BAKTERIJŲ KULTŪRA: RŪŠYS, YPATYBĖS, METODAI, REIKALAVIMAI - BIOLOGIJA - 2025

Bakterijų kultūros yra šių mikroorganizmų apie maistinių žiniasklaidos sėjos rezultatas, siekiant, kad juos atkurti, todėl bakterinės kolonijų atsiradimo kietos terpės ir drumstumas į skystoje terpėje.

Sėjimo būdas yra labai svarbus, kad būtų galima pasėti pasėlį tokiu būdu, kad esančios bakterijos pasiskirstytų ir galėtų išsivystyti tinkamai izoliuotos kolonijos.

Įvairūs pasėliai, autoriaus pasodinti Karabobo universiteto Biomedicinos ir technologijos mokslų pastato Bakteriologijos laboratorijoje. Šaltinis: autoriaus padarytų nuotraukų kompozicija. Marielsa Gil.

Kolonijos, gautos kietoje kultūrinėje terpėje, yra pasodinto mikroorganizmo dauginimosi pasekmė. Kiekviena kolonija prasideda nuo vienos bakterijos, kuri gali eksponentiškai daugintis ir sudaryti makroskopiškai matomą populiaciją.

Tas pats vyksta skystose terpėse, tačiau tokiu atveju bakterijų augimas stebimas drumstumu.

Bakterijų augimas yra įmanomas, kai pasirinkta kultūrinė terpė atitinka mitybos ir pH sąlygas, būtinas tam tikros bakterijos vystymuisi. Be to, būtina kontroliuoti kitus kintamuosius, tokius kaip temperatūra, inkubacijos laikas, deguonies koncentracija, CO ₂ .

Ne visoms bakterijų populiacijoms reikia vienodų reikalavimų, nors kai kurios gali būti būdingos beveik visoms, pavyzdžiui, kad terpėje yra peptonų, tiesa, kad yra ir reiklesnių mikroorganizmų, kuriems papildomai reikia kitų specifinių medžiagų, vadinamų augimo faktoriais.

Pavyzdžiui, galima paminėti, kad kai kuriems Haemophilus augalams reikia X faktoriaus (hemino) ir V faktoriaus (NAD).

Bakterijų kultūrų tipai

Bakterijų kultūros gali būti polimikrobinės, grynos arba mišrios.

Polimikrobinės bakterijų kultūros

Polimikrobinės kultūros yra tos, kurios gaunamos sėjant mėginį, gautą iš normalios mikrobiotos vietos, kurioje taip pat galima rasti tam tikrą patogeną.

Pavyzdys: vystant gerklų tamponų kultūrą, gali būti rastas toks patogenas, kaip Streptococcus pyogenes, tačiau jį lydi bendra mikrobiota toje vietoje.

Šiuo atveju būtina gerai įsitvirtinti, kad būtų galima augti skirtingoms bakterijoms, esančioms atskirai.

Kolonija, turinti savybes, suderinamas su Streptococcus pyogenes kamienu, bus kruopščiai paliesta platinos kilpa ir pasodinta į pirmojo spaudimo augalų terpę, tokiu būdu gaunant gryną to mikroorganizmo kultūrą.

Iš šios grynos kultūros galima atlikti visus tyrimus, reikalingus bakterijoms nustatyti.

Gryna bakterijų kultūra

Norint veiksmingai atpažinti mikroorganizmą, reikia dirbti iš grynos kultūros.

Grynas kultūras, kaip ir ankstesniame pavyzdyje, galima gauti persodinus izoliuotą polimikrobinių kultūrų koloniją arba pasodinus iš paprastai sterilios vietos paimtą mėginį ir egzistuoja tik vienas patogenas (auga vienas bakterijų rūšis). Pavyzdys: kai pacientas, sergantis bakteriniu meningitu, sėklą sudaro CSF.

Kitas būdas yra atsisakyti senosios grynosios kultūros, norint gauti atnaujintą grynąją kultūrą.

Mišrios bakterijų kultūros

Šios kultūros yra sudarytos iš mikroorganizmų mišinio, nes jie atsiranda gamtoje. Kai kuriuose pramoniniuose procesuose patogu naudoti mišrias kultūras.

Jo galima gauti sujungus kelias grynas kultūras, nes jos leidžia ištirti bakterijų tarpusavio ryšius.

Jie yra naudingi, pavyzdžiui, ardant ksenobiotikus pramoninėse nuotekose, nes jie veikia kaip biologiškai skaidomos medžiagos.

Bakterijų kultūrų ypatybės

Bakterijų kultūrose gautų kolonijų morfologinės savybės gali būti labai įvairios.

