TIOGLIKOLATO SULTINYS: PAGRINDIMAS, PARUOŠIMAS IR PANAUDOJIMAS - BIOLOGIJA - 2025

Tioglikoliato sultinys yra vidutinio praturtintas skystos konsistencijos. Anglų kalba „Fluid Thioglycollate Medium“ jis žinomas akronimu FTM. Jį sukūrė alaus darykla, o 1944 m. Jį modifikavo Vera, kuris į jį pridėjo kazeino peptono.

Ši terpė turi mažą oksidacijos ir redukcijos potencialą, todėl nerekomenduojama vystytis griežtoms aerobinėms bakterijoms, tačiau ji yra ideali galimybė atkurti fakultatyvias aerobines, griežtas anaerobines ir nereikalaujančias mikroaerofilines bakterijas.

Tioglikolato sultinys be indikatoriaus. Rodo makšties išskyras. Šaltinis: Bobjgalindo

Dėl aukšto šios terpės efektyvumo, išskiriant ir regeneruojant įvairius mikroorganizmus, jos pripažinimą patvirtino Jungtinių Valstijų farmakopėja (USP), Oficialioji žemės ūkio chemikų asociacija (AOAC) ir Europos farmakopėja ( EP).

Šios organizacijos rekomenduoja jį atlikti norint patikrinti farmacijos produktų sterilumą ir praturtinti įvairių rūšių mėginius.

Cado tioglikoladą sudaro nedidelis kiekis mielių ekstrakto, kasos kazeino, bevandenės dekstrozės, L-cistino, natrio chlorido, natrio tioglikolato, resazurino ir agaro.

Yra kelios šios terpės versijos, tarp jų: ​​tioglikolato sultinys su indikatoriumi, tioglikolato sultinys be indikatoriaus, tioglikolato sultinys su indikatoriumi praturtintu heminu ir vitaminu K _1, ir tioglikolato sultinys su kalcio karbonatu.

Pabrėžtina, kad tioglikolato sultinio variantas, praturtintas heminu ir vitaminu K, yra naudingas anaerobų augimui skatinti, o tioglikolato sultinio variantas, kuriame yra kalcio karbonato, yra naudingas neutralizuoti rūgštis, susidarančias auginant mikrobus.

Pagrindas

Tioglikolato sultinys laikomas neselektyvia praturtinimo terpe, nes jis leidžia augti daugumai nepagarbių bakterijų. Mitybos reikalavimus užtikrina mielių ekstraktas, kasos virškinimas ir gliukozė.

Kita vertus, šioje terpėje, nepaisant to, kad ji yra sultinys, yra nedidelis kiekis agaro; Tai reiškia, kad jis turi mažą oksidacijos ir redukcijos potencialą dėl to, kad jis lėtina deguonies patekimą tokiu būdu, kad deguonis mažėja, einant giliau į vamzdelį.

Būtent todėl ši terpė yra ideali galimybė išsivystyti fakultatyvioms aerobinėms, mikroaerofilinėms ir griežtoms anaerobinėms bakterijoms, pastarosioms 2, nereikia inkubuoti tokiomis sąlygomis. Ta pati terpė reguliuoja deguonies kiekį terpėje, jo nėra mėgintuvėlio apačioje ir pakankamai jo paviršiaus.

Tioglikolilatas ir L-cistinas taip pat veikia kaip reduktoriai, padedantys užkirsti kelią bakterijų vystymuisi kenksmingų medžiagų, tokių kaip peroksidas, kaupimuisi. Be to, šiuose junginiuose, be kitų sunkiųjų metalų, yra gyvsidabrio darinių, arsenų, neutralizuojančio slopinamąjį poveikį.

Savo ruožtu resazurinas yra oksido redukcijos rodiklis. Ši medžiaga yra bespalvė, kai sumažėja, ir rausva, kai oksiduojasi. Yra indikatorinio ir neindikatorinio tioglikolato sultinio variantų. Jo naudojimas priklausys nuo mėginio rūšies ir laboratorijos pasirinkimo.

Tuo tarpu natrio chloridas palaiko tioglikolato sultinio osmosinę pusiausvyrą, o bevandenės gliukozės naudojimas apsaugo nuo drėgmės pertekliaus dehidratuotoje terpėje.

Paruošimas

Tioglikolato sultinys su indikatoriumi

Pasveriama 29,75 g dehidratuotos terpės ir ištirpinama 1 litre distiliuoto vandens. Mišiniui leidžiama pastovėti maždaug 5 minutes. Nukreipkite į šilumos šaltinį ir dažnai maišykite, kol visiškai ištirps.

Supilkite terpę į mėgintuvėlius ir 15 minučių autoklavuokite 121 ° C temperatūroje. Prieš naudojimą leiskite atvėsti. Patikrinkite, ar komercinio namo intarpas nėra apsaugotas. Vieni rekomenduoja laikyti kambario temperatūroje tamsioje vietoje, kiti - šaldytuve, apsaugotame nuo šviesos.

Paruoštos terpės pH yra 7,1 ± 0,2.

Dehidratuota terpė yra šviesiai smėlio spalvos, o paruošta terpė yra šviesiai gintaro spalvos, šiek tiek opalescenuojanti.

Tioglikolato sultinys su indikatoriumi praturtintas heminu ir vitaminu K

Yra komercinių laikmenų, kuriose jau yra hemino ir vitamino K ₁ , ypač skirtų auginti anaerobus.

Jei neturite praturtintos terpės anaerobams, galite paruošti bazinį tioglikolato sultinį. Tam kiekvienam terpės litrui _pridedama 10 mg hemino hidrochlorido ir 1 mg vitamino K ₁ . Tačiau jei į tioglikolato sultinį įpilama kraujo ar serumo, papildyti heminu ar vitaminu K nebūtina.

