WRIGHTO DĖMĖ: PAGRINDIMAS, MEDŽIAGOS, TECHNIKA IR NAUDOJIMO BŪDAI - BIOLOGIJA - 2025

Wright dėmių yra dažymo technika sukuria Amerikos patologas James Homer Wright 1902, remiantis Romanowsky dėmių. Kadangi Romanovskio dėmė buvo nestabili, Wright kaip tirpiklį ir fiksatorių įterpė metanolio.

Šis dažymas yra polichrominis, o tai reiškia, kad jis sukuria keletą spalvų, atsižvelgiant į struktūrą, kuri sugeria dažus. Šis dažymo būdas buvo plačiai naudojamas atliekant diferencinį leukocitų kiekį kraujyje ir tiriant raudonųjų kraujo kūnelių, trombocitų ir leukocitų morfologiją periferiniame kraujyje ir kaulų čiulpuose.

Įvairūs periferinio kraujo tepinėliai dažyti Wright dėme. A. Ūminė leukemija B. Plasmodium vivax eritrocituose. C. Plasmodium falciparum, makrogametocitai. D. limfocitai

Jo taikymas yra labai svarbus, nes anomalijos gali būti pastebimos skirtingose ​​kraujo ląstelėse, palengvinančios tokių ligų kaip leukemija ar bakterinės ar parazitinės infekcijos diagnozę.

Ko gero, tai yra labiausiai paplitusi technika, kurioje naudojama ši technika, tačiau jie nėra vieninteliai. Tai taip pat naudinga mėginių, išskyrus kraują ir kaulų čiulpus, pavyzdžiui, išskyrų iš nosies, išmatų gleivių, skreplių, odos mėginiuose.

Wrighto dėmės pagrindimas

Wright dėmė atsirado iš Romanowsky dėmės, kurią sudaro rūgščių dažiklio (eozino Y) metilo alkoholio tirpalas ir bazinis dažiklis (metileno mėlynasis) ir jų oksidacijos produktai.

Dažų mišinys, naudojamas Wright dažymui, sukelia efektą, žinomą kaip Romanowsky, tai yra, jis suteikia gražią purpurinę spalvą leukocitų ir neutrofilinių granulių branduoliams, o raudonieji kraujo kūneliai nusidažo rožine spalva.

Komponentai, atsakingi už tipiškos Wright dėmės spalvų gamą, yra mėlyna B ir eozinas Y. Pastebėtas poveikis priklausys nuo dažų prisijungimo prie cheminių struktūrų ir mėlynos B bei eozino Y sąveikos.

Rūgščiosios struktūros, tokios kaip nukleorūgštys, branduoliniai baltymai, ir kai kurių ląstelių tipų reaktyvus nesubrendęs citoplazma fiksuoja mėlyną B (pagrindinę dėmę).

Nors pagrindinės struktūros, tokios kaip hemoglobinas, segmentinių eozinofilų granulės, be kitų ląstelių struktūrų, jungiasi su eozinu Y (rūgščiaisiais dažais).

Dažymo rezultatui gali turėti įtakos skirtingi veiksniai, tokie kaip Wright dažų pH, buferis ir plovimo tirpalas; taip pat dažymo ir fiksavimo laikas.

Todėl kiekvienas reagentų paruošimo žingsnis yra nepaprastai svarbus ir turi būti atliekamas atkreipiant dėmesį į visas detales.

medžiagos

Wrighto dėmė. 100 ml reikia:

Pasverkite 0,3 g Wright dėmės, išmatuokite 97 ml metanolio ir 3 ml glicerolio.

Paruošimas

Didelį kiekį Wright dėmės įpilkite į skiedinį ir palaipsniui įpilkite glicerolio, kol milteliai visiškai ištirps.

Po to pridedamas metanolis, sumaišomas ir supilamas į gintaro buteliuką.

Prieš naudojimą tirpalą reikia švelniai suplakti ir nufiltruoti.

