SIMMONSO CITRATO AGARAS: LOGINIS PAGRINDAS, PARUOŠIMAS IR NAUDOJIMAS - BIOLOGIJA - 2025

Agaro Simmons citrato ji yra kieta terpė naudojamas kaip biocheminių identifikavimo bandymų mikroorganizmų, ypač gram - neigiamas bakterijas. Originalią terpę sukūrė Koseris 1923 m.

Koserio citrato terpę sudarė sultinys, kuriame yra natrio fosfato, amonio fosfato, monokalio fosfato, magnio sulfato ir natrio citrato.

A. Dehidratuota Simmono citrato agaro komercinė terpė B. Paruoštas Simmons citrato agaras. Šaltinis: A. Nuotrauka padaryta magistrantūros. Marielsa Gil B. Roto2esdios, iš „Wikimedia Commons“

Kaip matyti, vienintelis terpėje esantis anglies šaltinis yra citratas, o azotas yra amonio fosfatas, nes baltymai ir angliavandeniai nėra šių elementų šaltinis. Jie dažniausiai būna kitose terpėse.

Todėl į šią terpę pasėtos bakterijos gali daugintis tik tada, kai sugeba pasiimti anglį iš citrato. Testas buvo teigiamas, jei terpėje buvo drumstumas, tačiau jo trūkumas buvo tas, kad gali atsirasti nespecifinis drumstumas.

Šią problemą išsprendė Simmonsas į pradinę Koserio formulę pridėjęs bromtimolio mėlyną ir agarą. Nors principas yra tas pats, jis aiškinamas skirtingai.

Pagrindas

Kai kurios bakterijos gali išgyventi, kai nesusidaro fermentacija ar pieno rūgštis, todėl jos turi gauti energijos naudodamos kitus substratus. Šiame bandyme vienintelis siūlomas anglies šaltinis yra citratas.

Bakterijos, kurios tokiomis sąlygomis gali išgyventi, greitai metabolizuoja citratą, pasirinkdamos tradicinį būdą, naudodamos trikarboksirūgšties ciklą arba citrato fermentacijos ciklą.

Citratas, kurį bakterijos katabolizuoja, apima fermentinį mechanizmą be koenzimo A įsikišimo. Šis fermentas žinomas citrinazės (citrato oksaloacetato lizazės) arba citrato desmolazės pavadinimu. Reakcijai reikia dvivalenčio katijono, kurį tokiu atveju teikia magnis.

Reakcijos metu susidaro oksaloacetatas ir piruvatai, kurie paskui sukuria organines rūgštis, esant šarminiam pH, susidarančiam naudojant azoto šaltinį. Šios organinės rūgštys yra naudojamos kaip anglies šaltinis, kuriantis karbonatus ir bikarbonatus, dar labiau šarmindamas aplinką.

Sėjos režimas

Simmonso citrato terpę reikia lengvai pasėti į žuvų uodegą, naudojant tiesią kilpą ar adatą, ir inkubuoti 24 valandas 35–37 ° C temperatūroje. Praėjus laikui, rezultatai stebimi.

Sėjama tik agaro paviršiuje. Negalima pradurti.

Interpretacija

Jei terpė išlieka originalios spalvos (žalia) ir nėra matomo augimo, bandymas neigiamas, tačiau jei terpė pasidaro mėlyna, tai rodo, kad yra šarminių produktų, kuriuos nustato pH rodiklis. Tokiu atveju testas yra teigiamas.

Citratas (+) ir (-). Šaltinis: magistrantūra. Marielsa gil

Taip atsitinka todėl, kad jei bakterija naudoja citrato anglį, ji taip pat gali paimti amonio fosfato azotą, su kuriuo ji išskiria amoniaką, šarmindama terpę.

Kita vertus, jei terpėje pastebimas bakterijų augimas, tačiau spalva nepasikeičia, testas taip pat turi būti laikomas teigiamu, nes jei augimas vyksta, tai reiškia, kad bakterijos galėjo panaudoti citratą kaip anglies šaltinį, nors pH šiuo metu nekinta (kartais tai gali užtrukti).

Jei kyla abejonių dėl galutinės spalvos aiškinimo, ją galima palyginti su citrinos mėgintuvėliu, kuriame nėra inokuliacijos.

Paruošimas

Vienam litrui vandens pasveriama 24,2 g dehidratuotos terpės. Sumaišykite ir leiskite pailsėti maždaug 5 minutes. Baikite tirpinti terpę kaitindami 1 ar dvi minutes, dažnai purtydami.

