpės konsistenciją.

Paruoštos „MacConkey“ agaro terpės galutinis pH turėtų būti 7,1 ± 0,2.

Paruošimas

Vienam litrui MacConkey agaro reikia pasverti 50 g dehidratuotos terpės, įpilti į kolbą ir ištirpinti viename litre distiliuoto vandens. Po 10 minučių stovėjimo jis kaitinamas, nuolat maišant, kol virinama 1 minutę.

Kolba dedama į autoklavą ir 20 minučių sterilizuojama 121 ° C temperatūroje. Pasibaigus laikui, jis pašalinamas iš autoklavo ir paliekamas atvėsti, kol pasiekia 45 ° C temperatūrą, vėliau patiekiamas steriliuose Petri induose, esančiuose laminarinio srauto gaubte arba priešais Bunseno degiklį.

Leiskite sukietėti ir laikykite apverstoje plokštelių laikiklyje ir iki naudojimo atšaldykite šaldytuve 2–8 ° C temperatūroje.

Norint gauti „MacConkey“ agarą, kuris slopina „Proteus“ genties sukimosi efektą, naudojamas mažai druskos turintis „MacConkey“ agaras.

Įprastinio „MacConkey“ agaro panaudojimas

„MacConkey Agar“ yra visuose terpių rinkiniuose, skirtuose sėti klinikinius mėginius, gautus laboratorijoje. Jis taip pat naudingas maisto mikrobiologijoje ir aplinkos mikrobiologijoje.

Šioje terpėje augančių gramneigiamų lazdelių įvairovė išreiškia fenotipines savybes, kurios padeda numatyti minėtos rūšies diagnozę. Pavyzdžiui, kolonijų dydis, spalva, konsistencija ir kvapas yra keletas požymių, kuriais galima vadovautis.

Šioje terpėje Escherichia coli, Klebsiella sp ir Enterobacter sp rūšys sukuria stiprias rausvas kolonijas, apsuptas nusodinto tulžies zonos.

Kadangi tokios bakterijos, kaip Citrobacter sp, Providencia sp, Serratia sp ir Hafnia sp, gali pasirodyti bespalvės po 24 valandų arba šviesiai rausvos per 24–48 valandas.

Panašiai Proteus, Edwadsiella, Salmonella ir Shigella gentys sukuria bespalves ar skaidrias kolonijas.

Kiti MacConkey agaro variantai

Yra ir kitų „MacConkey Agar“ variantų, kurie turi konkrečius tikslus. Jie minimi toliau:

„MacConkey“ agaras su sorbitoliu

Ši terpė buvo skirta atskirti enteropatogeninį kamieną (enterohemoraginį Escherichia coli O157: H7) nuo likusių Escherichia coli padermių.

Ši terpė keičia angliavandenių laktozę sorbitoliu. Enterohemoraginės E. coli padermės O157: H7 skiriasi nuo kitų, nes jos nefermentuoja sorbitolio, todėl gaunamos skaidrios kolonijos, o likusios E. coli padermės fermentuoja sorbitolį, o kolonijos yra stipriai rausvos.

„MacConkey“ agaras be krištolo violetinės ir druskos

Šis agaras labai skiriasi nuo klasikinio „MacConkey“ agaro, nes jame nėra violetinio kristalo ir gali augti gramteigiamos bakterijos.

Kita vertus, tai, kad nėra druskos, užkerta kelią tam tikrų žarnyno bakterijų, tokių kaip Proteus genties bakterijų, užuomazgai, todėl yra lengviau išskirti visas esančias bakterijas, įskaitant gramteigiamas bakterijas.

„MacConkey“ agaras su cefoperazonu

Šis „MacConkey Agar“ variantas buvo sukurtas iš pradžių išskirti Laribacter hongkongensis, vėliau buvo nustatyta, kad jis yra naudingas Arcobacter butzleri izoliacijai. Abu yra šiek tiek išlenkti gramneigiami strypai, atsparūs cefoperazonui.

Neseniai šios bakterijos sukėlė gastroenteritą ir įgijo viduriavimą Azijos ir Europos žmonėms, kurie tapo dviem galingais patogenais.

Antibiotikas leidžia slopinti lydinčią virškinimo trakto florą, kuri skatina šių bakterijų vystymąsi ir neleidžia joms likti nepastebėtoms, nes jų augimui reikia 72 valandų.

„MacConkey“ agaras, paruoštas su 10% v / v jūros vandeniu

Šis variantas yra naudingas norint įvertinti bakterinius sanitarinius fekalinio užterštumo rodiklius, įskaitant bendras koliformas ir fekalines koliformas rekreaciniame sūriame vandenyje (paplūdimiuose ir įlankose).

Cortez ir kt. 2013 m. Parodė, kad tokiu būdu paruošta terpė žymiai padidina šių mikroorganizmų atsistatymą druskingoje aplinkoje, palyginti su MacConkey agaro, paruošto distiliuotu vandeniu, naudojimu.

Taip yra dėl to, kad modifikuota terpė stimuliuoja bakterijų, kurios fiziologiškai yra latentinės, bet „negyvybingos“, augimą, todėl įprastinėse terpėse jų negalima atkurti.

Nuorodos

1. Lau SK, Woo PC, Hui WT ir kt. Cefoperazono MacConkey agaro panaudojimas selektyviam Laribacter hongkongensis išskyrimui. J Clin mikrobiolis. 2003; 41 (10): 4839-41.
2. „MacConkey“ agaras. Vikipedija, nemokama enciklopedija. 2018 m. Balandžio 4 d., 18:16 UTC. 2018 12 29, 15:22 en.wikipedia.org
3. „Forbes B“, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey ir Scotto mikrobiologinė diagnozė. 12 red. Argentina. „Panamericana SA“ redakcija
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinė diagnostika. (5-asis leidimas). Argentina, „Panamericana SA“ redakcija
5. Cortez J, Ruiz Y, Medina L, Valbuena O. Vandens terpės, paruoštos su jūros vandeniu, poveikis Chichiriviche, Falcono valstijos, Venesuelos, kurortų jūrų vandenyse sveikatos rodikliams. „Rev Soc Ven Microbiol 2013“; 33: 122–128
6. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktinė klinikinė mikrobiologija. Kadiso universitetas, 2-asis leidimas. UCA leidinių tarnyba.