Buferinis buferinis tirpalas

Į vieną litrą distiliuoto vandens pridedama 3,76 g dinatrio hidrofosfato (Na ₂ HPO ₄ 2H ₂ 0) ir 2,1 g dihidrogeno kalio fosfato (KH ₂ PO ₄ ).

Labai gerai išmaišykite, kol visi panaudoti reagentai ištirps. Sureguliuokite pH iki 7,2. Supilkite į stiklinį indą ir laikykite kambario temperatūroje.

Papildomos medžiagos, reikalingos dažymui

Be to, norint atlikti dažymo techniką, reikalingos kitos medžiagos: objektiniai stikleliai ar dangteliai, dažymo tiltelis, marškinėliai su vandeniu ar buferiu skalbimui, chronometras, kad būtų išlaikytas dažymo laikas, ir tam tikra džiovinimo medžiaga. (absorbcinis popierius, marlė ar medvilnė).

Wrighto dėmės komponentai

Metanolis

Alkoholis (metanolis) naudojamas kaip kraujo tepinėlis prie stiklelio.

Iš esmės tai yra krešėjimą mažinantis, sausinantis ir tvirtinantis reagentas. Todėl jo funkcija yra koaguliuoti baltymus ir padaryti juos netirpius, tačiau faktiškai ne denatūruoti.

Metanolis yra plačiausiai naudojamas tepinėlių fiksavimo reagentas visose laboratorijose, nes jis teikia geresnių rezultatų nei etanolis. Ideali koncentracija yra 99%.

Sklendė

Buferis (buferinis tirpalas) atlieka dažų pH reguliavimo ar palaikymo funkciją, nes pH, pakoreguotas iki 7,2, yra būtinas, kad ląstelių struktūros galėtų tinkamai absorbuoti dažus.

Kita vertus, metanolio fiksavimo etapas dehidratuoja ląsteles, o buferis padeda jas rehidratuoti.

Eozinas (Y)

Eozinas turi afinitetą blokams, nes tai yra rūgštinis dažiklis. Yra žinomi du eozino tipai, labai panašūs vienas į kitą, tiek, kad galima naudoti bet kurį iš dviejų, gaunant tą patį rezultatą.

Vienas jų vadinamas eozinu Y, geltonu eozinu arba tetrabromofluoresceinu, o kitas vadinamas eozinu B, melsvu eritrosinu B arba dibromodinitrofluoresceinu. Tačiau dažniausiai naudojamas eozinas Y.

Svarbiausia šio dažiklio savybė yra jo neigiamas poliškumas, todėl jį patraukia teigiamai įkrautos ląstelių struktūros.

Metileno mėlyna

Tai yra pagrindinis dažymas. Pagrindinė jo savybė yra metachromazija, tai yra, ne visos struktūros bus nudažytos vienoda spalva, tai priklauso nuo dažomų struktūrų cheminės sudėties.

Kai kurie pasidarys šviesiai arba tamsiai mėlyni, o kai kurie - tamsiai violetinės arba šviesiai alyvinės.

Technika

1 - Atlikite mėginio paskleidimą taip, kad ant stiklelio ar dangtelio liktų plona plėvelė.

2 - Leiskite džiūti ore maždaug 2 valandas.

3-Padėkite sausą tepinėlį ant dažymo tiltelio arba dažymo padėklo, mėginio paskleidimas nukreiptas į viršų.

4-Lašas po lašo uždenkite Wright dėmę, kol visas paviršius bus padengtas. Palikite veikti 5 - 8 minutes.

5 -Dėmutė turėtų visiškai uždengti stiklelį, neištekant per kraštus. Jei dažymo metu jis pradeda išgaruoti, įlašinkite kelis papildomus lašus.

6 Vėliau pridėkite tokį patį kiekį amortizatoriaus, truputį pučiant, kol pasirodys būdingas metalinis blizgesys. Laikas nuo 10 iki 15 minučių.

7-Nuplaukite vandeniu iš čiaupo, švelniai tekėdami, kol lapas atrodo rausvas.

8 -Apie alkoholiu mirkytą marlę nuimkite dažus, priklijuotus prie stiklelio galo.

