Manitolis druska agaro arba manitolis druska yra kieta terpė selektyvus ir skirtumas kultūra. Jį sukūrė Chapmanas patogeniškiems gramneigiamiems kokiams, ypač Staphylococcus aureus, išskirti.
Tačiau iš kitų rūšių augalų taip pat naudinga išskirti Staphylococus epidermidis, kuris kartais gali būti kaip oportunistinis patogenas, ir Staphylococcus saprophyticus, pripažintą šlapimo patogeną.
A. Fiola su paruošta sūraus manitolio agaro terpe. B. Sūdytos manitolio agaro lėkštelės, pasėtos fermentuojančiomis ir nefermentuojančiomis manitolio bakterijų padermėmis. Šaltinis: A ir B: Nuotraukos padarytos autoriaus MSc. Marielsa Gil.
Kai kurie enterokokai gali augti šioje terpėje, taip pat kai kurie gramteigiami sporų formavimo lazdelės.
Ši terpė yra labai naudinga analizuojant klinikinius mėginius, tačiau ji taip pat naudojama atliekant mikrobiologinius maisto tyrimus ir kontroliuojant pramoninius gaminius, pavyzdžiui, kosmetiką, vaistus.
Sūrus manitolio agaras yra sudarytas iš jautienos, tripteino, manitolio, natrio chlorido, fenolio raudonojo ir agaro ekstraktų ir peptonų.
Pagrindas
Manitolio agaras yra selektyvus dėl jo didelės druskos koncentracijos. Druskingumas veikia kaip slopinanti medžiaga ir neleidžia augti gramneigiamoms bakterijoms.
Tai taip pat skiriasi dėl angliavandenių manitolio ir fenolio raudonojo pH indikatoriaus. Iš to bakterijos, galinčios fermentuoti manitolį, gamina rūgštis, parūgštindamos terpę, paversdamos kolonijas ir terpę geltona.
Kita vertus, kolonijos, kurios nefermentuoja manitolio, auga terpėje, naudodamos maistines medžiagas, kurias suteikia mėsos ir tripteino ekstraktai ir peptonai. Iš ten bakterijos išgauna anglį, azotą, vitaminus ir mineralus, reikalingus jų augimui.
Kolonijos šiuo atveju gali būti silpnos arba stipriai rausvos, o terpė išlieka ta pati spalva arba pasikeičia į fuksiją.
Agaras yra medžiaga, užtikrinanti terpės konsistenciją.
Paruošimas
Norint paruošti litrą sūraus manitolo agaro, kolba pasveriama 111 g dehidratuotos terpės iš pageidaujamos komercinės įmonės ir ištirpinama 1000 ml distiliuoto vandens.
Šiluma užpilama dažnai maišant terpę, kad pagerėtų tirpimo procesas. Virkite minutę.
Kolba 15 minučių dedama į autoklavą 121 ° C temperatūroje.
Pasibaigus laikui, buteliuką išimkite iš autoklavo, leiskite jam pailsėti ir padėkite 15–20 ml į sterilius Petri lėkšteles, kai temperatūra yra maždaug nuo 50 iki 55 ° C.
Leidžiama sukietėti, uždedant atvirkščiai plakatuose ir laikant šaldytuve iki naudojimo. Prieš sėjant mėginį, palaukite, kol plokštelė pasieks kambario temperatūrą.
Plokštės yra sėjamos pjaunant arba sėjant paviršiumi drigalski mentele. Galutinis paruoštos terpės pH turi būti 7,4 ± 0,2
Dehidratuota terpė yra šviesiai smėlio spalvos, o paruošta terpė yra oranžinės raudonos.
Programos
Dėl didelio selektyvumo ši terpė yra ideali sėti mėginius su mišria flora, kurioje siekiama nustatyti Staphylococus aureus, kaip pagrindinį šios genties patogeną.
Šia prasme vienas dažniausių jo naudojimo būdų yra ryklės eksudato ir nosies išskyrų mėginių mikrobiologinė analizė, ypač norint nustatyti asimptominius S. aureus nešiotojus.
Kai kurios šalys įgyvendino šią analizę kaip privalomą reikalavimą žmonėms, norintiems dirbti maisto pardavėjais.
Ši kontrolė neleidžia pasamdyti žmonių, kurie yra S. aureus nešiotojai, ir taip išvengiama masinio apsinuodijimo maistu dėl stafilokokų enterotoksinu užteršto maisto vartojimo.
