HEMATOKSILINO-EOZINO DAŽYMAS: CHARAKTERISTIKOS, PANAUDOJIMAS, BŪDAI - CHEMIJA - 2025

Hematoksilinu - eozinas yra dažymo būdas naudojant dažiklių hematoksilinu ir eozinu derinys. Ši dažų pora sudaro puikų duetą, nes hematoksilinas veikia kaip pagrindinis dažiklis, o eozinas yra rūgštinis dažiklis.

Bazinių arba rūgštinių dažų žymėjimas netaikomas tirpale gautam pH, o kalbama apie vyraujančią proporciją, atsižvelgiant į jų turimus anijoninius ar katijoninius krūvius arba į chromoforų grupės vietą.

Hematoksilinu - eozinu (HE) nusidažytas išilginis stulpelinis epitelis Šaltinis: Toddas Strausas ir Vladimiras Osipovas

Šia prasme hematoksilinas laikomas pagrindiniu (katijoniniu) dažikliu, todėl turi afinitetą rūgšties struktūroms, tokioms kaip ląstelių branduolys. Eozinas, būdamas rūgštinis (anijoninis) dažiklis, turi afinitetą šarminėms arba bazinėms struktūroms, tokioms kaip ląstelių citoplazma.

Dėl šios priežasties šis dažų derinys yra plačiai naudojamas dažant audinius, nes tai leidžia aiškiai atskirti branduolius ir citoplazmas. Branduoliai nusidažo tamsiai mėlyna arba purpurine spalva, o citoplazma rausva.

Dėl hematoksilino ir eozino dažymas yra vienas iš plačiausiai naudojamų dažymo būdų histologijoje ir citologijoje dėl jo lengvo apdorojimo ir mažų išlaidų. Jis naudojamas vizualizuoti ląsteles, storus nervų pluoštus ir tam tikrus mikroorganizmus audiniuose, pavyzdžiui: parazitus, grybelius ir bakterijas.

charakteristikos

Hematoksilinas

Hematoksilinas yra neutralus dažiklis. Tačiau spalvą suteikiantis komponentas (chromoforas) yra katijoniniame arba pagrindiniame molekulės centre. Taigi jos afinitetas rūgštinėms struktūroms. Jo cheminė formulė yra C ₁₆ H ₁₄ O _6, o mokslinis pavadinimas - 7,11b-dihidroindeno chromene-3, 4,6a, 9,10 (6 H) -pentolis.

Tai daugiausia nudažo ląstelių branduolius, nes jose gausu nukleorūgščių. Tai taip pat gali nudažyti virusinės kilmės citoplazminius inkliuzus.

Kad hematoksilinas nusidažytų, jis turi būti oksiduotas ir sujungtas su metalu. Pastaroji bus skirta pritvirtinti prie audinio, tai yra, ji veiks kaip kandiklis.

Kai hematoksilinas oksiduojasi, jis vadinamas hemateinu. Oksidacija pasiekiama veikiant reagentui deguonimi (senstant) arba medžiagoms, kurios padeda jo oksidacijai (cheminei oksidacijai).

Eozinas

Eozinas yra dažai, kurie nusidažo raudona arba rausva spalva. Jis netirpsta vandenyje, nors yra ir vandenyje tirpaus varianto. Paprastai eozinas gaunamas ištirpinant alkoholyje (95 ° etanolyje).

Jis dažo citoplazmas, raumenų skaidulas, citoplazminius organelius ir kolageną, tačiau nedažo ląstelių branduolių. Taip yra todėl, kad jis yra neigiamai įkrautas, todėl turi afinitetą teigiamai įkrautoms struktūroms.

Yra du eozino tipai „Y“ ir „B“. Eozinas „Y“ yra žinomas kaip geltonasis eozinas. Jo mokslinis pavadinimas yra tetrabromo-uoresceinas, o jo cheminė formulė yra C ₂₀ H ₈ Br ₄ O ₅ .

