BHI AGARAS: PAGRINDAS, PARUOŠIMAS IR PANAUDOJIMAS - BIOLOGIJA - 2025

BHI agaro arba smegenų Širdies Infuzijos agaro terpėje yra maistinė kietas kultūra. Ispanų kalba mes tai vadiname smegenų širdies infuzijos agaru. Tai neselektyvi kultūrinė terpė, tai reiškia, kad gali išsivystyti visų tipų gramteigiamos ir gramneigiamos bakterijos, taip pat kai kurie mielių ir gijiniai grybeliai.

Jį sudaro veršelio smegenų ir širdies infuzija, pepsinis hidrolizatas iš gyvūnų audinių, kasos kazeino hidrolizatas kasoje, natrio chloridas, gliukozė, dinatrio fosfatas ir agaras.

BHI plokštelės. Šaltinis: autoriaus nuotr. Magistrantūra. Marielsa Gil.

Reikėtų pažymėti, kad BHI agaras yra viena iš dažniausiai naudojamų terpių bakteriologijos laboratorijose. Jis gali būti naudojamas be priedų kaip pagrindinė kultūra, kolonijų subkultūra, gauta kitose selektyvinėse terpėse, arba padermėms palaikyti laboratorijoje.

Kita vertus, tai yra ideali terpė, naudojama kaip pagrindas ruošiant praturtintas terpes, tokias kaip kraujo agaras ir šokolado agaras. Abi jos yra idealios norint atskirti reiklius mikroorganizmus mitybos požiūriu. Tačiau reikia pažymėti, kad kadangi jame yra gliukozės, jis nėra tinkamas stebėti hemolizės pokyčius.

Taip pat BHI agaras gali būti naudojamas specialioms terpėms, skirtoms sunkiai augančių patogeninių mikroorganizmų išskyrimui įprastoje terpėje, tarp jų: ​​Haemophilus sp, Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae ir Histoplasma capsulatum.

Su antibiotiko priedu BHI agaras tampa selektyvia terpe grybeliams išskirti.

Pagrindas

Tai maistinė terpė, skirta išskirti vidutiniškai reiklius mikroorganizmus, o jos sodrinimą galima padidinti pridedant kraujo ir kitų maisto papildų.

Tai neselektyvi mitybinė terpė, todėl ji leidžia augti daugumai gramteigiamų ir gramneigiamų bakterijų, taip pat kai kuriems grybeliams. Tačiau jis gali būti selektyvus pridedant antibiotikų.

Terpėje yra blauzdos smegenų ir širdies infuzija, gyvūninių audinių pepsinis hidrolizatas ir kasos kazeino hidrolizatas; Visi šie junginiai veikia kaip vitaminų, amino rūgščių, azoto ir anglies šaltiniai.

Gliukozė yra angliavandenis, teikiantis energiją mikroorganizmams, kai jie ją fermentuoja. Tuo tarpu natrio chloridas ir dinatrio fosfatas palaiko osmosinę pusiausvyrą ir suteikia pH, artimą neutralumui. Galiausiai agaras gauna vidutinio kietumo konsistenciją.

Paruošimas

Pasverkite 52 gramus dehidratuotos terpės ir ištirpinkite viename litre distiliuoto vandens. Mišinys virinamas iki šilumos šaltinio, kol virinamas, dažnai maišant tirpinimo metu.

BHI agaro plokšteles ar pleištus galima paruošti be priedų.

Pleištai

Norėdami paruošti pleištus, preparatą patiekite tol, kol bus užpildyta pusė kiekvieno vamzdelio, uždenkite ir sterilizuokite autoklave 121 ° C temperatūroje 15 minučių, kai išeisite, gulėkite ant pagrindo, kol jie sukietės. Vėliau iki naudojimo laikykite šaldytuve.

BHI pleištai bakterioteka. Šaltinis: autoriaus nuotr. Magistrantūra. Marielsa Gil.

Plokštės

Ištirpintas mišinys 15 minučių autoklavuojamas 121 ° C temperatūroje, paliekant atvėsti iki 50 ° C, ir 20 ml terpės patiekiama steriliuose Petri induose. Jiems leidžiama sukietėti, jie apverčiami ir laikomi šaldytuve iki naudojimo. Prieš sėjant ledukus leiskite kambario temperatūrai.

Terpės pH turi išlikti 7,4 ± 0,2.

Neapdorota terpė yra smėlio spalvos, o paruošta - šviesiai gintaro spalvos.

Kraujo agaro paruošimas

Sterilizavę terpę, atvėsinkite iki maždaug 45–50 ° C temperatūros, tada įpilkite kraujo (50 ml), atsargiai išmaišykite, kad homogenizuotųsi, ir aseptiškai įpilkite po 20 ml kiekviename Petri inde. Jei lėkštėje susidaro burbuliukai, lengvesnė liepsna turėtų būti greitai praplaukiama virš burbuliukų, kad jie būtų pašalinti.

Taip pat specialią terpę galima paruošti pridedant atitinkamų priedų, kai mišinys pasiekia 45–50 ° C temperatūrą.

Terpė išlieka vyšnios raudonos spalvos.

Programos

Naudokite be papildų

BHI agaras be priedų yra naudingas kaip pagrindinė kultūra ir sėjant grynus mažo ar vidutinio sunkumo mikroorganizmų kamienus, kad vėliau juos būtų galima identifikuoti.

