KINIJONO DAŽYMAS: PAGRINDIMAS IR BŪDAI - BIOLOGIJA - 2025

Kinyoun dažymo yra dažymo metodas yra dėmių bakterijų ir parazitų atsparus rūgšties alkoholio. Jis gimė pakeitus Ziehl-Neelsen spalvą; Abu metodai yra aiškinami vienodai, tačiau skiriasi dviem elementais: ruošiant pagrindinį reagentą ir tuo, kad Kinyoun technika nenaudoja šilumos.

Dėl šios priežasties jis taip pat žinomas kaip šaltai modifikuota Ziehl-Neelsen arba Kinyoun šalta dėmė. Jis skirtas Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium leprae, netipiškoms mikobakterijoms, Nocardias sp, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium meleagridis, Cryptosporidium felis, Cryptosporidium muris ir Cyclosporas cayetanensis dažymui.

Cryptosporidium parvum nusidažė Kinyoun dėme. „Punlop Anusonpornperm“, iš „Wikimedia Commons“

Verta paminėti, kad šia technika „Nocardia“ pasireiškia silpnai, nes jos yra iš dalies atsparios rūgštims ir alkoholiui, todėl šiai genčiai yra būdinga metodikos modifikacija.

Savo ruožtu šaltas Kinyoun metodas buvo derinamas su trichromo metodu, modifikuotu Didier, kad būtų galima aptikti kokcidijas (Cryptosporidium parvum ir Isospora belli) ir mikrosporidijų sporas (Enterocytozoon bieneusi ir Encephalitozoon intestinalis).

Pagrindas

Pagrindinis dažymo reagentas yra karbolfuksinas arba karbolas fuksinas, kuris pasižymi savybe prisijungti prie karbolio rūgščių, esančių mikobakterijų ir tam tikrų parazitų lipidų turinčių vaškinių ląstelių sienoje (mikolas rūgštys).

Šiam ryšiui nepaneigia rūgštinis baliklis; todėl mikroorganizmai yra apibūdinami kaip greiti rūgštys.

Skirtingai nuo Ziehl-Neelsen metodo, kuris dažą fiksuoja karščiu, Kinyoun technikoje šis žingsnis nėra būtinas, nes šiam metodui paruoštame karbolinio fuksino tirpale yra didelė fenolio koncentracija.

Fenolis ištirpina lipidinę medžiagą ląstelės sienelėje, leisdamas patekti karbolfuksino dažams. Kai dažai prasiskverbia, jie išlieka fiksuoti, nepaisant skalbimo rūgštimi.

Tokiu būdu greitai rūgštį sukeliantys mikroorganizmai įgauna būdingą raudoną spalvą, o viskas, kas nėra greita rūgštis, keičia spalvą ir nusidažo mėlyna spalva.

Technika

medžiagos

- Modifikuotas karbolas fuksinas.

- Alkoholio rūgštis.

- metileno mėlyna.

Kinyoun carbol fuchsin paruošimas

- Pagrindinis fuksinas: 4 gr.

- Fenolis: 8 ml.

- Alkoholis (95%): 20 ml.

- Distiliuotas vanduo: 100 ml.

Pagrindinį fuksiną reikia lėtai ištirpinti alkoholyje, nuolat maišant. Vėliau kristalizuotas fenolis išlydomas vandens vonioje, esant 56 ° C. Ištirpinus, į aukščiau paruoštą fuksino tirpalą pridedama 8 ml.

Rūgštinio alkoholio paruošimas

- Koncentruota druskos rūgštis: 3 ml.

- Etanolis (95%): 97 ml.

Jis turi būti išmatuotas, sujungtas ir sumaišytas.

Metileno mėlynojo kontrasto dažų paruošimas

- metileno mėlynasis: 0,3 g.

- Distiliuotas vanduo: 100 ml.

Jis pasveriamas ir ištirpinamas.

Kinijono dažymo technika

1- Paruoškite tepinėlį tiesiai iš mėginio, kuris, be kita ko, gali būti skrepliai, plaučių skystis, šlapimo nuosėdos, smegenų skystis ar išmatos; arba iš mikroorganizmų suspensijos, gautos iš grynų kolonijų, išsivysčiusių pirminėse kultūros terpėse.

2- Stiprinkite tepinėlį karščiu.

3 - Uždėkite tepinėlį ant dažymo tiltelio ir uždenkite paruoštu Kinio karbolo fuksino reagentu. Leiskite pailsėti nuo 3 iki 5 minučių.

4- Nuplaukite distiliuotu vandeniu.

5 - 3 minutes balinkite rūgštiniu alkoholiu ir vėl nuplaukite distiliuotu vandeniu.

6- Dar kartą balinkite rūgštiniu alkoholiu 1 arba 2 minutes, kol nebeliks dažiklių.

7- Nuplaukite distiliuotu vandeniu ir leiskite nutekėti, pastatydami skaidrę vertikalioje padėtyje.

