GALI „GRÜNWALD-GIEMSA“ DĖMĖ: PAGRINDIMAS, TECHNIKA IR PANAUDOJIMAS - BIOLOGIJA - 2025

Gegužės Griunvaldo-Giemsa arba Pappenheim dėmių yra skirtumas dažymo techniką, mišiniai Giemsa gegužės Žalgirio reagentai. Jis naudojamas normalių ir nenormalių kraujo ląstelių diferenciacijai periferiniame kraujyje ir kaulų čiulpų tepinėliuose, taip pat histologinių pjūvių ir citologinių mėginių dažymui.

Abu reagentai - „Giemsa“ ir „May Grünwald“ - yra gaunami iš Romanowsky tipo dažymo, metodo, pagrįsto rūgščių ir bazinių dažų deriniu.

Lėtinės mieloleukemijos atveju tepinėlis, rodantis suskaidytą neutrofilą ir milleocitą, nudažytas gegužės mėn. Grünwald Giemsa dėme. Dr Ramonas Simonas-Lopezas (https://es.m.wikipedia.org/wiki/Archivo:LMC-1.JPG) per „Wikipedia.org“.

„Giemsa“ patobulino techniką stabilizuodama eozino, metileno mėlynojo ir jų darinių mišinį gliceroliu. Vietoj to, gegužė Grünvaldas naudoja eoziną ir metileno mėlynąją, tirpikliu naudodamas metanolį. Šis strateginis derinys davė puikių rezultatų.

Nors stebint ląstelių morfologiją, ji veikia panašiai kaip „Giemsa“ ir „Wright“ dėmės, ši technika pagerina ankstesnes, patikslindama parazitų, sukeliančių maliariją, Chagos ligą, leišmaniozę ir trichomonozę, dažymą.

Be to, ji pasirodė esanti labai naudinga citologiniam spermatinio skysčio tyrimui. Jis išsiskyrė ne tik demonstruodamas spermos morfologines savybes, bet ir leisdamas labai efektyviai diferencijuoti leukocitus, epitelio ląsteles ir spermatogenezės ląsteles.

Pagrindas

Metodas grindžiamas „Romanowsky“ dėmių pagrindu, kai rūgštiniai dažikliai turi selektyvų afinitetą pagrindiniams ląstelių komponentams, o rūgštiniai komponentai pritraukia pagrindines dėmes.

Paaiškintas kitu būdu, tiek ląstelių struktūros, tiek dažai turi teigiamus arba neigiamus elektros krūvius; kaip mokesčiai atstumia, o skirtingi mokesčiai traukia.

Pvz., Pagrindiniai dažai, tokie kaip metileno mėlynas, yra teigiamai įkrauti ir traukia neigiamai įkrautas struktūras. Štai kodėl šis dažymas nudažo branduolius, kuriuose gausu DNR ir RNR, turinčių neigiamai įkrautas fosfato grupes.

Taip pat dažomos segmentinių bazofilų granulės ir RNR turinčių mononuklearinių baltųjų kraujo ląstelių citoplazmos.

Taip pat rūgštiniai dažai turi neigiamą krūvį, todėl jungiasi prie teigiamai įkrautų struktūrų, tokių kaip eritrocitai ir segmentinių eozinofilų granulės. Kalbant apie suskaidytų neutrofilų granules, jie fiksuoja abu dažus.

Dažiklių įvairovė

Taikant šį metodą, egzistuoja ortchromatinių ir metachromatinių dažų reakcijų derinys. Ortochromatiniai vaistai (eozinas ir metileno mėlynasis) jungiasi su ląstelių struktūra, su kuria jie yra susiję, ir suteikia stabilią spalvą, kuri nesiskiria.

Kita vertus, metachromatai (metileno mėlynojo azure A ir azure B dariniai) skiriasi savo pradine spalva, kai jie pritvirtinami prie konkrečios struktūros, ir gali būti net įvairių atspalvių.

