BIURETAS: PAGRINDIMAS, REAGENTAI, PROCEDŪRA, PANAUDOJIMAS - BIOLOGIJA - 2025

Biureto yra reagentas, naudojamas baltymų kiekio nustatymo ilgos grandinės ir trumpos grandinės. Jis ypač naudojamas analitinės chemijos ir šlapimo analizės srityse, siekiant ištirti visų baltymų koncentraciją serume, plazmoje ir šlapime.

Tam tikrose patologijose baltymų koncentracija gali padidėti arba sumažėti. Hipoproteinemijos simptomai dažniausiai pasireiškia pacientams, sergantiems inkstų ligomis, nepakankamai maitinantiems pacientams ir lėtinėmis infekcijomis.

Biureto reakcijoje susidariusio komplekso cheminė struktūra Teigiamas Biureto testas. Šaltinis: Yikrazuul / flickr

Hiperproteinemija stebima tokiose patologijose kaip daugybinė mieloma, sisteminė raudonoji vilkligė, bakterinis endokarditas, bakterinis meningitas, Waldenstromo makroglobulinemija.

Kita vertus, baltymai šlapime yra dėl to, kad inkstai filtruoja albuminą. Tai turi būti ištirtas patologinis elgesys.

Šiuo atžvilgiu biuretas yra labai naudingas, nes jis leidžia nustatyti baltymų kiekį serume, plazmoje ir šlapime, be daugelio kitų mėginių.

Net ir „Biuret“ gali būti naudojamas baltymų buvimui ir koncentracijai tirti blogai ištirtuose arba nežinomos sudėties mėginiuose. Todėl jis plačiai naudojamas tyrimų srityje.

Biureto testas pagrįstas peptidų jungčių nustatymu. Bandymas atliekamas šarminėje terpėje. Mėginyje turi būti bent dvi peptidinės jungtys, kad susidarytų violetinės-violetinės spalvos kompleksas. Kompleksą sudaro jungčių ir vario jonų sąjunga.

Pagrindas

Biureto reagentą sudaro kalio hidroksidas, vario sulfatas ir natrio bei kalio tartratas. Natrio hidroksidas naudojamas terpei šarminti, nes ši sąlyga yra būtina, kad vyktų reakcija.

Medžiagos, reaguojančios su baltymais, yra vario sulfatas, o natrio tartrato funkcija - neleisti susidaryti vario hidroksidui, kuris linkęs į nuosėdas ir trukdo reakcijai.

Jei mėginyje randama medžiagų su peptidiniais ryšiais (polipeptidai ar baltymai), testas bus teigiamas.

Kai tirpalas pasidaro purpurinis, reakcija aiškinama kaip teigiama. Spalva gaunama susidarius kompleksui tarp mažiausiai dviejų peptidų jungčių, turinčių CO-NH grupę, ir vario katijonų.

Violetinis kompleksas gali būti suformuotas dviem būdais: vienas yra protonų praradimas iš amidų grupių, kurios jungiasi su metalu (depronotacija), o kitas - deguonies ir azoto elektronų, kurie yra laisvi ir jungiasi, sąjunga. su variu.

Šios reakcijos intensyvumas ir spalva gali skirtis priklausomai nuo baltymo rūšies.

Testą galima atlikti kokybiškai arba kiekybiškai. Kokybine forma jis teigiamas arba neigiamas. Koncentracija gali būti matuojama kiekybine forma spektrofotometriniu metodu.

Reakcija rodoma tarp 540–560 nm. Spalvos intensyvumas yra tiesiogiai proporcingas peptidų jungčių koncentracijai mėginyje.

Reagentai

-20% natrio hidroksidas (NaOH)

- 1% vario sulfato pentahidratas (CuSO _4. 5H ₂ O)

-Sumaišytas natrio ir kalio tartrato tetrahidratas (KNaC ₄ H ₄ O ₆ · 4H ₂ O)

Biureto reagento stabilumas

-Jis turi būti laikomas šaldytuve.

Procesas

Technika

- Į mėgintuvėlį įdėkite 100 µl mėginio ar standarto, kuris bus analizuojamas.

- Įpilkite 2 ml natrio hidroksido.

-Miksu labai gerai.

- Įpilkite 5 ml Biureto reagento.

-Maišykite ir palikite pailsėti 25 minutes kambario temperatūroje, uždenkite ir apsaugokite nuo šviesos.

- Stebėkite, ar nėra spalvos, ir išmatuokite spektrofotometriškai.

Kalibravimo kreivė

Galvijų serumo albuminas gali būti naudojamas kaip standartas kalibravimo kreivei atlikti. Iš jo ruošiamos įvairios koncentracijos. Pavyzdžiui, 25, 50, 75, 100, 125 ir 150 proc.

Reakcija vyksta visomis žinomomis koncentracijomis ir absorbcija matuojama esant 540 nm bangos ilgiui. Gavus žinomų koncentracijų duomenis ir absorbcijos rodmenis, sudaroma kalibravimo kreivė.

Kiekviename tiriamų mėginių nustatyme ar serijoje rekomenduojama dėti etaloną. Galvijų serumo albuminas 0,1–2 mg / ml gali būti naudojamas kaip kalibravimo etalonas.

