KSANTOPROTEINO REAKCIJA: PAGRINDIMAS, PROCEDŪRA, PANAUDOJIMAS - CHEMIJA - 2025

Xanthoprotein reakcija yra cheminis procedūra naudojama nustatyti buvimą arba nebuvimą nepakeičiamųjų aromatinių aminorūgščių, pavyzdžiui, tirozino ir triptofano, kuris gali būti laisvoje formoje arba sudaro tirpių baltymų, peptidų arba polipeptidų.

Jis taip pat buvo naudojamas aptikti toksines medžiagas kraujyje, kurių struktūroje yra benzeno grupė. Šis testas taip pat žinomas kaip ksantoproteino Becherio reakcija.

Teigiama ksantoproteino reakcija Šaltinis: paimta iš vaizdo įrašo: https://youtu.be/GzGMbw5w4Wo

Ksantproteino reakcijoje naudojama koncentruota azoto rūgštis, šiluma ir neutralizuojantis šarmas. Jei neutralizavus reakciją tirpalas pasidaro nuo geltonos iki oranžinės spalvos, bandymas laikomas teigiamu. Stebimas dažymas yra dėl azoto junginių, susidarančių nitrifikuojant benzeno grupes, susidarymo.

Jei reikia kiekybiškai įvertinti viso baltymo kiekį, būtina naudoti kitus baltymų nustatymo metodus, tokius kaip Biuretas.

Ksantproteino reakcija dažniausiai naudojama analizuojant medžiagas, kurių cheminė sudėtis nežinoma. Ši reakcija paprastai yra bandymų, kurie padės nustatyti tam tikros medžiagos ar ekstrakto cheminę sudėtį, dalis. Štai kodėl jis yra plačiai naudojamas tyrinėtojų.

Kita vertus, Becherio ksantoproteino reakcija naudojama fenolio ir indolio medžiagų aptikimui kraujyje, leidžiančiai numatyti nefropatijos atsiradimą, prieš padidinant kitus vėlesnius parametrus.

Pagrindas

Reakcija iš esmės nustato benzeno grupės buvimą tiek amino rūgštyse, tiek baltymuose ir peptiduose. Azoto rūgštis veikia ją turinčių aminorūgščių benzeno žiedą, sudarydama fenolinius nitro junginius.

Reakcijai reikia vykdyti šilumą, paprastai susidaro nuosėdos, kurios užtemdo terpę ir virsta pieniška. Krituliai gali būti balti arba gelsvi. Galiausiai reikia šarminimo, kuris paryškina spalvą. Tam naudojama bazė, tokia kaip 40% natrio hidroksidas arba amoniakas.

Reakcija bus aiškinama kaip teigiama, jei kaitinimo metu pastebima stipri geltona spalva arba tamsiai oranžinė, kai reakcija šarminasi. Aptiktos aminorūgštys daugiausia yra tirozinas ir triptofanas.

Ksantoproteino reakcija. Šaltinis: http://esteroisomeras.blogspot.com/2013/06/caracterizacion-de-proteinas.html

Fenilalanino atveju, nors tai yra aromatinė amino rūgštis, šios aminorūgšties benzeno branduolį sunku nitruoti paprastos reakcijos metu, todėl jis skleis neigiamą arba silpną teigiamą reakciją.

Apskritai, ksanthoproteino testą galima papildyti Hopkins-Cole testu, kuris naudojamas specialiai nustatyti triptofaną. Jei ksantproteino testas yra teigiamas, o Hopkins-Cole testas neigiamas, triptofano buvimas tame tirpale yra atmetamas, nurodant, kad daugiausia tirozino. Be to, ją taip pat galima papildyti Millono reakcija tiroinui nustatyti.

Ši reakcija taip pat gali būti naudojama kraujo, plazmos ar pašalinto albumino serumo mėginiams diagnozuoti uremiją ar inkstų nepakankamumą. Šiuo atveju siekiama nustatyti toksines medžiagas (fenolį ir indolį), susidarančias dėl žarnyno puvimo.

Šios medžiagos turi benzeno grupę, todėl sukelia teigiamą ksantoproteino reakciją, net jei reaguojanti medžiaga nėra nei amino rūgštis, nei baltymas.

Procesas

- Ksantproteino reakcija, skirta aminorūgštims aptikti su aromatinėmis grupėmis

Į švarų, sausą mėgintuvėlį įpilkite 1 ml mėginio.

- Įpilkite 0,5 ml koncentruotos azoto rūgšties.

- Mišinį inkubuokite 2 minutes 70 ° C temperatūros vandens vonioje. Anksčiau paruoškite vandens vonią minėtoje temperatūroje.

-Nuimant mėgintuvėlį iš vandens vonios, galima pastebėti, kad tirpalas pasidarė pieniškas ir įgavo tam tikrą gelsvai baltą spalvą.

- Tirpalas atšaldomas lašinant šaltą vandenį į vamzdelio pagrindą.

- Preparatas yra šarminamas, lėtai pridedant (po lašą) 40% natrio hidroksido tirpalą, kol pasikeis spalva.

-Jeigu testas teigiamas, skysčių sąsajoje susidarys tamsiai oranžinis žiedas.

-Jei reakcija bus neigiama, spalvos nebus.

- Ksantproteino reakcija aptikti fenolio ir indolio medžiagas kraujyje

- 5 cc veninio kraujo, plazmos ar serumo išpilkite 5 cm3 20% trichloracto rūgšties; Gerai sumaišykite ir filtruokite.

- paimami 2 cm3 filtrato ir sumaišomi su 0,5 cc azoto rūgšties. Tada jis kaitinamas iki virimo, tam vamzdis 30 sekundžių dedamas tiesiai virš lengvesnės liepsnos. Jis atšaldomas vandeniu ir pridedama 1,5 33% natrio chlorido.

