EC SULTINYS: PAGRINDAS, PARUOŠIMAS IR PANAUDOJIMAS - BIOLOGIJA - 2025

EB sultinio arba sultinio Escherichia coli yra selektyvus skystis kultūros terpė. Šią terpę rekomenduoja standartiniai bendrųjų ir išmatų koliformų skaičiavimo metodai, naudojant labiausiai tikėtiną skaičių metodą (MPN) vandens ir maisto ėminiuose, kai pagrindinis sukėlėjas yra Escherichia coli.

EC sultinį sudaro tripteinas, laktozė, tulžies druskos, dikalio fosfatas, monokalio fosfatas, natrio chloridas ir vanduo. Jos formulė yra strategiškai sukurta taip, kad skatintų bendrųjų ir išmatų koliformų augimą ir užkirstų kelią kitų lydinčių mikroorganizmų vystymuisi.

Vaizdinis EB sultinio paruošimo vaizdas. Šaltinis: „Pixabay.com“

Escherichia coli bakterija yra pagrindinė išmatų koliforma, esanti kaip teršalas vandenyje ir maisto šaltiniuose, ir sukelianti svarbius virškinimo trakto sutrikimus.

Reikėtų pažymėti, kad yra daug Escherchia coli serotipų; Tarp jų galime paminėti enterohemoraginį (EHEC), enteroinvazinį (EIEC), entopatogeninį (EPEC), enterotoksigeninį (ETEC) ir enteroagregacinį (EAEC).

Ši terpė turi galimybę leisti vystytis visoms joms, tačiau nesugebėdama jų atskirti viena nuo kitos. Tam reikia papildomų bandymų.

Mikrobiologinis vandens ir maisto tyrimas pagal tikėtiniausią skaičių (MPN), siekiant nustatyti bendrą ir išmatų koliformą, yra protokolas, susidedantis iš kelių fazių; išankstinė, patvirtinimo ir užbaigimo fazė. EB sultinys naudojamas patvirtinimo fazėje.

Pagrindas

EB sultinys

EB terpė yra aprūpinama maistiniais elementais, kurie yra būtini optimaliam bendrųjų ir išmatų koliformų vystymuisi, į kuriuos įeina Escherichia coli bakterijos.

Šiuos maistinius elementus teikia tripteinas, nes jie yra puikus peptidų ir amino rūgščių šaltinis. Be to, jame taip pat yra laktozės - fermentuojamo angliavandenio, kuris suteikia energijos ir leidžia parodyti, ar bakterijos gamina dujas.

Kita vertus, terpėje yra selektyvumą užtikrinančių tulžies druskų, nes ji slopina gramneigiamų mikroorganizmų, kurie gali būti mėginyje, augimą.

Dikalio fosfatas ir monokalio fosfatas taip pat veikia kaip pH balansavimo sistema. Ši sistema yra būtina, nes sultinyje esanti laktozė linkusi parūgštinti terpę, kai ją fermentuoja mikroorganizmai, tačiau tai kompensuoja fosfato druskos.

Todėl šie elementai yra būtini, nes nekontroliuojamas rūgštingumas gali turėti įtakos tinkamam ieškomų mikroorganizmų vystymuisi.

Savo ruožtu natrio chloridas stabilizuoja terpę osmosiniu būdu, o vanduo yra tirpiklis esančioms tirpoms medžiagoms ir užtikrina skysčio konsistenciją terpėje.

Novobiocin modifikuotas EB sultinys

Okrend ir Rose sukūrė įvairų EB sultinį, vadinamą novobiocinu modifikuotu EB sultiniu. Modifikaciją sudarė tulžies druskų koncentracijos sumažinimas ir 20 mg / dl novobiocino pridėjimas.

Ši modifikacija skatina enterohemoraginių Escherichia coli padermių (O157: H7) atsigavimą.

Šis bakterinis serotipas sukelia sunkų hemoraginį kolitą, kuris gali sukelti hemolizinį ureminį sindromą (HUS); o tai savo ruožtu gali sukelti ūminį inkstų nepakankamumą, kai didelis mirštamumas gali siekti iki 50% pagyvenusių žmonių.

Dėl kasmetinio sergamumo ir mirtingumo, kurį sukelia ši bakterija dėl užteršto maisto vartojimo, Jungtinių Valstijų žemės ūkio departamentas (USDA) labai rekomenduoja naudoti šią terpę.