Kadangi tai yra šviesios terpės, ji idealiai tinka stebėti pigmentus ir, kadangi joje nėra trukdančių medžiagų, su ja gali būti atlikti kai kurie biocheminiai tyrimai, pavyzdžiui, oksidazė ir katalazė, arba iš šios kolonijos galima atlikti kitus biocheminius bandymus. agaras.

Taip pat BHI agaro pleištai yra plačiai naudojami tam tikrą laiką palaikant kamienus laboratorijoje (bakterioteka).

Plokštės ar pleištai, apibarstyti paviršiumi su bakterijų padermėmis, inkubuojami 37 ° C temperatūroje nuo 24 iki 48 valandų. Tuo tarpu grybuose temperatūra ir inkubacijos laikas priklausys nuo to, kokio grybelio siekiama.

Kaip bazinis agaras ruošiant kitas terpes

Su šia baze galima paruošti praturtintą ir selektyviąją terpę.

Praturtėjo

Pagrindinė jo funkcija yra naudoti paruošiant kraujo agarą įprastiniam naudojimui mikrobiologijos laboratorijose. Ypač BHI bazė skatina izoliuoti Streptococcus sp. Tačiau jis turi trūkumų, kad nėra tinkamas stebėti hemolizės pokyčius, nes jame yra gliukozės.

Jis taip pat naudojamas ruošiant triušio ar arklio kraujo agarą Haemophilus sp. Norėdami gauti geriausius rezultatus, galite pridėti praturtinimo priedą (IsoVitaleX).

Jei mėginiai yra iš kvėpavimo takų, į agarą galima įpilti bacitracino, kad būtų slopinama lydima flora ir padidėtų Haemophilus sp.

Corynebacterium diphtheriae galima išskirti iš kraujo agaro (ėriuko ar žmogaus) su cistino telluritu. Taip pat naudinga paruošti triušio kraujo agarą, pridedant cistino ir gliukozės, kad būtų galima išskirti Francisella tularensis.

Kraujo agaro plokštelės sėjamos išsekimo būdu ir yra inkubuojamos 35–37 ° C temperatūroje 24–48 valandas mikroaerofiliškumu (5–10% CO ₂ ).

Atrankinis

Ši terpė su pridėtais antibiotikais gali pakeisti Sabouraud agarą grybelių išskyrimui.

BHI agaro derinys su chloramfenikoliu - gentamicinu ar penicilinu -, streptomicinu ir arklio krauju yra idealus Histoplasma capsulatum išskyrimui.

Atsižvelgiant į atskiriamą mikroorganizmą, aerobiozėje rekomenduojama inkubuoti 35–37 ° C arba kambario temperatūroje. Kartais inkubacija yra būtina abiejuose temperatūros diapazonuose, tam naudojant 2 plokšteles.

Kai kurie grybai, tokie kaip Trichophyton mentagrophytes, turi būti inkubuojami kambario temperatūroje iki 7 dienų.

QA

Iš kiekvienos paruoštos partijos rekomenduojama 24 valandas inkubuoti 1 plokštelę ar pleištą 37 ° C temperatūroje ir patikrinti, ar neauga; Tai ypač svarbu ruošiant kraujo agarą, nes tai yra lengvai užteršta terpė.

Kita vertus, terpės kokybę galima įvertinti pasėjant žinomus ar sertifikuotus standartinius štamus ir stebint jų vystymąsi.

Šia prasme norint įvertinti BHI agarą be priedų, galima naudoti Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 arba Candida albicans ATCC 10231 padermes. Jie inkubuojami 37 ° C temperatūroje aerobiozėje nuo 24 iki 48 valandų. Visais atvejais tikimasi patenkinamo augimo.

Kraujo agaro plokštelėms įvertinti galima pasėti Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 arba Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533 padermes.

Bakterijų padermės inkubuojamos 37 ° C temperatūroje mikroaerofiliškumu 24 valandas, o grybelis kambario temperatūroje drėgnoje kameroje inkubuojamas iki 7 dienų. Visais atvejais tikimasi patenkinamo augimo.

Nuorodos

1. „Britannia“ laboratorijos. Smegenų širdies infuzijos agaras. 2015. Galima rasti: britanialab.com.
2. BD laboratorijos. Smegenų širdies infuzija (BHI) Agaras. 2013.Atsiejama: bd.com.
3. Laboratorijos „Difco Francisco Soria Melguizo“, SA „Smegenų širdies infuzijos agaras“. 2009 metai.
4. Neogeno laboratorija. Smegenų širdies infuzijos agaras. Galima rasti svetainėje: foodsafety.neogen.com
5. Gil M. kraujo agaras: pagrindas, panaudojimas ir paruošimas. 2018.Apie prieinamas: lifeder.com.
6. Vikipedijos bendradarbiai. Smegenų širdies infuzija. Vikipedija, nemokama enciklopedija. 2018 rugsėjo 19, 03:58 UTC. Galima rasti: wikipedia.org. Patekta į 2019 m. Kovo 2 d.
7. „Forbes B“, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey ir Scotto mikrobiologinė diagnozė. 12 red. Redakcija Panamericana SA Argentina.