Jis aiškinamas taip:

-Neigiamas rezultatas: gelsva spalva.

-Pozityvus (+) citrinos geltonos spalvos rezultatas.

- (++) aukso geltona.

- (+++) nuo tamsiai geltonos iki rudos spalvos

Jis taip pat gali būti aiškinamas naudojant referencinę Autenrieth kolorimetrinę skalę, susidedančią iš įvairių kalio dichromato koncentracijų. Jis paruošiamas santykiu 10:10 iš 0,03874% pradinio tirpalo. Kiekvienas mėgintuvėlis nurodo procentą.

Interpretacijos skalės

Yra dvi aiškinimo skalės, vadinamos senovės ir moderniomis. Normaliosios vertės yra:

Senas stalas: nuo 75 iki 85%

Modernus stalas: nuo 15 iki 25%

Jei mėgintuvėlio spalva yra dviejų standartinių mėgintuvėlių viduryje, tarp dviejų matavimų padaryta vidutinė vertė.

Kalio dichromato etaloninis tirpalas paruošiamas taip: matuojama 7,9 ml 10 N kalio dichromato, praskiedžiama matavimo kolba iki 100 ml. Skiedimai atliekami taip, kaip parodyta „Autenrieth“ kolorimetrinėje lentelėje.

Autenrietinė kolorimetrinė lentelė. Šaltinis: Vásquez A. Ksantoproteino reakcija. Ispanijos klinikinis žurnalas. 1949 m .; 35 (5): 326-327. Galima įsigyti: Elsevier

Naudokite

Ksantproteino reakcijos naudojimas yra dalis biocheminių bandymų, kurie padeda žinoti kai kurių nežinomų medžiagų cheminę sudėtį. Šis testas padeda atlikti cheminę analizę, aptikti baltymus, kurių struktūroje yra benzeno grupių.

Ši reakcija yra plačiai naudojama tyrinėtojų atliekant įvairius dominančių medžiagų tyrimus.

Šia prasme Vásquez-Jorge ir bendradarbiai panaudojo šią ir kitas reakcijas tirdami baltymų kiekį skysčiuose, išgautuose iš mangrovių austrių (Crassostrea rhizophorae).

Panašiai, Rojasas ir kt. (2009) naudojo testų seriją, įskaitant ksantoproteino reakciją, norėdami ištirti glikomakropeptidus rikotos išrūgų nuosėdose.

Kita vertus, Volhardas modifikavo Becherio ksantoproteino reakciją, kad ji būtų naudojama kitiems tikslams. Tokiu atveju, norint aptikti fenolines ir indolines medžiagas, kurios gali pakilti daug anksčiau (savaitėmis ar mėnesiais), kol padidėja šlapalo ir liekamojo azoto kiekis kraujyje.

Šios toksiškos atliekos susidaro dėl žarnyno puvimo maisto.

Šios medžiagos kaupiasi kraujyje, kai jos nėra tinkamai pašalintos, todėl teigiamas ksanthoproteinų testas gali numatyti ankstyvą tinkamo inkstų nepakankamumo ar uremijos būseną.

Atsižvelgiant į spalvos intensyvumą, galite nustatyti, kokia ji pažengusi. Tokiu atveju testas yra kiekybinis.

Sveikiems žmonėms šis testas suteikia silpną geltoną spalvą, atitinkančią normalų triptofano ir tirozino kiekį kraujyje.

Pacientams, sergantiems inkstais, ksantoproteino reakcija yra labai teigiama, nes yra šių medžiagų: fenolio, indolio, parakrezolio, aromatinių deguonies rūgščių.

Atsargumo priemonės

Šį testą turi atlikti apmokyti specialistai. Reikia atsižvelgti į visus biologinio saugumo reikalavimus, nes naudojami reagentai yra ėsdinančios rūgštys ir bazės.

Jei atsitiktinai keli lašai azoto rūgšties nukris ant odos ar ant nagų, jie pagels, nes abiejose struktūrose yra baltymų. Be to, ant odos ir gleivinių jis sukelia stiprų nudegimą.

Patekus ant odos, reikia nedelsiant plauti vietą muilu ir vandeniu maždaug 20 minučių.

Jei jis pateko į akis, jį reikia nuplauti dideliu kiekiu gėlo vandens, stengiantis, kad akys neatsirastų.

Nuorodos

1. „Ksantoproteino reakcija“ Vikipedija, nemokama enciklopedija. 2019 m. Rugsėjo 2 d., 17:49 UTC. 2019 m. Spalio 21 d. 20:31 wikipedia.org/
2. Vásquez-Jorge Y, Guerra-Molina L, Quintana-Tamayo J, Ramírez-Arzuaga J, Fernando-Ballesteros R, Vásquez-Jorge Y. Mangrovių austrių (Crassostrea rhizophorae) skysčių ekstraktų fizikinis ir cheminis apibūdinimas bei baltymų kiekis. „Cubana de Química“, 2014 m .; 26 (1): 66–74. Galima įsigyti „Redalyc“.
3. Rojas E, Valbuena E, Torres G, García A, Piñero M, Galindo L. GMP išskyrimas ir atlikimas nusodinant išrūgas trichloracto acto rūgštimi. Cient. (Marakaibas) 2009; 19 (3): 295–302. Galima įsigyti: ve.scielo.
4. Vásquez A. Ksantoproteino reakcija. Ispanijos klinikinis žurnalas. 1949 m .; 35 (5): 326-327. Galima įsigyti: Elsevier
5. Gálvez I, Gárate O. Becherio ir Andreweso reakcijos šlapimo chirurgijoje. Ispanijos ligoninės urologijos tarnyba. 395–404 Argentinos urologijos žurnalas