Kita vertus, eozinas „B“ kartais vadinamas melsvu eritrosinu B. Jo mokslinis pavadinimas yra dibromodinitro-uoresceinas, o formulė - C ₂₀ H ₈ Br ₂ N ₂ O ₉ . Abu yra labai panašūs ir skirtumas tarp vieno ar kito naudojimo tikrai nėra pastebimas. Tačiau populiariausias yra eozinas „Y“.

Eozinas turi savybę atskirti gyvą ir negyvą ląstelę, nes jis tik gali perbraukti membraną, kad nudažytų savo citoplazmą mirusioms ląstelėms, paliekant ląstelės citoplazmą bespalvę, jei ji liks gyva.

Programos

Nervų pluošto dažymas

Storosios nervinės skaidulos gali būti dažytos ir identifikuojamos hematoksilino-eozinu. Tačiau plonoms nervinėms skaiduloms dažyti nenaudinga, nes pastarosioms vizualizuoti reikalingas sidabro dažymas.

Histologinės odos sekcijos dėmės

Dažant raginį odos sluoksnį, veikiantis dažas yra eozinas, nes šiame lygyje ląstelės neturi branduolio.

Granuliuotame odos sluoksnyje hematoksilinas stipriai nudažo keratohyalin granules granulių ląstelių viduje. Priešingai, nugaros odos sluoksnis yra silpnai nudažytas hematoksilinu, o bazinis arba gemalo sluoksnis yra gana beicuotas.

Eozinas dažo visų ląstelių citoplazmą, o spalvos intensyvumas gali skirtis skirtinguose sluoksniuose.

Išmatų mėginių dažymas hematoksilino eozinu

Gómez ir kt., 2005 m. Įrodė, kad hematoksilino ir eozino dažymas buvo veiksmingesnis nustatant amoebiazės atvejus, atsirandančius dėl Entamoeba histolytica ir Entamoeba, nei šviežias vizualizacijos metodas (fiziologinis tirpalas ir lugolis) pacientams, sergantiems ūmine viduriavimo liga.

Taip pat įrodyta, kad jis yra labai jautrus nustatant eritrofagocitozę (amebias, kurios apėmė eritrocitus).

Histologinių pjūvių dažymas infekcijai diagnozuoti

Walwyn ir kt., 2004 m. Pasiūlė histologines dėmes naudoti infekciją sukeliantiems mikroorganizmams aptikti.

Naudodami hematoksilino-eozino dažymą, jie sugebėjo vizualizuoti infekcijas, kurias sukelia Clostridium, Actinomyces, spirillae ar Candida. Jie taip pat galėjo stebėti parazito Sarcoptes escabiei buvimą odos pjūviuose ir virusų inkliuzus citomegalovirusu ir herpesu įvairių audinių skyriuose.

Technikos

Dėl histologinių mėginių

Histologinis pjūvio dažymas atliekamas per keletą etapų. Pirmas dalykas yra gauti histologinį skyrių. Tai reikia vaškuoti, kad vėliau būtų gauti pjūviai (ypač smulkūs) su mikrotoma. Techniką sudaro šie veiksmai:

1-Parafino pertekliaus pašalinimas : tam galite naudoti ksilolį arba Heme-D, panardinkite 3–5 minutes.

2-mėginio rehidracija: tai pasiekiama panardinant mėginį į skirtingas alkoholių (etanolio) koncentracijas mažėjančia tvarka (100 °, 90 °, 70 °). Visais atvejais 7 minutes.

3-Alkoholio pertekliaus pašalinimas: tam jis 7 minutes panardinamas į vandenį.

4-dažymas hematoksilinu: mėginys 6-10 minučių panardinamas į dėklą, kuriame yra hematoksilinas. Ekspozicijos laikas priklauso nuo mėginio dydžio ir storio.

5-Hematoksilino pertekliaus pašalinimas: jis 5 minutes plaunamas vandeniu ir po to greitai praleidžiamas (10-20 sekundžių) per rūgštinį alkoholį. Vėliau jis dar 5 minutes plaunamas vandeniu. Tada jis 1 min. Panardinamas į etanolį 96 ° temperatūroje.

6 dažymas eozinu: tam mėginys 5 minutes panardinamas į eozino dėklą.