Kolonijos gali būti labai mažos, vidutinio sunkumo arba didelės ir gali būti sausos arba gleivinės, blizgios ar nuobodu. Priklausomai nuo tekstūros, jos gali būti įvairios - lygios ir šiurkščios, o priklausomai nuo formos, jos gali būti apskritos, plokščios, išgaubtos.

Priklausomai nuo spalvos, jos gali būti bespalvės, baltos, geltonos, rožinės, fuksijos, raudonos, oranžinės, smėlio, pilkšvos, žalsvos, rudos, juodos arba su metaliniu blizgesiu, atsižvelgiant į dalyvaujančias bakterijas ir naudojamą auginimo terpę.

Kolonijų ribos gali būti taisyklingos arba netaisyklingos. Kita vertus, kiti gali pateikti vienodą plėvelę, kuri pasiskirsto beveik visoje terpėje, vadinamoje „spietimu“. Tai būdinga Proteus sp.

Kai kurios bakterijų kultūros skleidžia kvapus, kurie yra gana būdingi susijusioms rūšims. Pavyzdžiui, Pseudomonas aeruginosa kultūrai būdingas vaisių kvapas, o Proteus genčiai būdingas purus kvapas.

Kolonijų pagal jų dydį pavyzdžiai

Nepaprastai mažas: Mycoplasma pneumoniae, Francisella tularensis.

Mažas: Streptococcus sp, Enterococcus sp.

Vidutinis: Enterobakterijų šeimos

Didelis: Bacillus cereus, Pseudomonas aeruginosa.

Kolonijų pagal jų išvaizdą pavyzdys

Sausi: Lactobacillus confusus.

Mukoidai: Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa.

Briliantas: Klebsiella pneumoniae.

Nepermatomas: Enterococcus faecalis, kai kurios Neisseria gonorrhoeae padermės.

Kolonijų pavyzdžiai pagal jų tekstūrą

Lygios kolonijos: Micrococcus luteus

Grubios kolonijos: Sarcina skilveliai ant maistinio agaro.

Kolonijų pagal jų formą pavyzdys

Apskritimai: Listeria murrayi ir Micrococcus luteus ant maistinio agaro.

Plokščias: Staphylococcus equorum ant maistinio agaro.

Išgaubta: Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae.

Kolonijų pagal jų sienas pavyzdys

Suapvalintas kraštas: Staphylococcus aureus, Escherichia coli.

Netaisyklinga siena: Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa.

Lobuliniai kraštai: Bacillus sp.

Kolonijų pagal jų spalvą pavyzdys

Skaidrus arba bespalvis: Shigella sp ant XLD agaro.

Balta: Staphylococcus hominis ant kraujo agaro.

Smėlio spalvos: Bacillus sphaericus ir Lactobacillus confusus ant maistinio agaro.

Geltona: Staphylococcus aureus ir Elizabethkingia meningoseptica ant kraujo agaro, Pediococcus sp, Staphylococcus lentus ant maistinio agaro,

Rausva: Escherichia coli ant XLD agaro, Micrococcus roseus ant maistinio agaro.

Fuksija: Escherichia coli „Mac Conkey“ agare.

Violetinė: Chromobacterium violaceum.

Raudoni: Serratia marcescens kambario temperatūroje ant maistinio agaro.

Oranžinė: „Kurthia zopfii“ ant maistinio agaro.

Pilkšvas: Sporosarcina karbamidas dirvožemio ekstrakto agare.

Žalsvas: Pseudomonas aeruginosa ant BHI agaro.

Rudas: Enterococcus sp ant tulžies eskulino agaro.

Juoda: Salmonella enteritidis ant SS agaro.

Su metaliniu blizgesiu: Escherichia coli ant Endo agaro.

Bakterijų kultūros metodai

Atliekamas aerobinių ar anaerobinių bakterijų auginimas

Tai yra plačiausiai naudojamas auginimo būdas. Taip yra dėl to, kad, visų pirma, žmonėms patogeninės bakterijos yra aerobinės arba fakultatyviosios anaerobinės; antra, tai yra daug pigiau ir lengviau nei anaerobinės kultūros. Pavyzdys: Mycoplasma pneumoniae ir Escherichia coli.

Anaerobinė bakterijų kultūra

Šio tipo kultūrai reikia visiško deguonies slopinimo. Anaerobinių bakterijų auginimo terpėse paprastai turėtų būti redukuojančių medžiagų, tokių kaip: askorbo rūgštis, tioglikolilatas, cisteinas arba siera, kad būtų pašalintas toksinis oro deguonies poveikis.

Kai kuriuose yra rodikliai, tokie kaip resazurinas, kuris yra mėlynas, esant deguoniui, ir bespalvis, esant anaerobiozei. Pavyzdys: Clostridium tetani.

