NEIGIAMAS DAŽYMAS: PAGRINDIMAS, TECHNIKA, PRANAŠUMAI IR TRŪKUMAI - BIOLOGIJA - 2025

Neigiamas dažymo yra specialios spalvos metodas pabrėžti kapsulės buvimą kai kuriuos mikroorganizmus , daugiausia Streptococcus pneumoniae Cryptococcus neoformans-, Klebsiella pneumoniae ir, iš klinikinių mėginių ar grynų kultūrų.

Tiesioginis mėginys, paprastai naudojamas neigiamam dažymui, yra smegenų skystis. Šis metodas yra greita alternatyva numanomai meningito, ypač Cryptococcus neoformans, diagnozei.

A. Dantų rauginys, dažytas Indijos rašalu, B. Cryptococcus neoformans var gatti yra silpnai kapsuliuotas, nes pasitaiko gamtoje, naudojant nigrosiną. C. Cryptococcus neoformans var gatti naudojant nigrosiną su stora kapsule, kaip jos parazitinė forma. D. Cryptococcus neoformans su šiek tiek praskiestu Indijos rašalu. Gisell Quinde, iš Wikimedia Commons / CDC, per Wikimedia Commons / Photo Credit: Turinio teikėjai: CDC / Dr. Leanor Haley, per „Wikimedia Commons“

Taip pat šią dėmę galima tepti ant skreplių ir sterilių skysčių, taip pat ant padermių, gautų iš jaunų grynų kultūrų. Ši technika naudojama nigrosino ar Indijos rašalui; todėl tai yra labai paprasta ir nebrangi metodika, teikianti didelę diagnostinę reikšmę turinčią informaciją per trumpą laiką.

Šia prasme bet kurią laboratoriją sugeba atlikti šis dažymas. Žinoma, laboratorijoje turi būti kompetentingų darbuotojų, gebančių atpažinti pavienes arba pumpuruotas Cryptococcus neoformans mieles ir atskirti jas nuo leukocitų ir artefaktų, kurių gali būti mėginyje.

Pagrindas

Nigrosino ir Indijos rašalas veikia panašiai; todėl bet kurią iš šių medžiagų galima naudoti pakaitomis.

Ši technika vadinama neigiamu dažymu, nes ji veikia priešingai nei visos kitos dažymo būdai. Tai, kas liko nepatenkinta, yra ta struktūra, kurios siekiama ar kurią norima pamatyti; tai yra, mikroorganizmai.

Todėl dažymas grindžiamas tepinėlio dugno dažymu tamsia spalva. Tokiu atveju kapsuliuotos struktūros išsiskirs šviesios arba bespalvės spalvos.

Paprastai mielės yra rafinuotos, apsuptos skaidriu halo, kuris atitinka kapsulę. Taip nutinka todėl, kad Indijos rašalas ir nigrosinas yra medžiagos, nesugebančios įsiskverbti į polisacharidą, kuris sudaro gyvųjų mikroorganizmų kapsulę.

Verta paminėti, kad kitos struktūros, kurios gali būti tiesioginiame mėginyje, tokios kaip leukocitai ar raudonieji kraujo kūneliai, taip pat neprasiskverbia.

Tačiau jei mikroorganizmai negyvi, dažai gali prasiskverbti į jų vidų, todėl šis dažymas taip pat yra naudingas norint įvertinti mikroorganizmų gyvybingumą.

Technika

medžiagos

Nigrosine

„Nigrosine“ savo vardą skolinga dėl turimos juodos spalvos. Tai sintetinė medžiaga, gaunama kaitinant organinių junginių mišinius, pavyzdžiui, kaip nitrobenziną, aniliną ir anilino hidrochloritą, naudojant minėtoje reakcijoje katalizatorių (geležį arba varį).

Kinų rašalas

Kininis rašalas yra medžiaga, kurią azijiečiai daugiausia naudoja rašydami, darydami meno kūrinius ir vienspalvius dažus. Tai labai populiaru kinų kultūroje.

Jis gaunamas iš kalmarų rašalo, sumaišyto su susmulkinta medžio anglimi - medžiu, kuriame deginami mažai dervingi medžiai.

Jį taip pat galima paruošti sudeginus angliavandenilius (augalinius aliejus) kartu su baltymine želatina, kuri suteikia reikiamą konsistenciją, kad būtų išvengta anglies dalelių kritimo.

Mėginių ėmimo specifikacijos

- Tam nereikia pasninko.

- CSF, skreplių ar sterilių skysčių mėginiuose turi būti ne mažiau kaip 1 ml tūrio ir jie turi būti nedelsiant perkelti į laboratoriją kambario temperatūroje.

- CSF ir sterilių skysčių mėginius turi paimti specializuotas gydytojas.