8- Preparatą uždenkite metileno mėlyna ir palikite veikti 4 minutes.

9 - Nuplaukite distiliuotu vandeniu ir leiskite išdžiūti.

10 - ištirkite 40X, tada 100X.

Norėdami pagerinti ir pagreitinti greitai rūgščių mikroorganizmų dažymą, įlašinkite 1 lašą drėkinamosios medžiagos (pvz., Tergitol Nr. 7) į 30 arba 40 ml Kinyoun Carbol Fuchsin.

Kai kurios laboratorijos keičia metileno mėlynojo kontrasto dažus į ryškiai žalią arba pikrino rūgštį; Pirmasis suteikia žalią fono spalvą, o antrasis sukuria geltoną spalvą.

Speciali „Kinyoun“ technika, skirta „Nocardias“

Norint pagerinti Nocardia genties bakterijų dažymą, naudojama Kinyoun dėmės modifikacija. Metodas yra toks:

1 - 3 minutes uždenkite tepinėlį Kinyoun carbol fuksinu.

2 - nuplaukite distiliuotu vandeniu.

3 - Trumpai nudažykite rūgščiu alkoholiu, paruoštu 3%, kol nebeliks daugiau dažiklių.

4- Dar kartą nuplaukite distiliuotu vandeniu.

5- Uždenkite preparatą metileno mėlyna ir leiskite jam veikti 30 sekundžių.

6- Nuplaukite distiliuotu vandeniu ir leiskite išdžiūti.

Kombinuotas karbolio fuksino ir trichromo metodas, modifikuotas Didier

Ši metodika rekomenduojama tuo pačiu metu analizuoti išmatų mėginius, siekiant nustatyti kokcidijas ir Microsporidium spores. Taikoma tokia procedūra:

1- 10 minučių uždenkite tepinėlį Kinyoun carbol fuksinu.

2- Nuimkite dažiklį ir nuplaukite distiliuotu vandeniu.

3 - Balinkite 30 sekundžių druskos rūgšties alkoholiu.

4- Dar kartą nuplaukite distiliuotu vandeniu.

5- Uždenkite tepinėlį trichromo tirpalu 30 minučių 37 ° C temperatūroje.

6- Nuplaukite distiliuotu vandeniu.

7 - 10 sekundžių balinkite acto rūgšties alkoholiu.

8- Tešlą 30 sekundžių plaukite 95% etanoliu.

QA

Kaip teigiama kontrolė paruošiami tepinėliai su Mycobacterium tuberculosis padermėmis ir dažomi reagentais, paruoštais siekiant patikrinti, ar bakterijos įgavo reikiamą spalvą (raudona fuksija).

Neigiamą kontrolę taip pat galima naudoti ruošiant tepinėlius su bet kokiais kamienais, išskyrus rūgštinį alkoholį, tokiu būdu patikrinant, ar visas mėginys įgauna kontrastingą spalvą.

Kinyoun technika, palyginti su Ziehl-Neelsen technika

Kinyoun technika yra paprastesnė, nes pašalina kaitinimo žingsnį, tačiau pagrindinis jos pranašumas yra tai, kad per ilgą laiką išvengiama labai toksiškų ir vėžį sukeliančių garų. Todėl Kinyoun dėmė yra saugesnė dažančiam personalui.

Svarbu atsižvelgti į tai, kad reagentai neturėtų tiesioginio sąlyčio su oda, nes jie yra ėsdinantys, o baliklis yra degus.

Kalbant apie trūkumus, neigiamas tepinėlis nebūtinai rodo, kad organizmo nėra. Be to, esant ląstelinėms šiukšlėms, gali atsirasti klaidingų teigiamų rezultatų, todėl diagnozė gali būti paini.

Nuoroda

1. Taikomoji klinikinė chemija. (2016). „BK Kinyoun Kit“. Prieinamas šiuo adresu: cromakit.es
2. Orozco-Rico Miguelis. Kinyoun dėmė ir dvi kokcidijos ŽIV. Medicinos žurnalas MD. 2011; 3 (2): 137
3. „Forbes B“, „Sahm D“, „Weissfeld A“ (2009). Bailey ir Scotto mikrobiologinė diagnozė. 12 red. Argentina. „Panamericana SA“ redakcija
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinė diagnostika. (5-asis leidimas). Argentina, „Panamericana SA“ redakcija
5. Vikipedijos bendradarbiai. "Kinyoun dėmė". Vikipedija, nemokama enciklopedija. Vikipedija, nemokama enciklopedija, 2018 m. Vasario 8 d. Žiniatinklis. 2019 m. Sausio 5 d.
6. „Combol A“, „Fernández N“, „Figueredo E“, „Acuña A“, „Zanetta“ E. Dažymo metodo įgyvendinimas tuo pačiu metu diagnozuojant kokcidijas ir mikrosporidijas. Respublikos universiteto Higienos institutas. Montevideo. Urugvajus. Galima rasti adresu hygien.edu.uy