Bakterijų kultūra mikroaerofilijoje

Kultūros lėkštelės dedamos į mikroaerofilinį gaubtą su uždegta žvake, uždengiamos. Žvakė sunaudoja deguonį ir užgeso. Esant tokiai būklei, auga kai kurios bakterijos, tokios kaip Streptococcus sp.

Medžiagos ir reikalavimai

medžiagos

Bakterijų kultūrai atlikti reikalingos medžiagos yra: „Petri“ lėkštelės ar mėgintuvėliai su auginimo terpėmis arba sultiniu, platinos kilpa, mėginys, „Bunsen“ degiklis arba orkaitė.

Reikalavimai bakterijų kultūrai atlikti

Bakterijų kultūrai reikia daugelio elementų, į kuriuos būtina atsižvelgti, pavyzdžiui, terpėje esančių maistinių medžiagų, pH, temperatūros, deguonies koncentracijos, CO2, drėgmės.

Maistinių medžiagų

Bakterijų kultūroms reikalingos terpės, kuriose yra makroelementų ir mikroelementų. Tarp makroelementų galima paminėti organines medžiagas, tokias kaip peptonai, amino rūgštys, angliavandeniai kaip anglies ir azoto šaltiniai.

Tarp mikroelementų, be kita ko, yra neorganinės medžiagos arba mikroelementai: manganas, cinkas, nikelis, boras, chloras, selenas, silicis, kobaltas, varis.

Vandenilio jonų koncentracija (pH)

Vandenilio jonų (H ⁺ ) ir hidroksilo jonų (OH ^- ) koncentracija terpėje, kurioje vystysis kultūra, yra gyvybiškai svarbi, nes jie lemia pH.

Dažniausiai naudojamas pH yra neutralus (pH = 7,0), tačiau gali būti terpių, kuriose patogu naudoti rūgštinį arba šarminį pH, pavyzdžiui, jei norite išskirti atitinkamai acidofilines arba alkalifilines bakterijas.

Temperatūra

Temperatūra yra labai svarbus veiksnys, darantis įtaką bakterijų kultūrų augimui. Bakterijos gali būti psichofilinės (augti esant žemesnei kaip 20 ° C temperatūrai, mezofilinėms (nuo 20 ° C iki 42 ° C), termofilinėms (nuo 40 ° C iki 70 ° C), hipertermofilinėms (70 ° C - 105 ° C).

Deguonies poreikis

Aerobiniai: jie auga esant deguoniui.

Mikroaerofiliniai: jie auga esant 5-10% CO _2.

Griežti anaerobai: auga trūkstant deguonies.

Atliekami anaerobai: auga esant deguoniui arba be jo.

Aerobiniai: jie gerai auga be deguonies ir toleruoja mažai deguonies.

Kultūros terpė

Kultūrinės terpės yra specialūs maistiniai preparatai, paruošiami laboratorijoje, siekiant gauti mikrobų augimą ar kultūrą. Šios terpės skiriasi savo konsistencija, sudėtimi ir funkcija. Kiekviena laboratorija parengs jų poreikius atitinkančią terpę.

Bakterijų kultūros kolekcija

Yra institucijų ar organizacijų, užsiimančių klinikinės, aplinkos ar pramonės reikšmės bakterijų padermių rinkimu, apibūdinimu, palaikymu ir paskirstymu.

Šios padermės naudojamos tiriamajam darbui ir kultūros terpės kokybės kontrolei vykdyti.

Pavyzdys: Amerikos tipo kultūros kolekcijos kamienai, Venesuelos mikroorganizmų surinkimo centras (CVCM) ir Kubos nacionalinio higienos, epidemiologijos ir mikrobiologijos instituto (INHEM) kamienai.

Nuorodos

1. Benavides G, Hermida A. Natūraliosios bakterinės floros išskyrimas ir identifikavimas iš Kruz Verde ir Guasca páramos dirvožemio. („Cundinamarca“). 2008. Bogota. Galima rasti: javeriana.edu.co/biblos
2. Hansas S. Bendroji mikrobiologija. „Omega“ leidimai. 1991. Barselona, ​​Ispanija. Galima rasti: biolprocariotas.files
3. Weng Z, Junco R, Díaz R. Mikrobinių kultūrų kolekcija: pastabos apie jų vystymąsi. Cubana Hig Epidemiol, 2003; 41 (1). Galima rasti: scielo.sld.cu/scielo.
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinė diagnostika. 5-asis leidimas Redakcija Panamericana SA Argentina.
5. „Forbes B“, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey ir Scotto mikrobiologinė diagnozė. 12 red. Redakcija Panamericana SA Argentina.