SELENITO SULTINYS: PAGRINDAS, PARUOŠIMAS IR PANAUDOJIMAS - BIOLOGIJA - 2025

Selenito yra selektyvus skystis kultūros terpė. Jį sukūrė Leifson mėginių praturtinimui, kai įtariama, kad yra enteropatogeninių Salmonella genties bakterijų.

Ši terpė atitinka Amerikos visuomenės sveikatos asociacijos (APHA) reikalavimus, todėl yra priimta tirti salmonelių buvimą išmatų, šlapimo, skysto ar kieto maisto, vandens, be kita ko, mėginiuose.

Selenito sultinys. Šaltinis: autoriaus nuotr. Magistrantūra. Marielsa gil

Jo cheminė sudėtis skatina šių mikroorganizmų atsigavimą ir, savo ruožtu, slopina kitų augimą. Pirmiausia jis yra toksiškas daugumai bakterijų, priklausančių Enterobacteriaceae šeimai. Tačiau tai taip pat leidžia atsigauti Shigella kamienams ir neslopina Pseudomonas ir Proteus augimo.

Jį sudaro bevandenis natrio vandenilio selenitas, bevandenis natrio fosfatas, peptonai ir laktozė. Taip pat yra variantas, į kurį pridedama cistino, taigi jo pavadinimas yra selenito-cistino sultinys.

Šiuo metu pirmenybė teikiama selenito-cistino sultinio naudojimui, nes gaunamas didesnis salmonelių išgavimo procentas, lygus tam, kuris stebimas naudojant kitas selektyvias terpes tam pačiam tikslui, pavyzdžiui, natrio tetrationato sultinį.

Pagrindas

Sultinyje esantys peptonai tarnauja kaip maistinės medžiagos tinkamam mikroorganizmų vystymuisi. Salmonelių padermėse peptonai naudojami kaip azoto, vitaminų ir amino rūgščių šaltinis.

Laktozė yra fermentuojami angliavandeniai, o natrio selenitas yra slopinamoji medžiaga, stabdanti gramteigiamų bakterijų ir daugumos žarnyno floroje esančių bakterijų, ypač Enterobacteriaceae šeimos, augimą. Natrio fosfatas yra buferis, stabilizuojantis terpės pH.

Selenito sultinio varianto, kuriame yra L-cistino, atveju šis papildomas junginys yra reduktorius, kuris sumažina selenito toksiškumą ir padidina Salmonella atsigavimą.

Paruošimas

-Selenito sultinys

Jei turite mišinio komponentų, galite pasverti:

4 g bevandenio natrio vandenilio selenito.

10 g bevandenio natrio fosfato.

5 g peptonų.

4 gramai laktozės.

Ištirpinkite junginius 1 litre sterilaus distiliuoto vandens. Jis gali būti šiek tiek pašildytas, kad visiškai ištirptų.

Kai kurios laboratorijos terpę 10 minučių veikė sklandžiais garais, kad ją sterilizuotų, nes ji neturėtų būti autoklavuota. Jei terpė yra sterilizuota, ją galima laikyti šaldytuve iki naudojimo.

Jis taip pat gali būti paruoštas nesterilus ir tiesiogiai tiekiamas 10–15 ml į sterilius mėgintuvėlius.

Tokiu atveju reikia palikti pailsėti ir nedelsiant išnaudoti. Kadangi terpė nėra sterili, jos negalima laikyti šaldytuve vėlesniam naudojimui.

- Paruošti komercinę aplinką

Jei yra komercinės terpės, pasverkite 23 g dehidratuotos terpės ir ištirpinkite ją viename litre sterilaus distiliuoto vandens. Trumpai pakaitinkite, kad ištirptų. Negalima autoklavo. Aseptiškai įpilkite 10 arba 15 ml į sterilius mėgintuvėlius.

Galutinis terpės pH turėtų būti 7,0 ± 0,2.

Reikėtų pažymėti, kad dehidratuota terpė yra smėlio spalvos, o preparatas yra šviesios ir permatomos gintaro spalvos.

Selenito-cistino sultinio variantas

Jame yra tų pačių junginių kaip selenito sultinyje, tačiau pridedama 10 mg cistino. Likusi procedūros dalis yra tokia pati, kaip aprašyta aukščiau.

