ORCEINAS: PAGRINDAS IR PARUOŠIMAS - CHEMIJA - 2025

Orceína yra natūralus spalvos violetinė, išgaunamas iš įvairių kerpių kaip orchilla arba archill, krūmiškas kerpės Rocella tinctoria ir Lecanora parella daugiausia. Rocella tinctoria randama Afrikos ir Amerikos žemyne, nors ją galima pakeisti kitomis Europoje esančiomis rūšimis.

Ši dėmė nuo seno buvo plačiai naudojama citogenetiniuose tyrimuose. Šiuo atžvilgiu orceino preparatą, į kurį įeina acto rūgštis, 1941 m. Pristatė LaCourt, todėl jis iš pradžių buvo vadinamas LaCourt metodu.

Orceino ir orceino tirpalo cheminė struktūra. Šaltinis: Wikipedia.org/ „Oguenther at de.wikipedia“ (Dr. Guenther)

Taip pat dėl ​​savo paprastumo ir mažų sąnaudų jis buvo naudojamas gaminant lakmusą (dėmė, išgaunama iš kerpių) ir atliekant histologinius tyrimus (dažant ląsteles ir audinius).

Keli tyrimai panaudojo šį dažymą kartu su kitomis cheminėmis medžiagomis, tokiomis kaip amoniako pikrocarminate ir acto rūgštis, tam, kad nudažytų atitinkamai elastines skaidulas ir chromosomas. Šiuo metu orceinas ir toliau naudojamas citogenetiniuose gyvūnų ir augalų tyrimuose.

Neseniai Silva ir kt. 2017-ieji sėkmingai panaudojo šią dėmę stebėdami įvairius pokyčius, vykstančius vyresniems Čilės suaugusiesiems nykščio odos elastinėse skaidulose. Šis tyrimas atskleidė, kaip nykščio pluoštai keičiasi senstant.

Šia prasme vyresnių nei 80 metų asmenų elastinės skaidulos buvo rausvai juodos spalvos; tuo tarpu jauniausiame (nuo 60 metų) jie būna rausvai rudi. Citoplazma ir kitos ląstelių struktūros pasidaro gelsvai žalios.

Tai leido patvirtinti elastinių pluoštų buvimą ir būklę, atsižvelgiant į jų išdėstymą, kiekį ir vientisumą. Kita vertus, taip pat buvo nurodyta, kad orceinas labai padeda nustatyti aneurizmas ir diagnozuoti arteritą, be kitų ligų.

Pagrindas

Orceinas yra oksazino dažų grupės dalis, o dažymas grindžiamas jo afinitetu DNR. Dažai jungiasi su neigiamuoju šios molekulės krūviu, kurį atstovauja fosfato grupė. Štai kodėl chromosomos nusidažo purpurine spalva.

Tačiau likusios ląstelės struktūros įgauna kitokią spalvą. Konkrečiai kalbant apie elastinius pluoštus, jie yra rausvai rudos spalvos, ląstelių branduoliai nuo mėlynos iki tamsiai violetinės spalvos, o kolagenas nedažo.

Dėl šios priežasties orceinas naudojamas chromatinui dažyti ir diferencijuoti lytį kai kuriose musių rūšyse. Panašiai gali būti dažomi branduoliai ir kai kurie kepenų intarpai, kuriuos sukelia hepatito B antigenai.

Orcein tirpalai turi specifines dažymo funkcijas. Orceinas A atlieka ląstelių membranų minkštinimo funkciją, sukelia jų mirtį ir paralyžiuoja jų dalijimosi procesą. Tuo tarpu orceinas B yra atsakingas už dažymo užbaigimą dėl savo sukibimo su chromosomomis.

Paruošimas

1% aceto-orceino tirpalas

Norint paruošti 1% acetoorceino tirpalą, 2 g orceino ištirpinama 45 ml ledinės acto rūgšties, geriausia karšto, ir kambario temperatūroje įpilama 55 ml distiliuoto vandens.

Tada jis nuolat maišomas, kad homogenizuotų tirpalą ir vėliau leistų pailsėti, kol atvės. Galiausiai jis laikomas 4ºC temperatūroje tamsiuose indeliuose. Šį preparatą „Flores 2012“ panaudojo karvių oocitų brendimo fazėms stebėti.

Pavyzdžiui, tokiu atveju aceto-orceino tirpalas 24 valandas dedamas ant audinio, anksčiau pritvirtinto acto rūgšties ir etanolio mišinyje. Šis dažymo procesas atliekamas 30 minučių, o po to audinys keičia spalvą.

Panašiai jis gali būti naudojamas nustatant daugialąstelinių audinių organelius. Šiuo atveju žandikaulio gleivinės tepinėlis dažomas lašeliu aceto-orceino tirpalo, uždengimas uždedamas ant stiklelio ir galima nedelsiant pastebėti ląstelės branduolį su jo substruktūromis.

Laktoproponinis tirpalas orceinas 1%

Be to, orceiną galima paruošti kartu su kitomis cheminėmis medžiagomis, tokiomis kaip pieno rūgštis ir propiono rūgštis. Tam reikia 1 gramo orceino ištirpinti iš anksto sumaišytame tirpale kambario temperatūroje 23 ml pieno rūgšties ir 23 ml propiono rūgšties; praskiedžiama distiliuotu vandeniu iki 100 ml.