- Tai taip pat gali būti gryna įtartino padermės, susijusios su minėtais patogenais, kultūra.

Technikos atlikimas naudojant tiesioginius pavyzdžius

- Mėginiai turi būti centrifuguojami, tada supernatantas išmetamas ir paimamos nuosėdos.

- Ant švarios plokštelės uždedamas lašelis centrifuguotos medžiagos (nuosėdų) ir lašas indiško rašalo ar nigrosino.

- Jis turėtų būti gerai sumaišytas ir uždengtas dangteliu, kad lašas pasklistų kaip plona plėvelė, neperžengiant kraštų.

- Vėliau preparatas montuojamas ant mikroskopo.

- Jei preparatas yra per tamsus, jį galima praskiesti vandeniu.

Technikos atlikimas su kultūros padermėmis

- Labai nedidelė jaunos kultūros dalis paimama su sėjimo adata ir ištirpinama Indijos rašalo lašelyje, anksčiau uždėtame ant švarios plokštelės.

- Ant viršaus uždedamas dangtelis.

- Jis stebimas mikroskopu 10X ir 40X.

Taip pat dalį kolonijos galite ištirpinti distiliuotame vandenyje, o iš ten paimkite lašą ir sumaišykite jį su Indijos rašalu. Tokiu būdu preparatas nebus toks storas, kad bus galima stebėti struktūras atskirai; jei bus minios, tai nebus gerai stebima.

Kita metodika yra ši:

- Ant vieno stiklelio galo užlašinkite suspensijos kultūros lašą.

- Į tą patį galą įlašinkite lašą nigrosino ir išmaišykite.

- Pasinaudodami kitu stikliuku, paskleiskite mėginį taip, lyg padarytumėte hematologinį tepinėlį.

- Leiskite išdžiūti ir stebėkite po mikroskopu.

Mikroskopo stebėjimas

Pirmiausia turite sutelkti dėmesį į 10X tikslą, kad galėtumėte pamatyti platų lauko vaizdą. Vėliau reikėtų ieškoti, ar nėra tarpų; jei yra, sufokusuokite 40X, kad pamatytumėte detales.

Privalumas

- Tai lengva vykdyti.

- Tai nebrangi technika.

- Šis metodas nereikalauja, kad tepinėlis būtų pritvirtintas prie karščio ar cheminių medžiagų; todėl mikroorganizmai stebimi be iškraipymų.

- Šviežio preparato nereikia džiovinti, todėl jį galima pastebėti iškart, greitai gaunant rezultatus.

Trūkumas

Surinktus šviežius preparatus reikia nedelsiant pastebėti; jei jiems leidžiama išdžiūti, jų stebėti nebeįmanoma, o reikia įrengti naują.

Audinių dažymas Indijos rašalu

Kita funkcija, kurią gali atlikti Indijos rašalas, yra patologijos laboratorijose. Tai taikoma chirurginiu būdu išgautiems audinių mėginiams, siekiant pažymėti naviko rezekcijos ribas.

Pažymėtas audinys purškiamas acto rūgštimi. Tai veikia kaip šarmas ir neleidžia rašalui nutekėti, kai audinys yra reguliariai apdorojamas biopsijai ruošti.

Procedūrą sudaro audinio maudymas alkoholyje ir ksilene, po to mirkymas parafino vašku. Šis žymėjimas nukreipia patologą stebint audinį, nurodant, kur yra chirurginės rezekcijos kraštas ar kitas lankytinas objektas.

Nuorodos

1. „Nigrosina“. Vikipedija, nemokama enciklopedija. 2017 m. Liepos 11 d., 22:46 UTC. 2019 m. Sausio 6 d., 16:56: en.wikipedia.org
2. „Kiniškas rašalas“. Vikipedija, nemokama enciklopedija. 2018 spalio 1 d., 03:08 UTC. 2019 m. Sausio 6 d., 18:20: es.wikipedia.org/
3. Silva L, Silva C, Fernández N, Bueno C, Torres J, Rico M, Macías J ir bendradarbiai. (2006). Estremadūros autonominės bendruomenės darbo personalas. Konkrečios darbotvarkės IV tomas. Redakcija MAD. Sevilija – Ispanija, p. 211–212.
4. Silva M, García M, Corrales J, Ponce E. (2006), laboratorijos specialistas, Galisijos sveikatos tarnyba (SERGAS). Konkretaus dalyko darbotvarkės apimtis 2. Redakcinis MAD. Sevilija – Ispanija, p. 79–80.
5. „Forbes B“, Sahm D, Weissfeld A. 2009. „Bailey & Scott“ mikrobiologinė diagnozė. 12 red. Argentina. „Panamericana SA“ redakcija