Programos

Ši terpė yra speciali naudoti atliekant epidemiologinius tyrimus tais atvejais, kai liga nėra ūmios stadijos, pacientams besimptomiams ar sveikiems nešiotojams.

Salmonella gentį paprastai sunku atskirti, nes jie paprastai būna tik mažai užteršti. Esant mažiems kiekiams, jis lengvai persidengia dėl didesnio kitų bakterijų genčių augimo.

Kita vertus, žaliavos, iš kurių gaminami perdirbti maisto produktai, be kita ko, dažnai yra veikiamos šilumos, dehidratacijos procesų, dezinfekavimo, radiacijos ir konservantų naudojimo.

Todėl žaliavoje esančios salmonelės yra netinkamai apdorojamos, kai produktas naudojamas minėtuose pramoniniuose procesuose. Panašiai ir klinikinių mėginių, tokių kaip išmatos, padermės gali būti silpnos, jei jos atsiranda iš pacientų, gydytų antibiotikais.

Todėl bet kokį mėginį, kuriame įtariama salmonelių buvimas, reikėtų iš anksto praturtinti laktozės sultiniu, o vėliau praturtinti selenito sultiniu, kad būtų galima geriau atsistatyti selektyviose terpėse, tokiose kaip SS agaras, ksilozės agaras, lizino deoksicholatas (XLD). ), enterinis Hektoeno agaras (HE) ir ryškiai žalias agaras.

Sėjama

Išmatų mėginiams imti 1 g mėginio ir suspenduoti mėgintuvėlyje su 10–15 ml selenito sultinio. Jei išmatos yra skystos, paimkite 1 ml ir suspensiją išpilkite į sultinį. Jei reikia tiesiosios žarnos tamponų, tampono medžiagą išpilkite į sultinį.

Kieto maisto mėginiuose paimkite 1 gr ir suspenduokite į selenito sultinį.

Skystuose maisto produktuose lygiomis dalimis sumaišykite su selenito sultiniu, esant dvigubai koncentracijai.

Šlapimo mėginiams centrifuguoti, supernatantą išmesti, paimti visas nuosėdas ir suspenduoti į selenito sultinį.

Sultiniai inkubuojami 37 ° C temperatūroje 24 valandas. Bakterijų augimą liudija drumstumas. Inkubacijai 42 ° C temperatūroje taip pat gali būti pridedamas papildomas mėgintuvėlis. Vėliau iš selenito sultinio sėjama selektyvi kieta terpė.

QA

Sterilumui kontroliuoti selenito sultinys iš kiekvienos neinokuliuotos partijos inkubuojamas 37 ° C temperatūroje 24 valandas. Tikimasi, kad terpė netirpsta ir nekeis spalvos.

Tinkamai terpės veikimui kontroliuoti gali būti naudojami žinomi štamai, tokie kaip:

Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella choleraesuis ATCC 12011, Escherichia coli ATCC 25922 ir Proteus mirabilis ATCC 43071.

Laukiami rezultatai:

• Pirmųjų trijų bakterijų padermių augimas turi būti pakankamas.
• Escherichia coli daliniam slopinimui.
• Dėl „Proteus“ vidutinio augimo.

Apribojimai

Selenito sultinio terpė yra toksiška žmogaus odai, todėl reikia vengti tiesioginio kontakto.

Nuorodos

1. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Natrio selenito ir natrio tetrationato auginimo terpių palyginimas, abu inkubuoti 37 ° C ir 42 ° C temperatūroje. Salmonella spp išskyrimas iš nešiotojų išmatų. „Biomed 2003“; 14 (4): 215–220
2. „Britannia“ laboratorijos. Selenito sultinys. 2015.Atsiejama: britanialab.com
3. Neogenų laboratorijos. Selenito sultinys. Galima rasti svetainėje: foodsafety.neogen.com
4. González -Pedraza J, Pereira -Sanandres N, Soto -Varela Z, Hernández -Aguirre E, Villarreal- Camacho J. Salmonella spp. Mikrobiologinis išskyrimas. ir molekuliniai įrankiai jo aptikimui. Sveikata, „Barranquilla 2014“; 30 (1): 73–94. Galima gauti iš: http://www.scielo.org.
5. „Forbes B“, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey ir Scotto mikrobiologinė diagnozė. 12 red. Redakcija Panamericana SA Argentina.