TETRACIONATO SULTINYS: PAGRINDIMAS, PARUOŠIMAS IR PANAUDOJIMAS - BIOLOGIJA - 2025

Tetrationatas sultinio arba sultinio TT yra selektyvus skystis kultūros terpė praturtėjimas ir susigrąžinimo Salmonella genties padermių. Jį sukūrė Müeller, o vėliau modifikavo Kauffmann, todėl yra žmonių, kurie jį vadina Müeller-Kauffmann sultiniu.

Originalioje terpėje buvo proteozių peptonų, kalcio karbonato ir natrio tiosulfato. Kauffmann į jį pridėjo tulžies druskų ir sukūrė dar vieną būdą ryškiai žalia. Šios medžiagos slopina koliforminių bakterijų augimą, todėl terpė laisva patogeninių bakterijų, šiuo atveju salmonelių, vystymuisi.

Į tetrationato sultinį įpilama jodo jodo tirpalo. Šaltinis: Manuelio Almagro „Rivas“

Modifikacija buvo labai sėkminga, nes ji žymiai padidino terpės jautrumą. Dėl šios priežasties šiuo metu naudinga ieškoti salmonelių bet kokio tipo mėginiuose, bet ypač kietų ar skystų išmatų ir maisto.

Jo paruošimas susideda iš dviejų etapų; Komercinė terpė yra pagrindas tetrationato sultinio paruošimui, o vėliau, kad būtų galima sudaryti tetrationatą, pridedama joduoto jodo tirpalo, kad terpė būtų užpildyta.

Amerikos visuomenės sveikatos asociacija (APHA) rekomenduoja naudoti salmonelių mėginių sodrinimui naudoti tetratioatinį sultinį, papildytą ryškiai žalia, nes jis yra selektyvesnis nei tetratiionato sultinys ir selenito sultinys.

Apskritai, tetrationato sultinys yra idealus, kai įtariama, kad yra Salmonella genties bakterijų mažais kiekiais arba kai jomis piktnaudžiaujama veikiant slopinančias medžiagas arba vykdant pramoninius procesus, kurie sumažina jų gyvybingumą.

Pagrindas

Esami peptonai atitinka kasos kazeino virškinimą ir gyvūninio audinio pepsinį virškinimą. Tai yra anglies, azoto ir bendrųjų maistinių medžiagų šaltinis bakterijų augimui.

Natrio tiosulfatas reaguoja su joduotu tirpalu ir sudaro tetrationatą. Tai slopina koliforminių bakterijų augimą ir skatina bakterijų, turinčių fermento tetrationato reduktazės, vystymąsi, tarp jų yra Salmonella gentis, taip pat Proteus.

Tulžies druskos taip pat veikia kaip daugumą gramneigiamų ir kai kurių gramneigiamų bakterijų (koliforminių medžiagų) slopinimo medžiaga.

Kalcio karbonatas sugeria toksiškas medžiagas, susidarančias suskaidžius tetrationatą, kuris sudaro sieros rūgštį. Šia prasme kalcio karbonatas neutralizuoja rūgštingumą, išlaikant terpės pH stabilų.

Ryškiai žalios spalvos atveju ši medžiaga padidina tetrationato sultinio selektyvinę galią, slopindama kitus nei Salmonella genties mikroorganizmus.

Paruošimas

-Tetracionato sultinys

Jodo jodo tirpalas

Sverti:

• 6 gramai jodo.
• 5 g kalio jodido.

Kalio jodidas ištirpinamas maždaug 5 ml sterilaus distiliuoto vandens, po to palaipsniui pridedama jodo, kol mišinys kaitinamas. Kai jis visiškai ištirps, praskieskite iki žymės steriliu distiliuotu vandeniu, kol pasieksite galutinį 20 ml tūrį.

Pagrindinė terpė tetrationato sultiniui

Pasverkite 46 gramus dehidratuotos terpės ir suspenduokite 1 litre sterilaus distiliuoto vandens. Sumaišykite ir kaitinkite, kol visiškai ištirps, jis gali virti tik keletą minučių. Negalima autoklavo. Terpės pagrindui leidžiama atvėsti iki maždaug 45 ° C ir tuo metu pridedama 20 ml joduoto tirpalo.

Į terpę įpilant joduoto tirpalo, jis turi būti nedelsiant suvartotas. Jei nenorite naudoti viso mišinio, atlikite šiuos veiksmus:

10 ml bazinės terpės pasiskirsto į mėgintuvėlius ir tik tiems, kurie bus pasėjami mėginiais, pridedama 0,2 ml joduoto tirpalo.