Paruošimas

EB sultinys

Pasverkite 37,4 g dehidratuotos terpės ir ištirpinkite 1 litre distiliuoto vandens. Mišiniui reikia leisti pastovėti 5 minutes. Vėliau, šilumos šaltinyje, jis baigiamas tirpti, dažnai maišant.

Ištirpęs jis paskirstomas į paruoštus mėgintuvėlius, kurių viduje yra Durhamo vamzdelis. Sterilizuokite autoklave 121 ° C temperatūroje 15 minučių.

Terpės pH turėtų būti 6,9 ± 0,2. Dehidratuota terpė yra smėlio spalvos, o paruošta - šviesiai gintaro spalvos.

Sultiniai iki naudojimo laikomi šaldytuve. Naudojimo metu sultiniai turi būti kambario temperatūros.

Kita vertus, EB sultinį taip pat galima paruošti dviguba koncentracija.

Novobiocin modifikuotas EB sultinys

Pasveriama 36,7 g dehidratuotos terpės ir ištirpinama 1 litre vandens. Likęs preparatas yra tas pats, kas aprašyta aukščiau.

Naudokite

Bendrosios ir išmatų koliforminės analizės

EB sultinys idealiai tinka patvirtinti koliforminių bakterijų tyrimo NMP metodu fazę tiek vandens mėginiuose, tiek farmaciniuose produktuose ir maiste.

Apytikslėje fazėje gautus drumstus, dujas gaminančius laktozės sultinius reikia užpilti 2% tulžies ryškiai žaliais sultiniais ir EB sultiniu.

Bendrosios koliforminės bakterijos EB sultiniai inkubuojami aerobiškai 24–48 valandas 37 ° C, o fekalinėms koliformoms jie inkubuojami aerobiškai 24–48 valandas 44 ° C temperatūroje.

Abiem atvejais tai aiškinama taip: drumstieji vamzdeliai, gaminantys dujas, laikomi teigiamais. Jei per 24 valandas negaminama dujos, inkubacija tęsiama iki 48 valandų.

EB teigiami sultiniai pereina į visą patvirtinimo fazę, kurią sudaro pakartotinis sėjimas į selektyviąsias terpes, tokias kaip Mac Conkey agaras, EMB agaras arba Endo agaras.

Jei naudojamas sultinys yra modifikuotas novobiocinu EC, teigiamus mėgintuvėlius rekomenduojama pakartotinai uždaryti Mac Conkey agare su sorbitoliu.

QA

Kiekviena paruoštos terpės partija turi būti kontroliuojama kokybės. Pirmiausia reikia įvertinti terpės sterilumą. Šia prasme vienas ar du sultiniai 24 valandas inkubuojami be inokuliacinės aerobiozės 37 ° C temperatūroje. Laukiamas rezultatas yra skaidrus sultinys, be drumstumo ar spalvos pokyčių.

Antra, turi būti įvertintas žinomų padermių augimas, todėl gali būti naudojamos šios bakterijos: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

Visais atvejais tikimasi patenkinamo mikrobų vystymosi stebint drumstą sultinį, kuriame susidaro dujos E. coli ir nėra dujų Salmonella.

Kitos padermės, kurios gali būti įtrauktos į kontrolę: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Šios padermės turi būti visiškai slopinamos.

rekomendacijas

-Darhamo vamzdelių išdėstymas yra būtinas norint nustatyti koliformas.

-Padalinkite terpę mėgintuvėliuose prieš sterilizavimą, niekada po jo.

- Nenaudokite, jei terpė yra senesnė kaip 3 mėnesiai.

- Nenaudokite, jei pastebimas įprastų terpės savybių pasikeitimas.

Nuorodos

1. „Britannia“ laboratorijos. EC terpė. 2015.Atsiejama: britanialab.com
2. Enterohemoraginė E. coli. Maisto saugos ir visuomenės sveikatos centras. 2010.Automa: cfsph.iastate.edu
3. „Neogen Corporation“. EC terpė. Galima rasti svetainėje: foodsafety.neogen.com
4. Neogenas. Novobiocino modifikuota EB terpė. Galima rasti svetainėje: foodsafety.neogen.com
5. Jure M, Condorí S, Leotta G, Chinen I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, de Castillo M. Escherichia coli, gaminančio Shiga toksiną iš šviežios maltos mėsos iš mėsos Concepción provincijoje, aptikimas, išskyrimas ir apibūdinimas. iš Tucumán. „Microbiol Rev Arg“; 2010, 42 (4): 284–287. Galima rasti: www.scielo.org.