LIA (LIZINO GELEŽIES) AGARAS: PAGRINDAS, PARUOŠIMAS IR PANAUDOJIMAS - BIOLOGIJA - 2025

Agaras LŽI (Lizinas Geležis) yra biocheminis tyrimas naudojamas nustatyti bakterijų Enterobacteriaceae šeimos. Šią terpę sukūrė Edwardsas ir Fife'as, remdamiesi Falkovo formule.

Iš pradžių šis testas buvo sultinys, kuriame buvo peptonų, mielių ekstrakto, gliukozės, L-lizino, violetinės bromkrezolio ir distiliuoto vandens. Edvardas ir Fife pridėjo agaro-agaro, geležies amonio citrato ir natrio tiosulfato.

Teigiamas ir neigiamas lizino dekarboksilinimo testas. Šaltinis: Autoriaus nuotrauka ir schema. Marielsa gil

Testą iš esmės sudaro fermento lizino dekarboksilazės, galinčios reaguoti su aminorūgšties L-lizino karboksilo grupe, įrodymas. Amino rūgšties deaminacija taip pat gali atsirasti dėl fermento lizino deaminazės buvimo.

Be to, terpės sudėtis parodo kai kurių bakterijų genų sugebėjimą gaminti vandenilio sulfidą. Galiausiai taip pat galima stebėti, ar terpėje susidaro dujos, ar ne.

Pagrindas

Peptonai ir mielių ekstraktas

Kaip ir daugumoje kultūrinių terpių, Lizino geležies agare yra komponentų, kurie teikia maistinių medžiagų, reikalingų bakterijoms augti, šaltinį. Šiuos komponentus apibūdina peptonai ir mielių ekstraktas.

Gliukozė

Taip pat šiame agare yra gliukozės kaip fermentuojamo angliavandenio. Yra žinoma, kad visos enterobakterijų šeimos bakterijos fermentuoja gliukozę.

Šis žingsnis yra labai svarbus, nes jis bus atsakingas už terpės rūgštėjimą, kuri yra būtina sąlyga fermento lizino dekarboksilazei, jei ji veikia, substratui.

Kai kuriose bakterijų genose gali būti stebimas dujų išsiskyrimas dėl gliukozės fermentacijos.

Dujos patvirtinamos, kai mėgintuvėlyje agaras pasislenka, paliekant tuščią vietą mėgintuvėlio apačioje, arba terpė suskaidoma į dvi ar daugiau dalių.

L-lizinas

Kai lizinas dekarboksilinamas, susidaro diaminas (cadaverinas) ir anglies dioksidas.

Dekarboksilinimas vyksta esant kofermento piridoksalo fosfatui. Ši reakcija yra negrįžtama.

PH indikatorius (bromkrezolio violetinė spalva)

Visi pH pokyčiai, atsirandantys terpėje dėl įvairių reakcijų, nustatomi violetiniu bromkrezolio pH rodikliu.

Šia prasme rūgštinant terpė tampa geltona, o šarminant - terpė grįžta į pradinę purpurinę arba purpurinę spalvą.

Kai dėl lizino deaminazės fermento yra lizino deaminacija, jo paviršiuje susidaro rausva spalva, būdinga Proteus, Providencia ir kai kurių Morganella rūšių gentams.

Taip yra todėl, kad deaminacijos proceso metu susidaro alfa-ketokarboksirūgštis, kuri, reaguodama su amonio citratu, esant deguoniui, sukelia minėtą spalvą.

Geležies amonio citratas ir natrio tiosulfatas

Kita vertus, bakterijas, gaminančias vandenilio sulfidą, patvirtins natrio tiosulfatas (sieros šaltinis) ir geležies amonio citratas, kuris yra H ₂ S kūrėjas.

Bakterijos, kurios turi fermentas tiosulfato reduktazės turi galimybę veikti mažinant natrio tiosulfato present, formavimo sulfito ir vandenilio sulfido (H ₂ S).

Pastarosios yra bespalvės dujos, tačiau, reaguodamos su geležies druska, susidaro geležies metalo sulfidas, kuris yra netirpus junginys (matomos juodos nuosėdos).

Tačiau, gebėjimas H forma ₂ S produktą su šioje terpėje yra ne labai patikima, nes kai kurie lizino dekarboksilazės neigiamas bakterijas, galinti gaminti H ₂ S nebus sudaro juodą nuosėdos, kaip vidutinio interferuoja rūgštingumo. Todėl rekomenduojama pasitikrinti su kitomis terpėmis, kuriose yra geležies.

Testo aiškinimas

Lizino dekarboksilinimas

Mėgintuvėliai turi būti perskaityti po 24 valandų inkubacijos, kitaip kyla klaidingo reakcijos interpretavimo pavojus, pranešant apie klaidingus negatyvus.