Tie, kurie nenaudojami, vis tiek gali būti laikomi šaldytuve, tačiau, kadangi terpė nesterilizuota, idealiausia yra paruošti tikslų kiekį, kurio reikia.

Prieš įpilant jodinto jodo tirpalo, terpės spalva yra pieno baltumo, su baltomis nuosėdomis, o pridėjus, ji yra ruda su tankiu nuosėdomis. Stebimos nuosėdos yra normalios ir atitinka netirpstantį kalcio karbonatą. Galutinis terpės pH yra 8,4 ± 0,2.

-Tetracionato sultinio variantas su ryškiai žalia

Norint paruošti ryškiai žalią tetrationato sultinį, atliekami visi aukščiau aprašyti veiksmai, tačiau į mišinį papildomai įpilama 10 ml ryškiai žalio tirpalo, paruošto 0,1%.

Šviečia žalia spalva

Šis sprendimas paruošiamas taip:

Pasverkite 0,1 g ryškiai žalios spalvos ir suspenduokite 100 ml distiliuoto vandens. Kaitinkite iki virimo, kad visiškai ištirptų. Laikyti gintaro buteliuose.

Naudokite

Išmatų mėginių (išmatų kultūros) protokolas yra toks:

1 g kietos išmatos arba 1 ml skystos išmatos į mėgintuvėlį pasėjama 10 ml paruošto naudoti tetrationato sultinio. Stipriai suplakite ir inkubuokite aerobiniu būdu 43 ° C temperatūroje 6–24 valandas.

Vėliau paimkite 10–20 μl sultinio ir subkultūros alikvotinę dalį selektyvioje salmonelių terpėje, pavyzdžiui, SS agare, XLD agare, ryškiai žaliame agare, Hektoen enteriniame agare ir kt.

Tuo pat metu selektyvi salmonelių terpė turėtų būti pasėjama tiesioginiu mėginiu (išmatomis) be sodrinimo. Jei norite iš tiesiosios žarnos tamponų, paimkite surinktą medžiagą į mėgintuvėlį ir tęskite, kaip aprašyta aukščiau.

Jei norite paimti maisto mėginius, pasverkite 10 g kieto maisto arba 10 ml skysto maisto ir užkimškite buteliuką 100 ml paruošto naudoti tetrationato sultinio. Tirpalas atliekamas taip, kaip aprašyta aukščiau, bet inkubuojamas 37 ° C temperatūroje.

Kaip matyti, santykis tarp mėginio ir sultinio visada bus 1:10.

QA

Kultūrinei terpei ištirti gali būti naudojami žinomi kontroliniai štamai. Plačiausiai naudojamos ATCC sertifikuotos padermės.

Naudojamos padermės yra Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella abony DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 ir Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Tikimasi puikaus Salmonella padermių augimo, o Escherichia coli augimas gali būti silpnas arba reguliarus, o gramteigiamų padermių (Enterococcus ir Staphylococcus) iš dalies arba visiškai slopinama.

rekomendacijas

- Kadangi ši terpė neslopina „Proteus“ augimo, kai kurios laboratorijos naudoja 40 mg / l novobiocino, kad užkirstų kelią šio mikrobinio padermės vystymuisi. Prieš jodo tirpalą reikia pridėti antibiotiką.

- Paruošus terpę, kurioje yra jodo jodo tirpalo, inokuliacija neturėtų trukti ilgiau kaip 2 valandas.

- Skirstant terpę mėgintuvėliuose, mišinys turi būti nuolat homogenizuojamas, kad būtų galima pakartotinai suspenduoti susidariusias nuosėdas.

- Mažiau užterštuose mėginiuose tetrationato sultinys inkubuojamas 35–37 ° C temperatūroje, o labai užterštuose mėginiuose rekomenduojama inkubuoti esant 43 ° C.

Nuorodos

1. „Conda Pronadisa“ laboratorija. 2010. Tetracionato sultinio pagrindas pagal Müeller-Kauffmann. Galima:
2. BD laboratorijos. 2003. Tetracionato sultinio bazė. Galima:
3. „Britannia“ laboratorijos. 2015. Tetranate bazinis sultinys. Galima:
4. „BBL Media“. 2005. Paruošta mėgintuvėliuose salmonelių kultūrai auginti.
5. „Forbes B“, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey ir Scotto mikrobiologinė diagnozė. 12 red. Redakcija Panamericana SA Argentina.
6. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Natrio selenito ir natrio tetrationato auginimo terpių palyginimas, abu inkubuoti 37 ° C ir 42 ° C temperatūroje. Salmonella spp išskyrimas iš nešiotojų išmatų. „Biomed 2003“; 14 (4): 215–220