Matavimai atliekami spektrofotometru, esant 540 nm bangos ilgiui.

Linijiškumas pasiekiamas iki 12 g / dl koncentracijos.

Trukdžiai

Medžiagos, trukdančios atlikti Biureto testą

Nors tai nėra labai dažna, reikėtų pažymėti, kad kai kurios medžiagos gali trukdyti atliekant šį bandymą. Pavyzdžiui, amoniakas gali slopinti spalvos formavimąsi.

Panašiai bangos ilgį gali absorbuoti ir kitos medžiagos, tokios kaip tam tikri pigmentai.

Kita vertus, trukdžiai gali atsirasti, kai kita medžiaga nei peptidinis ryšys sudaro kompleksą su vario druska. Pavyzdys: kai kurie angliavandeniai ir tam tikri lipidai.

Jei analizuojamame mėginyje yra tam tikros rūšies nuosėdų, prieš atliekant bandymą, jis turi būti filtruojamas arba centrifuguojamas.

Medžiagos, kurios netrukdo atlikti Biureto testą

Bandymui įtakos neturi:

-Bilirubino iki 20 mg / dl koncentracijos.

-Hemoglobinas iki 750 mg / dl koncentracijos.

-Dextran iki 30 g / l koncentracijos

-Trigliceridai iki 4000 mg / dl koncentracijos.

Privalumas

- Tai paprastas vykdymo būdas.

-Tai ekonominis išbandymas.

-Jis turi didelį specifiškumą baltymams.

-Mažas trukdymas.

Trūkumai

Jis turi silpną jautrumą aptikti mažus baltymų kiekius. Fuentes ir kt. Atliktas darbas patvirtina, kad Biureto tyrimo metodo aptikimo riba yra 1 mg / ml baltymų ir kiekybiškai nustatyta 3 mg / ml.

Tačiau kiti tyrimai, atlikti Amazonijos universitete, nurodo daug mažesnes vertes. Tyrimo metu nustatyta aptikimo riba yra 0,020 mg / ml, o kiekybinio įvertinimo riba - 1,33 mg / ml.

Programos

Biureto reagentas arba testas yra naudojamas baltymams nustatyti klinikiniuose ir neklinikiniuose mėginiuose įprastose ir tyrimų laboratorijose.

Patologijos, atsirandančios padidėjus ar sumažėjus

Daugelio patologijų metu svarbu nustatyti visų baltymų koncentraciją klinikiniuose mėginiuose, kuri gali būti padidėjusi arba sumažėjusi.

Jie yra padidėję:

- daugialypė mieloma,

-Sisteminė raudonoji vilkligė,

- Bakterinis endokarditas,

- Bakterinis meningitas,

Waldenstromo makroglobulinemija, be kita ko.

Jis sumažėja:

-Renalinis nepakankamumas,

- Žmonės su sunkiu mitybos laipsniu,

- Lėtinėmis infekcijomis sergantys pacientai.

Klinikiniai mėginiai

Dažniausi klinikiniai mėginiai yra serumas, plazma ir šlapimas. Normali baltymų koncentracija serume ar plazmoje yra 6,0–8,8 gr / dl.

Baltymų koncentracija suaugusiųjų šlapime neviršija 150 mg / 24 val.

Šlapimo baltymų ir kreatinino santykis normalioji vertė

Kūdikiams: <0,50 mg

2 metų ir vyresni vaikai: indeksas: 0,20 mg

Suaugusiesiems: <0,2 mg

Neklinikiniai mėginiai

Biureto reakcija gali būti naudojama daugelio rūšių neklinikiniams mėginiams, tokiems kaip pieno produktai, antivenomas ar bet kuri kita nežinoma medžiaga, kurios baltymų buvimą norite ištirti.

Nuorodos

1. „Vázquez J“, „Guerra L“, Quintana J, Ramírez J, Fernando Ry Vázquez Y. (2014). Mangrovių austrių (Crassostrearizophorae) skysčių ekstraktų fizikinis ir cheminis apibūdinimas bei baltymų kiekis. „Cuban Journal of Chemistry“, 26 (1), 66–74. Gauta 2019 m. Birželio 26 d., Iš http: //scielo.sld
2. Chaparro S, Lara A, Sandoval A, Sosa S, Martínez J, Gil J. Mango sėklų (Mangifera indica L.) migdolų funkcinis apibūdinimas Revista Ciencia en Desarrollo. 2015; 6 (1): 67–75
3. "Biuretas". Vikipedija, nemokama enciklopedija. 2019 m. Birželio 19 d., 16:37 UTC. 2019 m. Birželio 26 d., 22:18
4. Fuentes F, Quispe I, García J. Biureto metodo standartizavimas, norint kiekybiškai įvertinti baltymus polivalenčiame antiotropiniame serume, pagamintame INS Nacionaliniame biologinių produktų centre. Bol - Inst Nac Salud 2012; 18 (11–12). Galima rasti: repositorio.ins.gob.pe
5. Vyndarių laboratorijos. Bendras baltymų kiekis. Kolorimetrinis metodas suminiam baltymų kiekiui serume ir plazmoje nustatyti. Galima rasti: wiener-lab.com.ar