MALONATO SULTINYS: PAGRINDAS, PARUOŠIMAS IR PANAUDOJIMAS - BIOLOGIJA - 2025

Malonato sultinys yra skystis kultūros terpė naudojami diagnostikos bandymo (malonato), naudojamas atskirti tam tikrą Enterobacteriaceae šeimos genčių. Jį sukūrė Leifsonas 1933 m., Vėliau jį modifikavo Ewingas, kuris į pradinę formulę pridėjo nedidelį kiekį dekstrozės ir mielių ekstrakto.

Šiuo metu terpę sudaro mielių ekstraktas, amonio sulfatas, dikalio fosfatas, monokalio fosfatas, natrio chloridas, natrio malonatas, dekstrozė ir bromtimolio mėlynasis. Šis tyrimas paprastai įtrauktas į biocheminio enterobakterijų identifikavimo akumuliatorių, padedantį atskirti tam tikras gentis ir rūšis.

Grafinis malononato tyrimo vaizdas. A. Neigiamas testas, B. (Rūgštinimas) Neigiamas testas, C. (Vidutinis šarminimas) Teigiamas testas. Šaltinis: spalvų vamzdeliai publicdomainpictures.net

Malonato testas daugiausia grindžiamas kai kurių mikroorganizmų gebėjimu naudoti natrio malonatą kaip vienintelį anglies šaltinį, o amonio sulfatą - kaip azoto šaltinį.

Malonato testas paprastai yra teigiamas kai kurių Enterobacter, Klebsiella ir Citrobacter genčių rūšių atžvilgiu. Kadangi dauguma Escherichia, Salmonella, Shigella, Edwardsiella, Yersinia, Serratia, Morganella, Proteus ir Providencia genčių rūšių sukelia neigiamą reakciją.

Pagrindas

Malonato testą sudaro parodomos tos bakterijos, kurios sugeba naudoti natrio malonatą kaip vienintelį anglies šaltinį, o amonio sulfatą - kaip azoto šaltinį.

Daugelis enterobakterijų, kurios nenaudoja malonato, sugeba augti šioje terpėje, naudodamos maistines medžiagas dekstrozę ir mielių ekstraktą.

Tokiu atveju bet koks bandymas šarminti naudojant peptonus bus neutralizuotas gaminant rūgštis, susidarančias fermentuojant dekstrozę. Dialio ir monokalio fosfatai taip pat veikia kaip buferis, palaikydami pH 6,7.

Štai kodėl, kai bandymas neigiamas, sultinys išlieka tos pačios originalios spalvos (žalias). Retais atvejais terpė gali būti rūgšti dėl dekstrozės fermentacijos; nenaudojant peptonų ir pH indikatoriaus, terpė pasikeis geltona spalva. Kad tai įvyktų, pH turi nukristi iki 6.

Tačiau kai šis testas yra teigiamas, sakoma, kad mikroorganizmas naudojo malonatą ir amonio sulfatą kaip anglies ir azoto šaltinius, nenaudodamas kitų komponentų.

Tokiu atveju terpė tampa šarminė dėl natrio išsiskyrimo ir dėl to susidarančio NaOH. Šia prasme pH indikatorius (mėlynas bromtimolis) paverčia terpės spalvą iš žalios į mėlyną, kai pH yra lygus 7,6 arba didesnis. Mėlyna gali būti šviesi arba intensyvi (prūsų mėlyna).

Galiausiai natrio chloridas palaiko terpės osmoliškumą, o vanduo yra visų komponentų skiediklis.

Interpretacija

Tos pačios spalvos sultinys (žalias) - neigiamas testas

Geltonasis sultinys: neigiamas testas

Šviesus arba tamsiai mėlynas sultinys: testas teigiamas

Yra variantas, vadinamas fenilalanino malonato sultiniu, dar vadinamas Shaw ir Clarke terpe. Tokiu atveju galima išanalizuoti du bandymus: malonato kaip anglies šaltinio naudojimą ir piruvato rūgšties susidarymą iš fenilalanino.

Paruošimas

Malonato sultinys

Sveriamas pasirinktos komercinės įmonės intarpo nurodytas gramų skaičius (jis gali skirtis). Pasverti gramai suspenduojami viename litre distiliuoto vandens. Šiek tiek pakaitinkite, kol visiškai ištirps. Paskirstykite 3 ml terpės į 13/100 mėgintuvėlius su medvilnės dangteliais.

Sterilizuokite autoklave 121 ° C temperatūroje 15-20 minučių.

Prieš naudojimą atvėsinkite. Jei jie nebus naudojami iškart, laikykite šaldytuve iki naudojimo. Prieš sėjant, sultiniai pašildomi iki kambario temperatūros.

Terpės pH turėtų būti 6,7 ± 0,2. Paruošta terpė yra butelio žalia.