Reikia atsiminti, kad pirmoji įvyksianti reakcija bus gliukozės fermentacija, todėl visi mėgintuvėliai po 10–12 valandų pagels.

Jei inkubacijos laikotarpio pabaigoje (24 valandos) pastebimas geltonas fonas su purpuriniu arba purpuriniu paviršiumi, reakcija yra neigiama. Purpurinė paviršiaus spalva atitinka terpės šarminimą peptonais.

Teigiama reakcija yra tokia, kai vamzdelio dugnas ir paviršius yra visiškai purpuriniai, tai yra, jis grįžta į pradinę spalvą.

Taigi, kas lemia testo pozityvumą, yra terpės pagrindas arba fonas. Jei kyla abejonių dėl spalvos, ją galima palyginti su neinokuliuotu LIA vamzdeliu.

Lizino nukenksminimas

Vamzdelis, rodantis lizino deaminaciją, turės rausvai kaštoninį paviršių ir geltoną (rūgštinį) foną, arba visas vamzdis bus rausvai gelsvos spalvos.

Ši reakcija aiškinama kaip neigiama lizino dekarboksilinimo metu, bet teigiama lizino deaminavimui.

Ši reakcija yra apibrėžta ir interpretuojama ant rėmo.

Vandenilio sulfido (H

Teigiama reakcija pastebima juodų nuosėdų atsiradime visoje terpėje ar jos dalyje. Paprastai tarp kūgio krašto ir pagrindo.

Jei nuosėdos susidaro visame mėgintuvėlyje, jis neatskleis kitų reakcijų, vykstančių viduryje.

Rezultatų įrašas

Aiškinant testą, rezultatai registruojami taip:

Pirmasis kampinė yra skaityti, tada dugno ar blokas, tada H gamybą ₂ S, ir, galiausiai, dujų gamybą.

Pavyzdys: K / A + (-). Tai reiškia:

• K: šarminis rėmelis (purpurinė spalva)
• A: Rūgštus fonas (geltonas), t.y. neigiama dekarboksilinimo reakcija ir neigiama deaminacija.
• +: Vandenilio sulfido gamyba
• (-): be dujų.

Paruošimas

Pasverkite 35 g dehidratuotos geležies agaro lizino terpės ir ištirpinkite ją viename litre distiliuoto vandens.

Kaitinkite, kol agaras visiškai ištirps. Tam leiskite virinti minutę, dažnai maišydami. Paskirstykite 4 ml terpės į 13/100 mėgintuvėlius su medvilnės dangteliais.

Sterilizuokite autoklave 121 ° C temperatūroje 15 minučių. Išimkite iš autoklavo ir leiskite stovėti tokiu kampu, kad būtų gilus pagrindas ir trumpa kūginė dalis.

Laikyti šaldytuve 2–8 ° C temperatūroje. Prieš sėjant bakterijų kamieną, leiskite jam sušilti.

Dehidratuota terpė yra smėlio spalvos, o paruošta terpė yra rausvai violetinė.

Galutinis paruoštos terpės pH yra 6,7 ​​± 0,2

Terpė pasidaro geltona, kai pH 5,2 ar mažiau, ir purpurinė, kai pH 6,5 ir aukštesnis.

Programos

Šis testas, kaip ir kiti biocheminiai testai, yra naudojamas Enterobacteriaceae šeimos bakterijoms identifikuoti.

Terpė pasėjama tiesia kilpa ar adata, vamzdelio apačioje padaroma viena arba dvi skylės, o tada terpės paviršius susukamas zigzagu.

Inkubuokite 24 valandas 35–37 ° C temperatūroje aerobiozėje. Jei reikia, paliekama inkubuoti dar 24 valandas.

Daugiausia naudinga atskirti laktozės neigiamas Citrobacter rūšis nuo Salmonellas sp.

Šaltinis: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinė diagnostika. 5-asis leidimas Redakcija Panamericana SA Argentina.

Nuorodos

1. Macas Faddinas J. (2003). Biocheminiai tyrimai klinikinės svarbos bakterijoms nustatyti. 3-asis leidimas Redakcija Panamericana. Buenos Airės. Argentina.
2. „Forbes B“, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey ir Scotto mikrobiologinė diagnozė. 12 red. Redakcija Panamericana SA Argentina.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinė diagnostika. 5-asis leidimas Redakcija Panamericana SA Argentina.
4. „Britannia“ laboratorijos. Lizino geležies agaras. 2015.Atsiejama: britanialab.com
5. BD laboratorijos. BBL lizino geležies agaro smogikai. 2007. Galima rasti: bd.com
6. „Valtek“ laboratorijos. Vidutinė LIA 2009. Prieinama šiuo adresu: andinamedica.com