BAIRDO PARKERIO AGARAS: PAGRINDAS, PARUOŠIMAS IR NAUDOJIMAS - BIOLOGIJA - 2025

Agaras Baird Parkeris yra kieta terpė selektyvus ir skirtumas kultūra. Jis buvo sukurtas 1962 m., Siekiant aptikti ir suskaičiuoti koaguliazės teigiamus stafilokokus (Staphylococcus aureus).

Jį sudaro kasos kazeino hidrolizatas, mėsos ekstraktas, mielių ekstraktas, ličio chloridas, glicinas, natrio piruvatas, kalio telluritas, agaras ir kiaušinio trynio emulsija.

Tipiškos Staphylococcus aureus kolonijos ant Bairdo Parkerio agaro. Šaltinis: Daizy John

Baird Parker Agaras pagrįstas S. aureus gebėjimu sumažinti telluritą ir gaminti lecitinazę. Abi savybės sukuria koloniją, pasižyminčią specifinėmis šios rūšies savybėmis. Todėl jis yra labai efektyvus nustatant šį mikroorganizmą.

Tipiškos S. aureus kolonijos yra juodos arba tamsiai pilkos spalvos, turinčios bespalvį kraštą ir juos supančią šviesią halogeną, skiriančią jas nuo kitų mikroorganizmų. Šį patogeną galima rasti klinikiniuose mėginiuose, vandenyse, kosmetikoje ir žaliaviniame ar virtame maiste.

Jo diagnozė ar aptikimas yra nepaprastai svarbūs dėl įvairių patologijų, tokių kaip apsinuodijimas maistu, pleiskanotos odos sindromas, toksinio šoko sindromas, abscesai, meningitas, septicemija, endokarditas.

Pagrindas

Maitinimo galia

Kasos kazeino hidrolizatas, mėsos ekstraktas ir mielių ekstraktas yra maistinių medžiagų, vitaminų ir mineralų, reikalingų bendram mikrobų vystymuisi, šaltiniai, o piruvatas ir glicinas yra junginiai, palaikantys specifinį Staphylococcus aureus augimą.

Atrankinis

Baird Parker agaras yra selektyvus, nes jame yra medžiagų, kurios slopina lydinčios floros augimą, kartu skatindamos S. aureus vystymąsi. Slopinamieji junginiai yra ličio chloridas ir kalio telluritas.

Diferencialas

Ši terpė leidžia atskirti S. aureus nuo likusių koaguliazės neigiamų stafilokokų. S. aureus turi galimybę redukuoti telluritą į laisvą metalinį juodąjį telurį, sudarydamas juodos arba tamsiai pilkos kolonijas.

Taip pat kiaušinio trynys suteikia substratams įrodymą, kad yra fermento lecitinazės ir lipazės. S. aureus teigiamai veikia lecitinazes, todėl aplink koloniją bus pastebimas aiškus halogenas, rodantis, kad lecitinas buvo hidrolizuotas.

Šia prasme blizgančių juodų arba tamsiai pilkų kolonijų, turinčių aplink jas šviesų halogeną, vaizdas šiame agare rodo S. aureus buvimą.

Jei susidaro kritulių zona, tai rodo lipazės aktyvumą. Kai kurios S. aureus padermės yra teigiamos lipazės, kitos - neigiamos.

Jei S. aureus yra teigiama lipazės koncentracija, aplink juodos arba tamsiai pilkos spalvos koloniją bus pastebimas nepermatomas plotas, o tada dėl lecitinazės veikimo - šviesus halogenas.

Bakterijų, išskyrus S. aureus, kolonijas, galinčias augti šioje terpėje, išsivystys bespalvės arba rudos kolonijos be aplinkinių halogenų.

Netipinės juodosios kolonijos taip pat gali būti matomos su bespalviu rėmeliu arba be jo, bet be lengvo halo. Į šias kolonijas nereikėtų atsižvelgti, jos neatitinka S. aureus.

Paruošimas

Kiaušinio trynio emulsija

Paimkite šviežią vištienos kiaušinį, gerai nuplaukite ir padėkite į 70% alkoholio 2-3 valandas. Tada kiaušinis aseptiniu būdu atidaromas, o baltasis atsargiai atskiriamas nuo trynio. Po to paimamas 50 ml trynio ir sumaišomas su 50 ml sterilaus fiziologinio tirpalo.

1% m / v kalio telluritas

Kai kuriuose komerciniuose namuose parduodamas paruoštas naudoti 1% kalio telluritas. Jis pridedamas prie terpės, kol terpė sukietėja.

Norint paruošti šį tirpalą laboratorijoje, pasveriama ir ištirpinama 1,0 g kalio tellurito vienoje vandens dalyje. Vėliau vandens kiekis užpildomas iki 100 ml. Tirpalas turi būti sterilizuotas filtravimo metodu.

Mitybinės terpės paruošimas

Pasverkite 60 g dehidratuotos terpės ir ištirpinkite 940 ml distiliuoto vandens. Mišinį palikite sėdėti maždaug 5–10 minučių.

Pagerinkite šilumą, dažnai maišydami terpę, kad pagerintumėte tirpinimo procesą. Minutėlę užvirkite. Sterilizuokite autoklave 121 ° C temperatūroje 15 minučių.