Galiausiai gegužės mėn. Grünwald sprendimo žingsnis reikalauja vandens, nes be jo dažai prasiskverbs pro konstrukcijas, bet nesitvirtins. Tam, kad tai įvyktų, dažai turi tapti poliariniai arba jonizuoti, todėl turi galimybę nusodėti ir jungtis prie susijusių struktūrų.

Technika

medžiagos

- Skaidrės skaidres.

- Dažymo tiltai.

- gegužės – Grünwald sprendimas.

- Giemsa dėmė.

- Distiliuotas vanduo.

Gali Grünwald dažyti koncentruotą tirpalą

Reikia pasverti 0,25 g eozino-metileno mėlynojo (dėmė pagal May Grünwald) ir ištirpinti 100 ml metanolio. Tada preparatas maišomas 1 valandą ir paliekamas pailsėti 24 valandas. Laiko pabaigoje jis filtruojamas.

Norėdami pritaikyti metodą, gegužės mėn. Grünwald dažai turi būti praskiedžiami taip: 200 ml praskiestų dažų išmatuokite 30 ml koncentruoto tirpalo, įpilkite 20 ml buferinio tirpalo ir 150 ml distiliuoto vandens, sureguliuoto iki pH 7,2–7,3. . Vėliau jis sumaišomas ir filtruojamas.

„Giemsa“ dėmių koncentratas

Reikia pasverti 0,5 g azureoleozino-metileno mėlynojo (dėmė pagal „Giemsa“), ištirpinti 50 ml metanolio ir 50 ml glicerino įpilti į mišinį.

Norėdami atlikti techniką, praskieskite santykiu 1:10 buferiniu tirpalu ir leiskite pailsėti 10 minučių. Prireikus jis gali būti filtruojamas.

Buferinio tirpalo paruošimas, kai pH 7,2

Jie turėtų būti pasverti:

- 40 mg kalio di-vandenilio fosfato (KH2PO4).

- 151 mg dinatrio vandenilio fosfato 12-hidrato (Na2HPO4).

Abu junginiai ištirpinami 100 ml vandens.

Kraujo ar kaulų čiulpų tepinėlio dažymo procedūra

Yra du režimai: klasikinis ir greitasis.

Klasikinis režimas

1. Tepinėlius 2-3 minutes uždenkite praskiestu May-Grünwald tirpalu.
2. Nuplaukite buferiniu distiliuotu vandeniu, kad pašalintumėte ankstesnį tirpalą.
3. Uždenkite tuo pačiu buferiniu plovimo tirpalu ir palikite 1 minutę. Idėja yra ta, kad ankstesnis dažiklis yra pritvirtintas prie konstrukcijų ir tuo pačiu metu ląstelės hidratuojamos.
4. Įlašinkite 12 lašų praskiestos Giemsa tinktūros į buferinį vandenį ir nukoškite, kad sumaišytumėte ir homogenizuotumėte. Leiskite pailsėti 15 - 20 minučių.
5. Tepinėlius nuplaukite buferiniu distiliuotu vandeniu ir padėkite į orą.
6. Sufokusuokite ir apžiūrėkite nudažytas kraujo ląsteles šviesos mikroskopu naudodami objektyvą 40X. Jei reikia, 100X gali būti naudojamas.

Greitasis režimas

1. Uždenkite tepinėlį praskiesta gegužės mėnesio Grünwald dėmele 1 minutę.
2. Nuplaukite distiliuotu vandeniu su buferiniu tirpalu.
3. Uždenkite buferiniu vandeniu ir leiskite pailsėti 1 minutę.
4. Įpilkite praskiestos „Giemsa“ dėmės ir palikite 5 minutes.
5. Nuplaukite distiliuotu vandeniu su buferiniu tirpalu ir leiskite išdžiūti.

Čia aprašyti būdai yra rekomendaciniai, tačiau reikia atsižvelgti į tai, kad procedūros ir dažymo laikas skiriasi priklausomai nuo komercinės įmonės, kuri platina reagentus. Patartina atlikti veiksmus, kuriuos griežtai nurodo kiekvienas komercinis namas.

