KAPSULĖS DAŽYMAS: PAGRINDIMAS IR BŪDAI - BIOLOGIJA - 2025

Dažymo kapsulėje yra skirtumas dažymo technika, kuri yra streso polisacharido struktūros turtą aplinkinių tam tikrus vadinamųjų kapsulė bakterijas ir mieles. Jis naudojamas klinikinėse laboratorijose siekiant padėti diagnozuoti tam tikras patologijas, kurias sukelia kapsuliuoti mikroorganizmai.

Jis taip pat naudojamas mokymo laboratorijose, siekiant parodyti šią morfologinę struktūrą sveikatos mokslų karjeros studentams, tokiems kaip: medicina, bioanalizė, slauga ar citotechnologija.

Klebsiella pneumoniae tepinėlis dažytas kapsulės dėme. Indijos rašalo metodas su safraninu. Šaltinis: А.А.В

Yra keletas paprastų metodų, padedančių įrodyti kapsulės buvimą ją turinčiuose mikroorganizmuose: neigiama dėmė, Anthony dėmė ir variantas, sujungiantis du ankstesnius.

Neigiamas dažymas daugiausia naudojamas CSF mėginiuose, kai įtariama, kad yra mielių Cryptococcus neoformans. Šios mielės yra dažna meningito priežastis.

Ši technika naudoja nigrosiną arba indišką rašalą ir yra pagrįsta kontrastų sukūrimu tarp preparato fono ir nepralaidžios mikroorganizmo kapsulės. Fonas tampa tamsus, o kapsulė yra bespalvė. Tokiu būdu atskleidžiama ši struktūra.

Dėl Anthony metodo galima pasakyti, kad jis dažniausiai naudojamas mokymo laboratorijose siekiant parodyti polisacharidų struktūrą tokiose bakterijose kaip Klebsiella pneumoniae, Streptococcus pneumoniae ir Neisseria meningitidis.

Diagnostikos tikslais ši technika naudojama labai retai, nes yra ir kitų įprastų tyrimų, leidžiančių identifikuoti šiuos mikroorganizmus.

Pagrindas

Kapsulė yra stiprios struktūros polisacharidas. Tai apsaugo mikroorganizmus nuo fagocitozės, todėl sunkiai įsiskverbia į struktūrą.

Štai kodėl kapsulių dėmės yra pagrįstos kontrastu. Dažikliai dažo preparato dugną, kol kapsulė išlieka bespalvė.

Todėl naudojant šias metodikas kapsulė yra lengvai atpažįstama. Jei mikroorganizmas neturi kapsulės, tokio spalvos dažymo nebus galima atskirti, nes viskas bus nudažyta vienoda spalva.

Visi kapsulės dažymo būdai yra vienodi, nepaisant skirtingų dažų ir procedūrų naudojimo.

Technikos par

-Antonio dėmė

Anthony dėmėje kaip krištolas naudojamas krištolo violetinė spalva. Tai nudažys bakterijos kūną ir foną purpurine spalva.

Kita vertus, naudojamas 20% vario sulfatas. Tai tarnauja kaip skalbimo tirpalas, tai yra pašalina violetinio kristalo perteklių iš preparato, todėl kapsulės tampa skaidrios, tačiau be bakterijų kūno ar fono neprarandama spalva.

medžiagos

- Vaivorykštės pienas.

- Pristatymas.

- 1% violetinio kristalo.

- 20% vario sulfato.

- Optinis mikroskopas.

- Panardinamasis aliejus.

Procesas

Ši technika susideda iš:

1. Mikroorganizmus 36 valandas kultivuokite piene.
2. Į stiklelio galą įdėkite lašą kultūros ir šalia jos įdėkite violetinės stiklinės lašą, sumaišykite ir paskleiskite su kitos skaidrės galu.
3. Sausas oras ir nekaitinkite.
4. Nuplaukite 20% vario sulfato tirpalu, leiskite išdžiūti.
5. Stebėkite mikroskopu su panardinimo objektyvu. Paieška link sklaidos galų.

Svarbu nenaudoti šilumos nei tvirtinti, nei džiūti, nes tai sugadina kapsulę. Taip pat neplaukite vandeniu.

Interpretacija

Vaivorykštės pienas yra puiki mitybinė terpė, nes ji suteikia būtinas maistines medžiagas mikroorganizmams, kad susidarytų iškilioji kapsulė.

Kita vertus, nestiprus pienas suformuos storą ir kompaktišką dugną, kuris bus nudažytas purpurine spalva kartu su bakterijos kūnu, tačiau kapsulė, kuri supa mikroorganizmą, liks bespalvė. Todėl aplink bakterijos kūną pastebimas aiškus halogenas.

Antikūno dėme dažyto Klebsiella pneumoniae tepinėlio mikroskopinio stebėjimo grafinis vaizdas. Šaltinis: Sudarė autorius MSc. Marielsa Gil.

Privalumas

Tai paprasta atlikimo technika. Nereikia tvirtinti.

Taip pat reikėtų atkreipti dėmesį į tai, kad galima naudoti ir kitas terpes, tačiau pirmenybė teikiama pieno terpei, nes jos pranašumas yra tas, kad joje yra žymių kapsulių.