Fenilalanino malonato sultinys

Pasveriama 11 g dehidratuotos terpės ir ištirpinama 1 litre distiliuoto vandens. Likęs paruošimo būdas yra tas pats, kas aprašyta anksčiau.

Jį taip pat galima paruošti įpilant 2 g / l fenilalanino į malononato sultinio terpę prieš sterilizuojant.

Naudokite

Jis naudojamas kaip dalis biocheminių bandymų, surinktų enterobakterijų šeimos bakterijoms identifikuoti.

Padeda atskirti:

- Escherichia ir Serratia (-) genties Klebsiella ir Enterobacter (+) gentys.

- Salmonella enterica ssp arizonae, Salmonella enterica ssp salame ir Salmonella enterica ssp diarizonae (+) rūšys, priklausančios Salmonella enterica ssp enterica (-) rūšims.

-Nuo Klebsiella genties paprastai (+) iš Actinobacillus genties (-).

- Kartais tai gali padėti atskirti bakterijas, nepriklausančias Enterobacteriaceae šeimai, gentims ir rūšims, pavyzdžiui, tarp nefermentuojančių gramneigiamų Alcaligenes faecalis (+) ir Acinetobacter sp (-) bakterijų.

Šaltinis: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinė diagnostika. 5-asis leidimas Redakcija Panamericana SA Argentina.

Procesas

Pagal žiebtuvėlį paimama dalis gryno odekolono, naudojant tinkamai sterilizuotą ir atvėsintą platinos rankeną. Paimtas mėginys (lengvas užpildas) ištirpinamas malononato sultinyje. Inkubuokite su laisvu dangčiu aerobiozėje 35 ° C ± 0,2 temperatūroje 24–48 valandas.

Malonato sultinį taip pat galima pasėti iš 18–24 valandų kultūros į trypticase sojos sultinį. Tokiu atveju su sterilia pipete išgeriama 0,01 ml ir pasėjama malonato sultinio. Inkubuokite su laisvu dangčiu aerobiozėje 35 ° C ± 0,2 temperatūroje 24–48 valandas.

Laiko pabaigoje rezultatai aiškinami. Visi mėlynos spalvos pėdsakai po 48 valandų inkubacijos turėtų būti laikomi teigiamais. Testas neturėtų būti aiškinamas kaip neigiamas, kol nepraeina 48 valandų inkubacijos laikas.

Jei naudojamas fenilalanino malonato sultinio variantas, malonatas pirmiausia aiškinamas ir tada pridedami 5 lašai 1N HCl ir 3–5 lašai 8% geležies chlorido. Tamsiai žalia spalva aiškinama kaip teigiamas fenilalanino testas. Kita vertus, jei terpė tampa šviesiai mėlyna, fenilalanino testas yra neigiamas.

QA

Norint atlikti terpės sterilumą, vieną arba du sultinius reikia inkubuoti 35 ° C ± 0,2 temperatūroje 24 valandas. Po šio laiko neturėtų būti debesuotumo ar spalvos pokyčių.

Kokybės kontrolei gali būti naudojami žinomi ar sertifikuoti štamai, tokie kaip: Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 33945, Salmonella enterica ssp arizonae ATCC 13314 ir Escherichia coli ATCC 25922.

Laukiami rezultatai:

• Enterobacter aerogenes, Klebsiella pneumoniae ir Salmonella enterica ssp arizonae sukelia teigiamą reakciją (vidutiniškai mėlyna spalva).
• Escherichia coli rezultatas turėtų būti neigiamas, tai yra, tikimasi, kad dėl gliukozės fermentacijos spalva nepasikeis (žalia) arba ji pagels.

Apribojimai

Nenaudokite sultinio, kuriame yra drumstumo, nuosėdų, pasikeitusi spalva ar bet kokie pablogėjimo požymiai.

Nuorodos

1. Pedraza J, Sanandres N, Varela Z, Aguirre E, Camacho J. Salmonella spp. Mikrobiologinis išskyrimas. ir molekuliniai įrankiai jo aptikimui. „Uninorte“ sveikata. „Barankilija“ (pulkininkas) 2014 m .; 30 (1): 73–94. Galima rasti svetainėje: scielo.org.co
2. BBL. Malonatas sultinys, Ewing modifikuotas. 2007. Galima rasti: bd.com
3. „Senna“ laboratorijos. Malonato sultinys. Galima rasti: c Scientificasenna.com
4. RenyLab. Malonato sultinys. 2013. Prieinamas adresu: es.renylab.ind.br
5. Mbiolog diagnostika. Malonato sultinys. Galima rasti: mbiolog.com
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinė diagnostika. 5-asis leidimas Redakcija Panamericana SA Argentina.
7. „Conda Pronadisa“ laboratorijos. Fenilalanino malonato sultinys. Galima rasti: condalab.com