Supilkite 4 ml į mėgintuvėlius ir 15 minučių autoklavuokite 121 ° C temperatūroje. Išeinant iš autoklavo, atramos pagalba palenkite taip, kad agaras sukietėtų fleitos snapo forma, turėdamas mažai bloko ar dugno ir labiau nuožulnus.

Galutinis citrato terpės pH yra 6,9 (žalia spalva). Ši terpė yra labai jautri pH pokyčiams.

Kai pH yra 6 ar žemesnis, terpė geltonuoja. Ši spalva bakterijų tyrime nepastebėta.

O esant pH 7,6 ar aukščiau, terpė pasidaro giliai prūsų mėlyna.

Naudokite

„Simmons Citrate Agar“ yra naudojamas tam tikriems mikroorganizmams, ypač bakterijoms, priklausančioms Enterobacteriaceae šeimai, identifikuoti ir kitoms ne gliukozę fermentuojančioms bakterijoms.

Šaltinis: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinė diagnostika. 5-asis leidimas Redakcija Panamericana SA Argentina.

Galutinės mintys

Simmonso citrato terpė yra labai subtilus testas, nes, padarius tam tikrų klaidų, galima gauti klaidingų teigiamų rezultatų.

Privaloma imtis šių atsargumo priemonių:

Inokulum

Neturėtų būti atliekamas labai storas arba pakrautas bakterijų užpilas, nes jis gali sukelti geltonos spalvos vario spalvą sėjos vietoje, nepažeisdamas likusios terpės, tačiau gali sukelti įsitikinimą, kad augimas vyksta. Tai nereiškia testo pozityvumo.

Taip pat storas užpildas gali sukelti klaidingą teigiamą rezultatą, nes mirštančių bakterijų ląstelių sienelėse suformuoti organiniai junginiai gali išskirti pakankamai anglies ir azoto, kad pasuktų pH rodiklį.

Todėl idealiausia yra sėti naudojant adatą, o ne platinos rankeną, kad būtų išvengta medžiagų pertekliaus.

Sėjama

Kita vertus, kai sėjama biocheminių bandymų, skirtų nustatyti minėtą mikroorganizmą, baterija, svarbu, kad citrato testas būtų pirmasis pasėjamas, kad būtų išvengta baltymų ar angliavandenių perkėlimo iš kitos terpės.

Esant tokioms aplinkybėms, galima gauti klaidingai teigiamą rezultatą, nes bet kuri iš šių medžiagų, kurios įvedamos per klaidą, bus metabolizuotos ir pakeis pH.

Kitas būdas išvengti medžiagų pernešimo yra gerai sudegti kilpa ir tarp bandymų paimti naują užpilą.

Taip pat reikia būti atsargiems palietus koloniją, kad būtų atlikta sėjimo kultūra, nes dėl to, kas paaiškinta, reikėtų vengti dalį agaro traukti iš kultūros, iš kurios kilusios bakterijos.

Šia prasme Matsenas, Sherrisas ir Bransonas prieš sėjant citrato testą rekomenduoja praskiesti užpilą fiziologiniame tirpale, kad būtų išvengta kitų anglies šaltinių perkėlimo.

Spalvos intensyvumas

Reikėtų atsižvelgti į tai, kad, gavus teigiamą bandymą, spalvos stiprumas gali skirtis priklausomai nuo komercinio namo.

Be to, yra mikroorganizmų, kurių teigiamas testas pasireiškia per 24 valandas, tačiau yra ir kitų padermių, kurioms prireikia 48 ar daugiau valandų, kad pakistų pH.

Nuorodos

1. Macas Faddinas J. (2003). Biocheminiai tyrimai klinikinės svarbos bakterijoms nustatyti. 3-asis leidimas Redakcija Panamericana. Buenos Airės. Argentina.
2. „Forbes B“, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey ir Scotto mikrobiologinė diagnozė. 12 red. Redakcija Panamericana SA Argentina.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinė diagnostika. 5-asis leidimas Redakcija Panamericana SA Argentina.
4. BD laboratorijos. „BBL Simmons“ citrato agaro slandai. 2015.Atsiejama: bd.com
5. „Britannia“ laboratorijos. Simmonso citrato agaras. 2015.Atsiejama: britanialab.com
6. „Valtek“ diagnostikos laboratorijos. Simmonso citrato agaras. 2016.Atsiejama: andinamedica.com.