Jis taip pat gali būti įtrauktas į žaizdų infekcijų, kraujo kultūrų, CSF, bronchų alveolių plovimą.
Sūdytas manitolio agaras yra naudingas kolonijoms iš šlapimo kultūrų atskirti iš CLED agaro arba kraujo agaro, kurio gramas atskleidė gramteigiamų kokcų grupes.
Tai taip pat tinka atliekant mikrobiologinę maisto, geriamojo vandens, dirvožemio analizę.
QA
Paruošus plokštelių su sūrus manitolio agaru seriją, patartina atlikti kokybės kontrolę. Kontrolinės padermės yra sėjamos, kad būtų parodyta, ar auga ar nėra.
Kaip teigiamą kontrolę galima naudoti žinomas Staphylococcus aureus padermes. Jis turėtų augti patenkinamai besivystančiose geltonose kolonijose, o terpė taip pat pasikeis.
Taip pat patogu įtraukti žinomą Staphylococcus epidermidis kamieną. Jis turėtų augti patenkinamai besivystančiose rožinėse kolonijose, o terpė išlieka tokios pačios spalvos arba tamsėja iki stipresnės rožinės spalvos.
Kaip neigiama kontrolė naudojamos padermės, kurios neturėtų augti šioje terpėje. Pavyzdžiui, galima auginti žinomą Escherichia coli arba Klebsiella pneumoniae kamieną. Laukiamas rezultatas yra visiškas slopinimas, tai yra, augimo nebuvimas.
Be to, turi būti inkubuota neinokuliuota plokštelė. Jame neturėtų būti nei augimo, nei spalvos pokyčių.
Svarbu, kad plokštelė nebūtų naudojama, jei yra kitų būklės pablogėjimo požymių, tokių kaip užteršimas, dehidracija, spalvos pasikeitimas.
Galutinės mintys
Kai naudojama sūrus manitolio agaro terpė, reikia atsižvelgti į keletą svarbių aspektų:
- Gavus geltonąsias kolonijas, tai nereiškia, kad tai Staphylococcus aureus. Reikėtų prisiminti, kad kai kurios Enterococcus padermės gali augti šioje terpėje ir fermentuoti manitolį, taip pat tam tikrus sporos formavimo grampozityvius strypus.
Todėl svarbu atlikti Gram kolonijoje ir atlikti katalazės testą.
- Kita vertus, reikia manyti, kad manitolis gali fermentuoti ir kitas Staphylococcus rūšis, išskyrus aureus. Todėl svarbu koloniją subkultūruoti iki maistinio sultinio, kad būtų galima paimti iš jo ir atlikti koaguliazės testą.
Tarp žmonėms kliniškai svarbių stafilokokų rūšių, kurie fermentuoja manitolį, yra: S. aureus, S. simulans, S. capitis ssp capitis, S. capitis ssp urealyticus, S. xylosus, S. cohnii ssp urealyticum ir kt.
Kiti gali pateikti kintamą reakciją, tai yra, kartais teigiamą, o kartais ir neigiamą. Kai kurie iš jų yra S. saprophyticus, S. haemolyticus, S. warneri, S. intermedius.
- Nerekomenduojama paimti kolonijų tiesiai iš manitolio agaro, kad būtų galima atlikti koaguliazės testą, nes didelė druskos koncentracija terpėje gali trukdyti rezultatui.
- Pagaliau plokšteles su sūdytu manitoliu rekomenduojama inkubuoti ne ilgiau kaip 48 valandas, nes kai kurios S. aureus padermės gali lėtai fermentuoti manitolį, nors tai nėra labai dažna.
Nuorodos
- „Britannia“ laboratorijos. Sūrus manitolio agaras. 2015.Atsiejama: britanialab.com
- „Sūrus manitolio agaras“. Vikipedija, nemokama enciklopedija. 2018 spalio 31, 19:08 UTC. 2019 m. Sausio 17 d. 20:55, galima rasti: es.wikipedia.org.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinė diagnostika. (5-asis leidimas). Argentina, „Panamericana SA“ redakcija
- „Forbes B“, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey ir Scotto mikrobiologinė diagnozė. 12 red. Argentina. „Panamericana SA“ redakcija
- BD laboratorijos. BD manitolio druskos agaras. 2013.Atsiejama: bd.com.