7-Mėginio dehidracija : tam jis vėl praleidžiamas per alkoholio dėklus (etanolį), bet šį kartą didėjimo tvarka. (70 °, 90 °, 100 °). (Atitinkamai 5 sekundes, 5 sekundes, 1 minutę).

8-Mėginio paaiškinimas : tam jis 5–10 minučių yra veikiamas ksilolio ir džiovinamas, kad galutinai užsandarintų Kanados balzamu ar kita panašia medžiaga.

Išmatų mėginių ieškote

Ant stiklinės su paciento išmatomis tepinėlis tepamas 5 minutes 80% alkoholiu. Lapas 5 minutes panardinamas į hematoksiliną ir nedelsiant nuplaunamas vandeniu.

Vėliau jis greitai panardinamas į rūgštinį alkoholį, o po to į amoniako vandenį. Jis plaunamas vandeniu. Jis dažomas 5 minutes eozine. Mėginys dehidratuojamas, kaip paaiškinta ankstesniame pasaulyje, ir galiausiai praplaunamas ksilenu.

Reagentų paruošimas

- hematoksilinas

Viename litre distiliuoto vandens ištirpinkite 50 gramų kalio arba amonio aliuminio sulfato. Kai jis visiškai ištirps, įpilkite 1 gramą kristalinto hematoksilino. Kai visiškai ištirpsta, pridedama 1 g citrinos rūgšties kartu su 50 g chloralinio hidrato ir 0,2 g natrio jodato.

Mišinys virinamas 5 minutes, po to paliekamas atvėsti ir filtruojamas, kad būtų pašalintos visos kietosios dalelės. Tokiu būdu paruoštas reagentas gali būti nedelsiant panaudotas.

- Eozinas

Jį galima paruošti su alkoholio pagrindu arba su vandens pagrindu.

Alkoholinis eozinas

100 ml etanolio 95 ° temperatūroje ištirpinkite 0,5 g eozino „Y“. Tada įlašinkite kelis lašus ledinės acto rūgšties.

2% vandeninio eozino

1250 ml distiliuoto vandens ištirpinkite 25 gramus vandenyje tirpaus eozino „Y“. Tada įlašinkite kelis lašus ledinės acto rūgšties.

Rūgštus alkoholis

Išmatuokite 0,5 ml koncentruotos druskos rūgšties ir praskieskite 100 ml absoliučiuoju alkoholiu.

Amoniako vanduo

Išmatuokite 0,5 ml koncentruoto amoniako ir praskieskite distiliuotu vandeniu iki 100 ml.

Nuorodos

1. Navarrete, G. Odos histologija. Rev Fac Med UNAM 2003; 46 (4): 130–133. Galima rasti: medigraphic.com
2. „Gómez-Rivera N“, „Molina A“, „García M“, „Castillo J“, „Castillo J“, „García R“, „Fonseca I“, „Valenzuela O“.
3. Entamoeba histolytica / E identifikavimas Dėl ūmaus viduriavimo skiriasi šviežios amebos technika ir jos dažymas hematoksilino eozinu. „Mex Mex Pediatr“ 2005 m .; 72 (3); 109–112. Galima rasti: medigraphic.com
4. Walwyn V, Iglesias M, Almarales M, Acosta N, Mera A, Cabrejas M. Histologinių metodų naudingumas diagnozuojant infekciją anatominiuose bandiniuose. „Rev Cub Med Mil“, 2004; 33 (2). Galima rasti: scielo.sld
5. „PanReac AppliChem ITW“ reagentai. Hematoksilino-eozino dėmė. 2017 m., Ispanija. Galima rasti: itwreagents.com
6. Eozinas. Vikipedija, nemokama enciklopedija. 2018 m. Lapkričio 7 d., 08:18 UTC. 2019 m. Rugpjūčio 4 d., 22:13 en.wikipedia.org
7. "Hematoksilinas". Vikipedija, nemokama enciklopedija. 2019 m. Gegužės 3 d., 11:23 UTC. 2019 m. Rugpjūčio 4 d., 22:48 wikipedia.org