9 - Tepkite tepinėlį labai gerai išdžiūvusį prieš įdėdami panardinamąjį aliejų, kad jį pamatytumėte po mikroskopu.

Naudingumas

Hematologija

Jis idealiai tinka dažyti periferinio kraujo tepinėlius, tirštų kraujo tepinėlių ir ląstelių tyrimus iš kaulų čiulpų mėginių.

Dėl šio dažų derinio cheminių savybių galima lengvai atpažinti ląstelių struktūrą ir atskirti skirtingus esančių ląstelių tipus.

Bėganti nosis

Ši technika yra labai naudinga nosies išskyrų ląstelėms (epitelio ląstelėms, segmentinėms eozinofilams, polimorfonuklearinėms ląstelėms) nustatyti diagnozuojant alerginį rinitą.

parazitologija

Šia prasme ji buvo naudinga tiriant Leishmania sp poodinio ląstelinio audinio histiocituose, esant odos opoms. Taip pat jis naudojamas leukocitų identifikavimui išmatų mėginiuose (išmatų leukograma).

Tokiu atveju gydytojui įdomu sužinoti, ar išmatose esanti leukocitozė yra polimorfonuklearinė ar mononuklearinė. Šie išmatų leukogramos duomenys padės nustatyti, ar tai atitinkamai bakterinė, ar virusinė infekcija.

Kita vertus, kraujyje cirkuliuojančius parazitus galima rasti eritrocituose arba laisvuose plazmoje. Ieškomi parazitai yra Plasmodium spp, Trypanosoma cruzii ir filarias, o veterinarinėje medicinoje jie naudingi ieškant Theileria equi ir Babesia caballi, bebesiozės sukėlėjų, ypač arklių.

„Wright“ ir „Giemsa“ dėka galima atskirti hemoparazitus nuo normalių ląstelių komponentų. Tam gali būti naudojami dviejų rūšių pasiskirstymai:

Skleisti plonai

Kraujas paskleidžiamas kaip plona plėvelė ant skaidrės. Jis dažomas Wrighto dėme, atskleidžiant branduolio ir citoplazmos ypatybes.

Storis lašas

Ši metodika naudojama norint ištirti parazitų kiekį didesniame kraujo kiekyje.

Norėdami tai padaryti, ant stiklelio užpilamas didelis kraujo lašas. Kai jis yra, jis turi būti defibriliuotas, naudojant didesnį ir didesnį apskritimą nuo centro į išorę, naudojant kitos skaidrės kraštą.

Galiausiai, kad būtų galima stebėti parazitus tirštame tepinėlyje, eritrocitai turi būti lizuojami vandeniu.

Kvėpavimo takų infekcijos

Kvėpavimo takuose ši technika taip pat naudinga, nes norint nustatyti diagnozę svarbu skreplių, bronchų plovimo ar bronchoalveolinių mėginių ląstelės.

Panašiai čia galima atskirti polimorfonuklearines ir mononuklearines ląsteles.

Bakteriologija

Šios technologijos naudojimas bakteriologijoje yra ribotas, nes ji nėra tinkama dažyti bakterijas, todėl jų dažymui naudojami kiti specializuoti dažymo būdai.

Tačiau jis buvo naudojamas epitelio ląstelių su Chlamydia trachomatis intarpų kūneliais paieškai šlaplės ar endocervikalinės gleivinės tepinėlių srityje, nors reikia pripažinti, kad tai nėra geriausias metodas.

Tarp užkrėstų pacientų raudonųjų kraujo kūnelių taip pat galima stebėti spiralines bakterijas, tokias kaip Borrelia burgdorferi, taip pat Ehrlichia sp morulus ar inkliuzinius kūnus limfocitų, monocitų ar neutrofilų citoplazmoje kraujo tepinėlyje.

Mikologija

Histoplasma capsulatum yra patogeninis grybelis, dažnai diagnozuojamas mikroskopu stebint įvairius audinių pavyzdžius, dažytus Wright dėme.

Kaip stebimos Wright dėmės kraujo mėginio struktūros?