Spermatinio skysčio tepinėlių dažymo technika

1- 4 minutes užtepkite tešlą plonu May Grünwald tirpalo sluoksniu.

2- Nuimkite dažiklį ir nuplaukite distiliuotu vandeniu.

3 - Į distiliuotą vandenį 15 minučių padėkite praskiesto Giemsa (1:10) sluoksnį.

4- Nuimkite dažus ir nuplaukite distiliuotu vandeniu.

5- Leiskite išdžiūti ir stebėkite po mikroskopu.

Laukiamos spalvos su gegužės mėnesio Grünwald Giemsa dėme

Svarbios specifikacijos

Taikant šį metodą, reagentų ir skalbimo tirpalų pH turi būti 7,2–7,3, kad dažų afinitetai ląstelių struktūroms nebūtų iškraipomi ir laukiama galutinė spalva nesiskirtų.

Programos

Ši technika naudojama klinikinėse laboratorijose dažant periferinio kraujo ir kaulų čiulpų tepinėlius, audinių skyrius ir citologijas.

Hematologiniame lauke ši metodika yra gyvybiškai svarbi tiriant ląstelių anomalijas formos, dydžio ir skaičiaus atžvilgiu. Tai labai vertinga priemonė diagnozuoti tam tikras ligas, tokias kaip leukemijos ir anemijos.

Be to, jis ypač naudingas ieškant parazitų hematologinėse (Plasmodium sp ir Trypanosoma cruzi) arba histologinėse (Leishmanias sp) vietose.

Makšties citologija

Makšties citologijoje šis metodas yra ypač naudingas stebint Trichomonas vaginalis. Tai yra svarbus atradimas, nes jo buvimas imituoja karcinomos nuotraukas in situ, kurios vėliau išnyksta pašalinus parazitą.

Spermos mėginys

Tai buvo ideali priemonė spermos mėginių tyrimui, nes ji suteikia vertingos informacijos apie spermos kokybę.

Jos siūlomi duomenys daugiausia susiję su skaičiumi ir morfologija, taip pat su gretutinėmis ląstelėmis, kurios gali būti ir kurios yra gyvybiškai svarbios, pavyzdžiui, lytinėmis ląstelėmis, leukocitais ir epitelio ląstelėmis.

Atlikus šią analizę galima aprašyti anomalijas, pastebėtas spermoje galvoje, kakle, viduryje ir pagrindiniame gabale.

Be to, jie taip pat gali padėti parodyti hemospermijos (eritrocitų buvimo spermoje) ir leukozpermijos ar piospermijos (padidėjusio leukocitų skaičiaus spermoje) atvejus.

Nuorodos

1. Costamagna S, Prado M. Šviežio tyrimo, gegužės Grünwald-Giemsa ir Gram, dėmių ir auginimo terpės patvirtinimas Trichomonas vaginalis diagnozei nustatyti. Parazitolis. 2001; 25 (1–2): 60–64. Galima rasti: „scielo“.
2. „Merck KGaA“ laboratorija. Gegužė Grünwald eozino metileno mėlyna mikroskopijai.
3. "Gegužė-Grünwald-Giemsa dėmė". Vikipedija, nemokama enciklopedija. 2018 m. Lapkričio 15 d., 14:37 UTC. 2019 m. Sausio 8 d., 04:29: en.wikipedia.org
4. Stiklo chemikalų „Panreac“ laboratorija. Histologinių metodų, hematologijos ir mikrobiologijos reagentai. Galima rasti: glasschemicals.com
5. Retamales E, Manzo V. Rekomendacija dažyti kraujo tepinėlius hemogramai nuskaityti. Nacionalinė ir etaloninė biomedicinos laboratorija. Čilės visuomenės sveikatos institutas.
6. Sarabia L. Spermiograma pagal PSO kriterijus. Vystymosi anatomijos ir biologijos programa. Medicinos mokykla. Čilės universitetas. Galima rasti: pp.centramerica.com