LAKTOZINIS SULTINYS: PAGRINDAS, PARUOŠIMAS IR PANAUDOJIMAS - BIOLOGIJA - 2025

Laktozės sultinys yra ne priemonė - selektyvaus skystis mitybinės terpės, pirmiausiai naudojami kaip tam išankstinio praturtinti Salmonella padermių atskirai nuo mikrobiologinės analizės perdirbtų maisto produktų, pieno produktų ar vandens. Tai rekomenduoja Tarptautinė maisto produktų mikrobiologinių specifikacijų komisija (ICMPF).

Terpėje yra fermentinis želatinos, mėsos ekstrakto ir laktozės skiedinys, medžiagos, būtinos bakterijoms augti. Be to, laktozė yra fermentuojamas angliavandenis, todėl kai kurios koliformos gali ją suskaidyti gamindamos dujas.

Laktuoti sultiniai su drumstumu. Šaltinis: autoriaus nuotr. Magistrantūra. Marielsa gil

Dėl šios priežasties laktozės sultinį rekomenduoja Amerikos visuomenės sveikatos asociacija (APHA) tariamai tirti bendras ir išmatų koliformines bakterijas, kvalifikuodamas ją kaip puikią alternatyvą, kaip pakeisti triptozės laurilsulfato sultinį standartine greičiausio skaičiaus (MPN) metodika. ), naudojamas mikrobiologinei maisto, pieno ir paviršinio vandens, požeminių, rekreacinių, buitinių ir pramoninių atliekų mėginių analizei.

Pagrindas

Atliekant mikrobiologinę kai kurių mėginių analizę, būtinas išankstinis sodrinimas, kad būtų galima atkurti specifinį mikroorganizmą, kurio gali būti labai mažai, arba nepalankiomis sąlygomis, pažeidžiančiais ar sumažinančiu jo gyvybingumą.

Taip yra džiovintų ir perdirbtų maisto produktų, kurie gali būti užkrėsti Salmonellas sp. Tokiais atvejais, jei yra bakterijų, gaminant produktą jos buvo fiziškai ir chemiškai pažeistos.

Tokiu būdu, kad mikroorganizmai veikiami nepalankių veiksnių, tokių kaip dehidratacija, slopinamųjų ar toksiškų produktų poveikis, ir dubliavimosi, kurį sukelia, be kita ko, kitos bakterijos.

Šia prasme laktozės sultinys turi taisomąjį poveikį pažeistoms mikroorganizmo struktūroms, todėl jis gali atsistatyti ir daugintis taip, kad jį būtų galima aptikti.

Laktozės sultinys taip pat turi savybę skiesti slopinančias medžiagas, kurios gali paveikti jo gyvybingumą, sudarydamas sąlygas jo vystymuisi. Be to, laktozės sultinio maistinė sudėtis yra strateginė, siekiant skatinti Salmonella sp augimą, palyginti su kitais mikroorganizmais.

Norint galutinai identifikuoti, jis turi būti subkultūruotas kitoms galutinėms kultūros terpėms.

Kita vertus, terpės sudėtis taip pat leidžia aptikti laktozę fermentuojančius mikroorganizmus, gaminančius dujas.

Paruošimas

Norint paruošti litrą laktozės sultinio, reikia pasverti 13 g dehidratuotos terpės ir ištirpinti 1000 ml distiliuoto vandens.

Norėdami padėti ištirpinti terpę vandenyje, tirpalą galima šiek tiek pašildyti, bet ne per daug.

Vienalytis tirpalas paruošiamas taip: jei sultinys turi būti naudojamas koliformoms ieškoti, paruošiamas mėgintuvėlių stovas, į kurį aukštyn kojomis įkišamas Durhamo fermentacijos vamzdelis.

Durhamo vamzdelis yra labai svarbi detalė, nes ji leis aptikti dujų susidarymą - tai duomenys, turintys didelę reikšmę ieškant koliformų.

Kai mėgintuvėliai yra paruošti, į juos išpilama 10 ml laktozės sultinio, kurio pakanka uždengti visą Durhamo mėgintuvėlį.

Jei laktozės sultinys turi būti naudojamas kaip išankstinis sodrinimo sultinys, nebūtina dėti Durhamo fermentacijos vamzdelio. Tokiu atveju reikalingas didesnis terpės kiekis (225 ml), kuris bus tiekiamas 500 ml buteliuose, plačia burna ir su termiškai atspariu užsukamu dangteliu.

Vėliau mėgintuvėliai arba kolbos autoklavuojami 15 minučių 121 ° C temperatūroje.

Terpės galutinis pH turi būti 6,9 ± 0,2, esant 25 ° C.

Sultiniai iki naudojimo laikomi šaldytuve.

Prieš naudojimą sultiniai turi būti atšildomi iki kambario temperatūros.

Kita vertus, laktozės sultinį taip pat galima paruošti dviguba koncentracija.

Kai kurios laboratorijos prideda bromkrezolio purpurinį į laktozės sultinį kaip pH indikatorių, kad parodytų mėgintuvėlius, kuriuose laktozė fermentuota dėl spalvos pasikeitimo. Tokiu atveju sultinys įgauna purpurinę spalvą, o jei vyksta fermentacija, jis pasidaro geltonas.