Tioglikolato sultinys su kalcio karbonatu

Jis tiekiamas komerciškai ir yra paruoštas laikantis instrukcijų, nurodytų ant intarpo.

Tioglikolato sultinys be indikatoriaus

Jos sudėtis yra ta pati kaip pagrindinio tioglikolato, tačiau joje nėra resazurino.

Pasveriama 30 g dehidratuotos terpės ir ištirpinama litre distiliuoto vandens. Likęs preparatas yra tas pats, kas aprašyta tioglikolato sultinyje su indikatoriumi.

Naudokite

Tioglikolato sultinys yra naudingas praturtinant klinikinius mėginius, ypač iš sterilių vietų. Tai taip pat naudinga neklinikiniams mėginiams, tokiems kaip kosmetika, vaistai ir kt.

Skystiems mėginiams (tokiems kaip CSF, sinoviniam skysčiui ir kt.) Pasėti mėginiai pirmiausia centrifuguojami, po to paimami 2 nuosėdų lašai ir supilami į tioglikolato sultinį. Inkubuokite 24 valandas 35 ° C temperatūroje. Jei per tą laiką nėra augimo (drumstumo), jis inkubuojamas ne ilgiau kaip 7 dienas.

Jei mėginys imamas su tamponu, kultūrinė terpė pirmiausia pasėjama lėkštelėmis ir galiausiai tamponas įpilamas į sultinį, išsikišusi dalis padalijama ir mėgintuvėlis uždengiamas, paliekant tamponą viduje. Inkubuokite 35 ° C temperatūroje 24 valandas, ne ilgiau kaip 7 dienas.

Kietiems mėginiams homogenizuokite fiziologiniame druskos tirpale (SSF) ir pasėkite tioglikolato sultinį 2 lašais suspensijos.

Kartais ji gali būti naudojama kaip mėginių transportavimo terpė, kai įtariama, kad yra griežti anaerobai, arba kaip atsarginis sodrinimo sultinys.

Tioglikolato sultinio variantas su kalcio karbonatu yra naudojamas kontrolinių padermių palaikymui ilgesnį laiką, nes jis turi galimybę neutralizuoti rūgštis, susidarančias naudojant gliukozę; Šios rūgštys yra toksiškos tam tikroms bakterijoms.

Tioglikolato sultinio augimas bus stebimas terpės drumstumu. Atsižvelgiant į mėginio tipą ir įtariamus mikroorganizmus, rekomenduojama atlikti „Gram“ dažymą ir vėliau subkultūrą neselektyvioje ir neselektyvioje terpėje.

QA

Sterilumui kontroliuoti rekomenduojama inkubuoti vieną arba du sultinius, neinokuliavus. Laukiamas rezultatas yra skaidrus sultinys, nekeičiantis spalvos, nors mėgintuvėlio paviršiuje matyti normali rožinė spalva.

Kokybės kontrolei turėtų būti pasėjama nuo 10 iki 100 CFU sertifikuotų kontrolinių padermių, tokių kaip Staphylococcus aureus ATCC 6538, Micrococcus luteus ATCC 9341, Bacillus subtilis ATCC 6633, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Clostridium sporogenes ATCC 19404, Clostridium sporogenes ATCC 19404, Clostridium sporogenes Bacteroides vulgatus ATCC 8482.

Inkubuokite aerobiozėje 30–35 ° C temperatūroje 24 valandas, bet ne ilgiau kaip 3 dienas, nes šie mikroorganizmai greitai auga.

Tikimasi gero vystymosi visais atvejais, išskyrus Micrococcus luteus ir Bacillus subtilis, kur gali būti vidutinio sunkumo vystymasis.

Tioglikolato sultinio, praturtinto heminu ir vitaminu K ₁ , kokybės kontrolei galima naudoti kontrolinius štamus Bacteroides vulgatus ATCC 8482, Clostridium perfringens ATCC 13124 ir Bacteroides fragilis ATCC 25285. Laukiamas rezultatas yra patenkinamas augimas.

rekomendacijas

- Kartais galima pastebėti, kad tioglikolato sultinio paviršius su indikatoriumi pasidaro rausvas; Taip yra dėl terpės oksidacijos. Jei rausva spalva padengia 30% ar daugiau viso sultinio, ją galima 5 minutes kaitinti vandens vonioje, vėl atvėsinti ir naudoti.

Tai pašalins absorbuotą deguonį ir grąžins terpę į pradinę spalvą. Ši procedūra gali būti atliekama tik vieną kartą.

- Norėdami pagerinti aerobinių bakterijų dauginimąsi, inkubuokite dangtelį šiek tiek laisvu. Tačiau norint tinkamai sukurti griežtus aerobus, šiam tikslui geriau naudoti smegenų širdies infuzijos sultinį arba triptazės sojos sultinį.

- Reikėtų vengti terpės užšalimo ar perkaitimo, nes abi sąlygos kenkia terpei.

-Tiesioginė šviesa kenkia mitybinei terpei, ją reikia saugoti nuo šviesos.

Nuorodos

1. „Britannia“ laboratorijos. Tioglikoliuokite USP su indikatoriumi. 2015.Atsiejama: labBritania.com.
2. „Chios Sas“ laboratorijos. 2019. Tioglikolato sultinys. Galima rasti: quios.com.co
3. Laboratorijos BD skysčio tioglikolato terpė (FTM). 2003. Prieinamas adresu: bd.com/Europe
4. Mėgintuvėliuose paruoštos BBL terpės, skirtos auginti anaerobinius mikroorganizmus. Tioglikolato terpė. 2013.Atsiejama: bd.com
5. „Forbes B“, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey ir Scotto mikrobiologinė diagnozė. 12 red. Redakcija Panamericana SA Argentina.