TRYPTICASEIN SOJOS SULTINYS: PAGRINDAS, PARUOŠIMAS IR PANAUDOJIMAS - BIOLOGIJA - 2025

Sojos sultinio triptono yra skystis kultūros terpė, labai maistingas, neselektyvūs. Dėl didelio universalumo, ji yra viena iš plačiausiai naudojamų skystųjų terpių mikrobiologijos laboratorijoje.

Jis taip pat žinomas kaip triptiškas sojos sultinio arba suskaidyto kazeino-sojos pavadinimas, kurio santrumpa yra TSB, jei jos santrumpa angliškai yra Tryptic Soy Broth, arba CST, jei tai yra jos akronimas ispanų kalba. Dėl savo sudėties jo paskirtis labai įvairi. Jį sudaro tripteinas, sojos peptonas, natrio chloridas, dikalio fosfatas ir gliukozė.

Trypticasein sojos sultinys, pasėtas Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 kamienu, kuriame stebimas pigmento gaminimas. Šaltinis: autoriaus nuotr. Magistrantūra. Marielsa Gil.

Jis sugeba dauginti kliniškai svarbias patogenines bakterijas, įskaitant tas, kurios reikalauja daug mitybos, ir anaerobines bakterijas. Šioje aplinkoje taip pat gali išsivystyti kai kurie oportunistiniai ir užteršiantys grybeliai.

Dėl didelės mitybinės galios jis turi didelį jautrumą aptikti mikrobų užterštumą, dėl šios priežasties USDA Gyvūnų ir augalų sveikatos inspekcijos tarnyba pasirinko vakcinų mikrobiologinę analizę.

Taip pat sojos sultinys trypticasein atitinka įvairių farmakopėjų (Europos Parlamento, Japonijos JP ir Šiaurės Amerikos USP) reikalavimus, taikomus gaminių, tokių kaip kosmetika ir maistas, mikrobiologiniams tyrimams pramoniniu lygmeniu.

Kita vertus, verta paminėti, kad nepaisant didelio naudingumo, ši terpė yra palyginti nebrangi, todėl ją gali įsigyti dauguma mikrobiologijos laboratorijų. Tai taip pat labai lengva paruošti.

Pagrindas

Tripteinas, peptonas ir gliukozė suteikia pagrindines maistines savybes, kad tai būtų ideali terpė greitam mikrobų augimui.

Maždaug per 6–8 inkubacijos valandas daugumoje mikroorganizmų jau galima pastebėti augimą. Tačiau yra lėtai augančių kamienų, kuriems augti gali prireikti dienų.

Natrio chloridas ir dikalio fosfatas atitinkamai veikia kaip osmosinis balansas ir pH reguliatorius. Augimo buvimą rodo terpės drumstumas; jei augimo nėra, terpė išlieka permatoma.

Dėl savo šviesios spalvos galima stebėti pigmentų, tokių, kaip parodyta paveikslėlyje straipsnio pradžioje, gamybą, kuri atitinka pigmento, kurį gamina Pseudomonas aeruginosa.

Paruošimas

-Triptysein sojų sultinys

Norint paruošti tryptinį sojos sultinį, skaitmeniniu mastu reikia pasverti 30 g dehidratuotos komercinės terpės. Tada jis ištirpinamas litre distiliuoto vandens, esančio kolboje.

Mišinys paliekamas 5 minutes pailsėti, po to nukreipiamas į šilumos šaltinį, kad terpė ištirptų. Jis turėtų būti dažnai maišomas, verdant 1 minutę.

Ištirpęs jis paskirstomas į reikiamo dydžio mėgintuvėlius. Gali būti naudojami vamzdeliai su medvilniniais kaiščiais arba su „Bakelite“ dangteliais. Vėliau mėgintuvėliai 15 minučių sterilizuojami terpe autoklave 121 ° C temperatūroje.

Terpės pH turi išlikti 7,3 ± 0,2

Reikėtų pažymėti, kad dehidratuota terpė yra šviesiai smėlio spalvos, ją reikia laikyti sausoje vietoje nuo 10 iki 35 ° C. Paruoštas sultinys yra šviesios gintaro spalvos ir turėtų būti laikomas šaldytuve (2–8 ° C).

-Įvairios triptazininės sojos sultinio savybės

Modifikuotą triptazeinino sojos sultinį galima paruošti pridedant tulžies druskų ir novobiocino, kad jis būtų selektyvus E. coli išskyrimui. Kitas to paties tikslo variantas yra paruošti triptazės sojos sultinį, papildytą vankomicinu, cefiksimu ir telluritu (2,5 µg / ml).

Kita vertus, į tryptinį sojos sultinį galima įpilti daugiau gliukozės (0,25%), kai siekiama skatinti bioplėvelių formavimąsi.

Naudokite

Jis yra pakankamai maistingas, kad galėtų augti tokioms skoningoms ar sudėtingesnėms bakterijoms kaip Streptococcus pneumoniae, Streptococcus sp ir Brucella sp, nereikia papildyti krauju ar serumu.

Taip pat šiame sultinyje gali išsivystyti kai kurie grybeliai, pavyzdžiui, Candida albicans Complex, Aspergillus sp ir Histoplasma capsulatum.

Be to, ši terpė anaerobinėmis sąlygomis yra ideali atkurti bakterijas, priklausančias Clostridium genčiai, taip pat nesportuotas anaerobines klinikinės svarbos bakterijas.