Šaltinis: „Retamales E“, Mazo V. Visuomenės sveikatos institutas, Čilės vyriausybė. Kraujo tepinėlių dažymo rekomendacijos hemogramai skaityti.

Gero dažymo rekomendacijos

Kraujo mėginių plokštelės turėtų savaime išdžiūti. Tepiniai turi būti kuo plonesni, kad dažai geriau įsitvirtintų ir būtų išvengta per dažymo.

Norint kokybiškai dažyti, patartina nusidažyti per dvi valandas nuo tepinėlio paruošimo. Kita vertus, idealiausias pavyzdys yra kapiliarinis kraujas, be antikoaguliantų.

Tačiau jei naudojamas veninis kraujas, jis turėtų būti naudojamas kaip antikoaguliantas EDTA, o ne heparinas, nes pastarasis gali deformuoti ląstelių struktūras.

Norėdami išvengti paruošto dažiklio nusidėvėjimo, jį reikia laikyti sausose vietose.

Skalbimo metu rekomenduojama naudoti vandenį, kurio pH būtų neutralus.

Galiausiai patartina retkarčiais išbandyti dažymo metodus, naudojamus laboratorijoje.

Tai atliekama dažant pavyzdžius ar išplėstinius raštus kaip kokybės kontrolę. Šis žingsnis yra svarbus, nes jis užtikrina, kad dažymas yra tinkamai paruoštas ir dažymo laikas yra gerai standartizuotas.

Jei rašto lapas yra prastai spalvotas, tada yra problemų, kurias reikia išspręsti.

Dažnos Wright dažymo klaidos

Labai blyškus dažymas

Labai blyški tepinėlis dažniausiai atsiranda dėl labai trumpo dažymo laiko arba per didelio skalbimo. Tai ištaisoma prailginant sąlyčio su dažais laiką arba sutrumpinant skalbimo laiką.

Dažiklis nusėda

Dažų nuosėdas tepinėlyje gali sukelti kelios priežastys, tačiau dažniausios priežastys yra šios: nefiltruotų dažų naudojimas, dažymas ant nelygių dažymo tiltelių, dulkių ar riebalų nešvarumų lakštų naudojimas, netinkamas plovimas visiškas dažymas.

Ypač raudonas arba mėlynas tepinėlis

Buferis yra atsakingas už dažų pH. Dažikliai, kurių pH yra žemesnis už nurodytą (rūgštus), suteiks labai rausvus tepinėlius.

Jei dažų pH yra didesnis (šarminis), gaunamas ypač melsvas tepinėlis.

Saugojimo režimas

Reagentą reikia laikyti kambario temperatūroje.

Nuorodos

1. Gutiérrez V. Lyginamasis Wright dažymo metodo ir Elisa testas siekiant diagnozuoti šunų Ehrlichiozę San Pedro Sula mieste, Hondūre. 2008 m. Diplominis darbas, norint gauti veterinarijos medicinos laipsnį. Gvatemalos San Karloso universitetas.
2. López-Jácome L, Hernández-Durán M, Colín-Castro C, Ortega-Peña S, Cerón-González G, Franco-Cendejas F. Pagrindinės dėmės mikrobiologijos laboratorijoje. Neįgalumo tyrimai. 2014; 3 (1): 10-18.
3. "Wrighto dėmė". Vikipedija, nemokama enciklopedija. 2018 m. Gegužės 18 d., 12:05 UTC. 2018 m. Gruodžio 8 d., 20:37
4. Calderón A, Cardona J, Vergara Ó. Babesia spp. Dažnis medžiojant arklius, Córdoba (Kolumbija). Udcaactual atskleisti žinomumą. 2013; 16 (2): 451–458.
5. „Forbes B“, „Sahm D“, „Weissfeld A“ (2009). Bailey ir Scotto mikrobiologinė diagnozė. 12 red. Argentina. „Panamericana SA“ redakcija
6. „Retamales E“, Mazo V. Čilės visuomenės sveikatos institutas. Kraujo tepinėlių dažymo rekomendacijos hemogramai skaityti.