Leiskite pastovėti, kol ji įgaus 45 ° C temperatūrą, įpilkite 50 ml kiaušinio trynio emulsijos ir 10 ml 1% tellurito. Gerai išmaišykite ir supilkite 15–20 ml į sterilius Petri lėkšteles.

Leiskite sukietėti, sudėkite apverstas į plokšteles ir laikykite šaldytuve iki naudojimo.

Galutinis paruoštos terpės pH turi būti 6,8 ± 0,2.

Prieš sėjant mėginį, palaukite, kol plokštelė pasieks kambario temperatūrą. Sėklų plokštelės sėjamos dryžuotu būdu arba sėjant paviršiumi Drigalski mentele.

Dehidratuota terpė yra šviesiai įdegusi, o paruošta terpė - šviesiai gintaro spalvos.

Naudokite

Klinikiniai mėginiai

Klinikiniai mėginiai sėjami tiesiai, išpilant dalį medžiagos viename plokštelės gale, o iš ten ji ištempiama išsekus. Inkubuokite 24–48 valandas 35–37 ° C temperatūroje.

Maisto mėginiai

Pasverkite 10 g maisto mėginio ir homogenizuokite 90 ml 0,1% peptono vandens, jei reikia, paruoškite praskiedimus. Plokštelės paskiepomos trimis egzemplioriais su 0,3 ml paruošto tirpalo, o sėklą paviršiumi užbarstykite Drigalski mentele. Inkubuokite 24–48 valandas 35–37 ° C temperatūroje.

Ši metodika leidžia suskaičiuoti gautas tipiškas kolonijas ir yra ideali, kai įtariama, kad S. aureus yra daugiau kaip 10 KSV / g mėginio.

Jei įtariama, kad S. aureus kiekis yra nedidelis arba yra daug lydinčios floros, mėginį siūloma praturtinti triptazės sojos sultinyje 10% NaCl ir 1% natrio piruvatu. Tai paskatins S. aureus augimą ir slopins lydinčios floros vystymąsi. Drumstieji mėgintuvėliai pasėjami ant Bairdo Parkerio agaro.

Vandens mėginiai

Sterilizuotoje vakuuminio filtravimo sistemoje filtruojamas 100 ml tiriamojo vandens, po to 0,4 mikronų mikroporinė membrana pašalinama steriliomis žnyplėmis ir dedama ant Baird Parker plokštelės. Inkubuokite 24–48 valandas 35–37 ° C temperatūroje. Šis metodas leidžia suskaičiuoti tipiškas S. aureus kolonijas.

QA

Baird Parker agaro kokybei įvertinti galima naudoti tokias žinomas padermes kaip Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 ar Proteus mirabilis ATCC 43071.

Yra žinoma, kad S. aureus ATCC padermės mažina telluritą, be to, jos teigiamai veikia lipazę ir lecitinazes. Todėl turi būti tinkamai išsivysčiusios ir augti išgaubtos kolonijos su juodu centru ir bespalviu kraštu, su nepermatomomis halogenomis ir šviesiai tolimiausiomis halogenomis.

Tikimasi, kad S. epidermidis šioje terpėje vystysis silpnai, nuo rusvai pilkos iki juodų kolonijų, be šviesių halogenų.

Manoma, kad E. coli ir P. mirabilis bus visiškai ar iš dalies slopinami. Augimo atveju rudos kolonijos išsivystys be nepermatomo ploto ar lengvo halo.

rekomendacijas

- Pridedant tellurito ir kiaušinio trynio, terpė neturėtų būti kaitinama.

- Kiaušinio trynio emulsijos paruošimas ir jos įdėjimas į vidurį yra labai pažeidžiamas užteršimo žingsnis. Reikia būti labai atsargiems.

- Jei yra tipiškų S. aureus kolonijų, tai turėtų būti patvirtinta atlikus koaguliazės testą ant minėto kamieno.

- Jei koaguliazės rezultatai yra abejotini, reikia atlikti kitus patvirtinamuosius tyrimus.

- Atsargiai, nepainiokite tipiškų S. aureus kolonijų su netipiškomis juodosiomis kolonijomis.

Nuorodos

1. Vikipedijos bendradarbiai. Baird-Parker agaras. Vikipedija, nemokama enciklopedija. 2017 m. Kovo 15 d., 19:36 UTC. Galima rasti: wikipedia.org/ Prieinama 2019 m. Vasario 18 d.
2. BD laboratorijos. Baird Parker Agaras. 2006. Prieinamas: bd.com
3. „Britannia“ laboratorijos. Baird Parker agaro bazė. 2015.Atsiejama: britanialab.com
4. Francisco Soria Melguizo laboratorijos. 2009. Baird Parker Agaras. Galima rasti: http://f-soria.es/Inform
5. „Britannia“ laboratorijos. Kalio telluritas. 2015.Atsiejama: britanialab.com
6. Alarcón-Lavín M, Oyarzo C, Escudero C, Cerda-Leal F, Valenzuela F. Enterotoksigeninio Staphylococcus aureus A tipo vežimas maisto tvarkymo aparatų nosiaryklės tepinėliuose. „Rev Med Chile 2017“; 145: 1559-1564
7. Venesuelos standartinis koveninas 1292–89. (1989). Maistas. Staphylococcus aureus išskyrimas ir išvardijimas. Galima rasti: sencamer.gob.ve