Programos

Mikrobiologijos laboratorijose laktozės sultinys yra plačiai naudojamas, nes tai yra palyginti nebrangi terpė, siūlanti patikimus ir greitus rezultatus (24–48 valandas).

Jis gali būti naudojamas bendrųjų ir išmatų koliforminių medžiagų maiste ir vandenyje analizei arba kaip išankstinis sodrinimo sultinys salmonelėms gydyti.

Išankstinis sodrinimas

Pirminis sodrinimas yra žingsnis prieš mėginio sodrinimą, kuris labai pagerina Salmonella genties bakterijų atsistatymą perdirbtuose maisto produktuose.

Tam kietas maisto mėginys (25 gramai) arba skystis (25 ml) įpilamas į 225 ml laktozės sultinio, inkubuojamas nuo 24 iki 48 valandų. Vėliau jis bus subkultūruojamas praturtintoje terpėje, tokioje kaip selenito cistino sultinys arba tetrationato sultinys. Tada pereikite prie selektyvios XLD ir SS laikmenos.

Bendrosios ir išmatų koliforminės analizės

Tai puiki terpė kaip išmatų užterštumo rodiklis.

Dėl šios priežasties laktozės sultinys yra idealus numatomam koliforminio tyrimo etapui, naudojant labiausiai tikėtiną skaičių.

Mėginiams, kuriuose įtariamas didelis koliforminių bakterijų kiekis, bus pasėjamas mažesnis jų kiekis (1 ml), tuo tarpu mėginiams, kuriuose įtariamas mažesnis koliforminių bakterijų kiekis, bus pasėjamas didesnis mėginių tūris (10 ml).

Analizei daromi ^10–1 , 10 ^–2 , 10 ^–3 praskiedimai , iš kiekvienos naudojamos koncentracijos susidarant 3–5 mėgintuvėlių baterijai.

Iš kiekvieno skiedimo į laktozės sultinius sėjamas tas pats tūris.

Mėgintuvėliai inkubuojami 24 valandas. Neigiami sultiniai inkubuojami dar 24 valandas.

Rezultatai aiškinami stebint dvi charakteristikas: pirmoji yra drumstumo buvimas ar nebuvimas, ir kadangi šioje terpėje nėra pH rodiklio, spalva nepasikeis.

Antrasis yra dujų gamyba ar ne gamyba. Dujos Durhamo vamzdyje lengvai pastebimos dėl to, kad jo viduje yra vienas ar keli oro burbuliukai.

Tai laikoma teigiama, jei stebimos abi savybės, ty drumstumas gaminant dujas. Teigiami mėgintuvėliai turėtų būti pakartotinai pasėjami į patvirtinamąją terpę (2% sultinio žaliosios tulžies sultinio ir EB sultinio).

Terpės kokybės kontrolė

- Ruošiant terpę, svarbu nepamiršti įdėti „Durhams“ mėgintuvėlių, jei to paties tikslas yra tirti koliformas.

- Negalima perkaitinti terpės prieš sterilizuodami.

- Paskirstykite mėgintuvėliuose prieš sterilizavimą, niekada po jo.

- Nenaudokite, jei terpė yra senesnė kaip 3 mėnesiai.

- Nenaudokite, jei pastebėjote įprastų terpės savybių pokyčius.

- Ruošdami laktozės sultinio partiją, patikrinkite jos kokybę sėdami žinomus štamus, tokius kaip Escherichia coli, Enterobacter aerogenes, Citrobacter freundii ir Klebsiella pneumoniae. Jie labai gerai auga, gamindami dujas (teigiama kontrolė).

- Tai taip pat gali apimti Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium arba Enterococcus faecalis, kurie gerai auga, bet nesudaro dujų (neigiama kontrolė).

- Reikėtų pažymėti, kad pradinė dehidratuotos terpės spalva yra smėlio spalvos, o paruoštos terpės spalva yra labai šviesi ir skaidri geltona. Jei pastebimas spalvos ar išvaizdos pokytis, jis gali pablogėti.

Nuorodos

1. Acevedo R, Severiche C, Castillo M. Aplinkos biologija ir mikrobiologija. (2013 m.) 1-asis leidimas. Kartachenos universitetas, Kolumbija.
2. „Camacho A“, „Giles M“, „Ortegón A“, „Palao M“, „Serrano B“ ir „Velázquez O.“ (2009). Maisto produktų mikrobiologinės analizės metodai. 2-asis leidimas UNAM Chemijos fakultetas. Meksika.
3. „Conda Pronadisa“ laboratorijos. 2017. Dviguba laktozės sultinio koncentracija (European Pharm.)
4. Fernández-Rendón C, Barrera-Escorcia G. Koliforminių bakterijų ekstrahavimo iš Xochimilco ežero, Meksika nuosėdų, metodų palyginimas. Argentinas. mikrobiolis. 2013; 45 (3): 180–184. Galima rasti: scielo.org.
5. Sotomayor F, Villagra V, Cristaldo G, Silva L, Ibáñez L. Artezinių šulinių vandenų mikrobiologinės kokybės nustatymas Centrinės, Kordiljeros ir Sostinės savivaldybės departamentų rajonuose. Inst. Tyrimas. Mokslas. Sveikata 2013; 11 (1): 5–14. Galima įsigyti iš: scielo.iics.