Trūkumai

Tai šiek tiek daugiau darbo reikalaujanti technika nei neigiamas dažymas, o jos vizualizacijai reikia laukti, kol preparatas visiškai išdžius.

-Negatyvus dažymas

medžiagos

- Skaidrės skaidres.

- Kultūros terpė su mikroorganizmu.

- kiniškas rašalas arba nigrosinas.

- Optinis mikroskopas.

- fiziologinis fiziologinis tirpalas.

Procesas

Ant dangtelio užlašinkite lašą fiziologinio tirpalo ir ištirpinkite nedidelę dalį mikrobų kultūros. Svarbu, kad preparatas nebūtų per storas. Tada įdėkite lašą kinų rašalo ar nigrosino ir išmaišykite.

Tada virš preparato uždedamas dangtelio lapas, perpildamas skysčio. Jis stebimas mikroskopu, pirmiausia sutelkiant dėmesį į 10X objektyvą, o po to pereinant į 40X.

Ši technika taip pat gali būti naudojama tiesiogiai CSF mėginiuose. T. y., Užuot įdėjęs lašą mikrobų kultūros, dedamas CSF lašas.

Privalumas

Tai paprastas atlikimo metodas, tuo pačiu ir nebrangus. Tai nereikalauja, kad preparatas būtų fiksuojamas ar džiovinamas.

Trūkumai

Trūkumas yra tas, kad prieš džiovinant preparatą, jį reikia stebėti mikroskopu, nes tokiu atveju mikroorganizmai susitraukia, o tai vizualizavimą apsunkina.

Kita vertus, klaidingi teigiami rezultatai gali įvykti, jei analitikas yra nepatyręs, nes leukocitai dažnai yra painiojami su mielėmis.

Mielių kapsulių stebėjimas naudojant kinišką rašalą ar nigrosino metodą turėtų būti laikomas spėjama Cryptococcus neoformans diagnoze, kol tai nebus parodyta kartu su kultūra.

Taip yra todėl, kad yra kitų mielių, kurios gali sukelti meningitą, o ne tik Cryptococcus neoformans, pavyzdžiui, Candida ir Rhodotorula genties, taip pat kitų Cryptococcus rūšių.

Interpretacija

Jei yra kapsuliuotų mikroorganizmų, pastebimas tamsus fonas, kurio skystyje plūduriuoja skaidrūs kūnai, pabrėžiantys kapsulės buvimą.

„Cryptococcus neoformans“ kapsulė dažyta kinų rašalu. Šaltinis: Nuotraukų kreditas: Turinio teikėjai (-ai): CDC / Dr. Leanor haley

-Indijos rašalo technika

Ši technika taip pat gali būti atliekama naudojant nigrosiną. Tai yra anksčiau paaiškintų metodų derinys. Šioje technikoje naudojamas krištolo violetinis ir indiškas rašalas arba nigrosinas.

Bakterijų kūnas pasidaro purpurinis iš krištolo violetinės, nes jis yra neigiamai įkrautas, tuo tarpu nigrosinas dažo tepinėlio dugną. Jei bakterija turi kapsulę, ji pasirodys kaip skaidrus halogenas aplink mikroorganizmą.

Kristalų violetinę spalvą galima pakeisti bet kuria iš šių spalvų: safraninu, baziniu fuksinu arba metileno mėlyna.

medžiagos

- Violetinė taurė.

- Nigrosinas arba indiškas rašalas.

- Skaidrės skaidres.

- Mikroskopas.

Procesas

- Auginkite mikroorganizmą kultūrinėje terpėje.

- Ant stiklelio galo uždėkite kultūros lašą ir šalia jo įdėkite lašą indiško rašalo ar nigrosino kristalų, sumaišykite ir paskleiskite su kitos skaidrės galu.

- Sausas oras ir neuždenkite šilumos.

- 1 minutę uždenkite violetinių kristalų tirpalu, plaukite distiliuotu vandeniu, bet labai švelniai (minkšta srove), leiskite išdžiūti lauke.

- Stebėkite po mikroskopu, panardindami objektyvą. Paieška link sklaidos galų.

Interpretacija

Bus matomas purpurinis bakterijų kūnas ir tamsus fonas. Kapsulė, jei jos yra, bus bespalvė aplink bakterijas.

Nuorodos

1. Covadonga A, Silóniz M, Serrano S. Pagrindiniai mikrobiologijos metodai. Bakterijų stebėjimas. Reduka (biologija). Mikrobiologijos serija. 2010; 3 (5): 15–38. D
2. López-Jácome L, Hernández-Durán M, Colín-Castro C, Ortega-Peña S, Cerón-González G, Franco-Cendejas R. Pagrindinės dėmės mikrobiologijos laboratorijoje. Mediagraphic.org. 2014; 3 (1): 10-18. Galima rasti: medigraphic.com
3. Gil M. Neigiamas dažymas: pagrindimas, technika, pranašumai ir trūkumai. Lifeder.com.
4. „Forbes B“, Sahm D, Weissfeld A. 2009. „Bailey & Scott“ mikrobiologinė diagnozė. 12 red. Argentina. „Panamericana SA“ redakcija
5. Tankeshwar A. Kapsulės dėmė: principas, procedūra ir rezultatai. 2019. Medicininės mikrobiologijos vadovas. Galima rasti svetainėje: microbeonline.com