Jei pridedama 6,5% natrio chlorido, jis gali būti naudojamas Enterococcus ir kitų D ​​grupės streptokokų augimui.

Tyrimų lygmeniu jis buvo labai naudingas įvairiuose protokoluose, ypač tiriant biofilmą ar biologinius plėveles formuojančias bakterijas. Jis taip pat naudojamas paruošti 0,5% „Mac Farland“ bakterijų suspensiją, reikalingą atlikti antiiogramą Kirbio ir Bauerio metodais.

Tokiu atveju paimamos 3–5 panašios išvaizdos kolonijos ir emulsuojamos į 4-5 ml triptazinino sojos sultinio. Tada jis inkubuojamas 2–6 valandas 35–37 ° C temperatūroje ir po to sureguliuojamas iki norimos koncentracijos, naudojant sterilų druskos tirpalą. Trypticasein sojų sultiniai neturėtų būti naudojami nuo 18 iki 24 inkubacijos valandų.

Sėjama

Mėginys gali būti tiesiogiai sėjamas arba grynos kolonijos, paimtos iš selektyviosios terpės, gali būti subkultūrinės. Inokuliantas turėtų būti mažas, kad terpė prieš inkubaciją neužtemtų.

Paprastai jis inkubuojamas 37 ° C temperatūroje aerobiozėje 24 valandas, tačiau šios sąlygos gali skirtis priklausomai nuo ieškomo mikroorganizmo. Prireikus jį galima keletą dienų inkubuoti anaerobinėmis sąlygomis 37 ° C temperatūroje. Pvz., Greitai augančius ar išrankias mikroorganizmus galima inkubuoti iki 7 dienų.

Atliekant mikrobiologinę farmacinių medžiagų, tokių kaip vakcinos, analizę, protokolai yra griežtesni. Tokiais atvejais sultinys be augimo neišmetamas tol, kol pasieks nepertraukiamą 14 dienų inkubaciją.

QA

Iš kiekvienos paruoštos partijos turėtų būti inkubuojami 1 arba 2 neinokuliuoti mėgintuvėliai, kad būtų įrodytas jų sterilumas. Jis turi likti nepakitęs.

Taip pat galima sodinti žinomus kamienus, kad būtų galima įvertinti jų elgesį. Tarp padermių, kurias galima naudoti, yra:

Aspergillus brasiliensis ATCC 1604, Candida albicans ATCC 10231, Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus ATCC 6538 arba 25923, Escherichia coli ATCC 8739, Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC28CC305, pneumoniae ATCC28omonas 905, pneumoniae ATCC28omonas305.

Visais atvejais augimas turi būti pakankamas kiekvienos mikroorganizmo atmosferos ir temperatūros sąlygomis.

Apribojimai

-Gliukozės fermentacija sukelia terpės pH sumažėjimą dėl rūgščių gamybos. Tai gali būti nepalanki kai kurių rūgštingumui jautrių mikroorganizmų išgyvenimui.

-Nerekomenduojama palaikyti štamų, nes ne tik rūgštingumas, bet ir bakterijos po kelių dienų ardo maistines medžiagas, todėl kaupiasi toksinės medžiagos, dėl kurių aplinka tampa nenuosekli.

- Turite dirbti laikydamiesi visų sterilumo protokolų, nes sultiniai lengvai užteršiami.

-Paruošę triptazinetinių sojų sultinius, neturėtumėte bandyti sultinio perpilti į kitą sterilų mėgintuvėlį, nes tokio tipo manevrai yra labai pažeidžiami užteršimo.

Nuorodos

1. Cona E. Gero jautrumo tyrimo sąlygos agaro difuzijos testu. Chil. infektolas. 2002; 19 (2): 77–81. Galima rasti: scielo.org
2. Britanijos laboratorija. Tripteino sojos sultinys. 2015.Atsiejama: britanialab.com
3. MCD laboratorija. Trypticasein Soy Sultinys. Galima rasti elektroniniame sistemoje.com
4. Neogeno laboratorija. Triptikas Sojų sultinys. Galima rasti svetainėje: foodsafety.neogen.com
5. „Forbes B“, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey ir Scotto mikrobiologinė diagnozė. 12 red. Redakcija Panamericana SA Argentina.
6. Rojas T, Vásquez Y, Reyes D, Martínez C, Medina L. Magnetinio imuninio atskyrimo metodo, skirto Escherichia coli O157: H7 atkūrimui pieno kremuose, įvertinimas. ALANAS. 2006; 56 (3): 257–264. Galima rasti svetainėje: scielo.org.ve
7. Gil M, Merchán K, Quevedo G, Sánchez A, Nicita G, Rojas T, Sánchez J, Finol M. Biofilmų susidarymas Staphylococcus aureus izoliatuose pagal antimikrobinį jautrumą ir klinikinę kilmę. Vita. 2015; 62 (1): 1-8. Galima rasti: saber.ucv.ve
8. „Narváez-Bravo C“, „Carruyo-Núñez G“, „Moreno M“, „Rodas-González A“, „Hoet A“, „Wittum T.“ Escherichia coli O157: H7 išskyrimas dvigubos paskirties galvijų išmatų mėginiuose iš Mirandos savivaldybės, Zulijos valstijos, Venesuelos. Apžvalgos Cient. (Marakaibas), 2007; 17 (3): 239–245. Galima rasti: scielo.org