Šiuo lakto-propioniniu orceino tirpalu galima stebėti skirtingas meiotinio augalų ląstelių dalijimosi fazes. Tokiu atveju iš anksto pritvirtintas ir hidrolizuotas mėginys 15 minučių dedamas į lakto-propioninį orceino tirpalą, o tada audinys paskleidžiamas ant mikroskopo plokštelių.

Duque 2016 m. Tyrime dėl poligeninių chromosomų jis panaudojo 2 g orceino, praskiesto acto rūgštyje ir 85% pieno rūgšties, preparatą, skiedžiamą 65% acto rūgšties tirpalu. Galiausiai jis apžiūrėjo chromosomas Drosophila melanogaster seilių liaukose.

Orceinas A ir Orceinas B

Svarbu pažymėti, kad priklausomai nuo mėginio ir to, kas turi būti įvertinta, paruošiamas tinkamas orceino tirpalas. Pavyzdžiui, į orceino A tirpalą pridedama 1N druskos rūgšties, kad būtų galima stebėti dalijamąsias ląsteles.

Kol orceino B tirpalas ištirpinamas 45% acto rūgštyje. Šis metodas yra sutrumpintas dažymo metodas ir paprastai naudojamas kaip priedas dažant chromosomų struktūras.

Galutinės mintys

Nuo senų amžių kerpės, tokios kaip Lecanora, Parmelia ir Umbilicaria, gali būti randamos tokiose Amerikos žemyno šalyse kaip Argentina, kurios yra puikūs orceino šaltiniai. Be to, tokios Europos vietovės kaip Kanarų salos tuo metu buvo stambios orchilijos augintojos.

Tai buvo eksportuota į kitus to paties žemyno miestus, tokius kaip Genuja, ir į tokias šalis kaip Anglija, o Olandija monopolizavo lakmuso gaminimą iš orchilos. Todėl vėliau ši kerpė buvo sumažinta, kol ji netruko išnykti.

Tai paskatino orchilą pakeisti kitais dažų savybes turinčiais augalais. Tačiau sintetinių dažų atsiradimas prisidėjo prie šios orceino šaltinio kerpės prekybos nutraukimo.

Tai buvo įmanoma dėl Cocq, kuris 1812 m. Aprašė orceino sintezę, tada žinodamas, kad jis sintetinamas fenolio junginiu, vadinamu orcinoliu. Nepaisant to, vis dar pirmenybė teikiama natūraliam orceinui.

Taip gali būti todėl, kad orcinolis yra labai stipriai kvepiantis junginys, o ilgas jo poveikis gali kelti pavojų sveikatai, pavyzdžiui, prarasti gebėjimą nustatyti kvapus. Šie hipofizio pažeidimai gali būti nuo laikino iki nuolatinio, tuo didesnė ekspozicija.

Nuorodos

1. Ortega L, García R, Morales C. «Grybų pagaminta lakazė tepama mikrobiologinių dažų (orceino ir krištolo violetinės) skaidymui.» Jaunimas moksle 2. 2015; 633-637. Galima rasti: jovenesenlaciencia.ugto.mx.
2. Barcat J. Orceína ir elastiniai pluoštai. Medicina (Buenos Airės) 2003; 63: 453-456. Galima rasti: Medicinabuenosaires.com.
3. Silva J, Rojas M, Araya C, Villagra F. Nykščio skriejančios veido odos histologinės charakteristikos Čilės individuose su daktilogramos išblukimu. J. Morphol. 2017; 35 (3): 1107-1113. Galima rasti svetainėje: scielo.conicyt.
4. Orrillo M, Merideth B. „Bulvių reprodukcinė biologija ir citogenetika.“ Tarptautinis bulvių centras (CIP). Techninis vadovas. Galima rasti adresu: research.cip.cgiar.org/
5. Flores F. «Karvių oocitų (bos taurus) rinkimas, kultūra ir in vitro brendimas Bolivijos aukštumose." . Nacionalinis Altiplano universitetas, Puno-Peru; 2012. Prieinamas adresu: repositorio.unap.edu.pe.
6. Duque C. Polytenic chromosomos: endoreduplikacijos reiškinio žvilgsnis. Kolumbijos nacionalinis universitetas, Medeljinas; 2016. Galima rasti: edu.
7. Camarena F. Ląstelinė ir molekulinė biologija. Praktikos vadovas. Autonominis Baja Kalifornijos universitetas. 2017.Atsiejama: pez.ens.uabc.mx.
8. FAO / TATENA. 2018. Laukinių ir veisiamų Anastrepha ludens (Loew) muselių diferencijavimo iš įprastų („dviejų lytinių“) ir genetiškai lyties kamienų (Tapachula-7) švitintos ir nešvitintos. Jungtinių Tautų Organizacijos Guillen Aguilar JC, López Muñoz L, López Villalobos EF ir Soto García DN maisto ir žemės ūkio organizacija. Roma, Italija, 95 psl.
9. Orceinas. (2018 m. Lapkričio 30 d.). Vikipedija, nemokama enciklopedija. Konsultacijų data: 2019 m. Liepos 31 d., 03:38, es.wikipedia.org.
10. Merckas Millipore'as. (2018 m., Liepos 16 d.). Orceino mikroskopija sertistaino mikroskopijai. Galima rasti: merckmillipore.com