Agaras biggy yra kieta terpė selektyvus ir skirtumas kultūra. Jis buvo skirtas išskirti ir padėti identifikuoti pagrindines Candida rūšis. Jos pavadinimas BIGGY kilęs iš angliško Bismuth Glucose Glycine Yeast santrumpos.
Originalią formulę sukūrė Nickersonas, todėl ši terpė dar vadinama Nickersono agaru. Šiuo metu jį sudaro mielių ekstraktas, glicinas, dekstrozė, amonio citratas, bismuto citratas, natrio sulfitas ir agaras.
Grafinis BIGGY agaro vaizdas. Šaltinis: Flickr.com
BIGGY agaras yra skirtas komplekso C. albicans, C. tropicalis, C. krusei ir C. kefyr rūšims diferencijuoti, tačiau taip pat auga kitos rūšys, tokios kaip Candida glabrata, C. parapsilosis, C. guilliermondii, Trichosporun sp, Geotrichum candidum. ir Saccharomyces cerevisiae.
Jis pasižymi dideliu jautrumu ir specifiškumu, tačiau, palyginti su kitomis terpėmis, turinčiomis panašią funkciją, ji yra antroje vietoje, pranokta „CHROMagar“. Dėl šios priežasties daugelis laboratorijų teikia pirmenybę pastarosioms, nors jos yra daug brangesnės.
Turėtų būti aišku, kad BIGGY agaro, kaip ir kitų panašių priemonių, naudojimas padeda greitai spėjamai nustatyti, bet niekada nepatvirtina. Todėl turi būti prieinami papildomi identifikavimo metodai; pavyzdžiui, „Vitek 32“ ir „API 20“ identifikavimo sistemos.
Pagrindas
„BiGGY“ agaras laikomas iš dalies selektyvia terpe mielių, ypač Candida genties, išskyrimui, nors gali augti kitos gentys.
Tai taip pat diferencinė terpė, nes priklausomai nuo naudojamos rūšies bus pastebimos skirtingos išvaizdos, spalvos, formos ir dydžio savybės. Tai laikoma chromogenine terpe dėl skirtingų spalvų išsivystymo kolonijose.
Mielių kolonijų spalva atsiranda dėl bismuto sulfito agare buvimo. Nickersonas suprato, kad Candida genties mielės tarpląsteliniu būdu sumažina bismuto sulfitą, paverčiant jį bismuto sulfidu (netirpi juodoji medžiaga). Dėl to susidaro šviesiai rudos ar juodos spalvos kolonijos.
Šiame agare yra mielių ekstrakto ir dekstrozės, kurios yra pagrindinių maistinių medžiagų ir energijos šaltinis mielėms vystytis. Glicinas yra mielių augimo stimuliatorius, tuo tarpu jis slopina tam tikrų bakterijų augimą.
Ta pačia prasme amonio ir bismuto citratas, taip pat natrio sulfitas veikia kaip bakterijų augimo inhibitoriai. Agaras yra agentas, kuris suteikia vidutiniškai kietą konsistenciją.
Paruošimas
Pasveriama 45 g dehidratuotos terpės ir ištirpinama litre distiliuoto vandens. Mišinys suplakamas ir kaitinamas, virinant 1 minutę, kol jis visiškai ištirps. Ši terpė nėra autoklavuota.
Atvėsus iki maždaug 45 ° C vandens vonioje, 20 ml supilkite į sterilius Petri lėkšteles.
Dehidratuota terpė yra gelsvai pilka, o paruoštas gelsvai baltas gelis, kuriame galima pastebėti nedidelius flokuojančius nuosėdas.
PH turėtų būti 6,8 ± 0,2.
Paruoštą terpę reikia laikyti šaldytuve (4 ° C) ir apsaugoti nuo šviesos. Kadangi tai terpė, kurios negalima autoklavuoti, ji turėtų būti naudojama kuo greičiau. Jį rekomenduojama vartoti praėjus 3 dienoms po paruošimo.
Naudokite
Plokštelės inkubuojamos kambario temperatūroje (25 ° C) 24, 48 ir 72 valandas, o inkubacijos laikas gali būti pratęstas iki 5 dienų.
Kiekvienai Candida rūšiai būdingos tam tikros savybės, leidžiančios jas atskirti viena nuo kitos. Terpės gamintojai apibūdina šias kiekvienos rūšies savybes:
-Candida albicans kompleksas: ant šio agaro išsivysto kaip lygios, apvalios, rudos ar juodos spalvos kolonijos, turinčios lengvą micelinę sienelę. Išskyrus tai, kad tamsi spalva neišsisklaido į vidurį.
-Candida tropicalis: ryškios, mažos, tamsiai rudos kolonijos su juodu centru ir nedideliu miceliniu kraštu. Tamsi spalva išsisklaido vidurio link - tai būdinga šiai rūšiai po to, kai ji buvo inkubuota 72 valandas.
-Candida krusei išsivysto didelės, plokščios, grubiai atrodančios kolonijos su rudos ar juodos spalvos kraštu.
-Candida parakrusei: vidutinio dydžio kolonijos, dažniausiai šiurkščios, plokščios. Spalva gali skirtis nuo ryškiai tamsiai rausvai rudos iki šviesiai rausvai rudos. Kolonijų krašte yra išsidėstęs gelsvas grybiena.
-Candida stellatoidea: išsivysto vidutinio dydžio, plokščios kolonijos, tamsiai rudos spalvos, beveik juodos. Mycelial vystymasis yra labai menkas.
Yücesoy ir Marol 2003 m. Atliktas tyrimas parodė, kad CHROMagar terpė pasižymi didesniu jautrumu ir specifiškumu skirtingų Candida rūšių diferenciacijai ir identifikavimui nei BIGGY agaras.
QA
Sterilumui kontroliuoti neinokuliuotos plokštelės inkubuojamos 25 ° C temperatūroje, tamsoje nuo 24 iki 48 valandų, tikimasi, kad jos nepadidės ir nepakis.
Terpės kokybės kontrolei rekomenduojamos ATCC atmainos:
Candida albicans ATCC 60193 kompleksas, Candida glabrata ATCC 2001, Candida krusei ATCC 34135. Visose jose tikimasi augimo, kaip aprašyta aukščiau.
Taip pat gali būti naudojamos šios padermės:
Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 ir Staphylococcus epidermidis ATCC 12228. Pirmuosiuose dviejuose numatomas bendras slopinimas, tačiau dalinai augant kolonijos bus kreminės spalvos.
Tikimasi, kad S. aureus bus visiškai slopinamas, tačiau jei jis auga iš dalies, jo kolonijos yra baltos.
Apribojimai
Kai kurios bakterijos gali augti šioje terpėje ir netgi gali tapti tamsios spalvos, imituodamos Candida koloniją, tačiau užuodžiant koloniją ir stebint ją mikroskopu, jos lengvai atsikrato.
Lentelė: Kai kurių mielių kolonijų BIGGY agare charakteristikos pagal Yücesoy M ir Marol S. darbą
Šaltinis: Yücesoy M, Marol S. CHROMAGAR candida ir BIGGY agaro veikimas mielių rūšims nustatyti. Ann Clin mikrobiolio antimikrobas. 2003; 2 (8): 1–7
Nuorodos
- Yücesoy M, Marol S. CHROMAGAR candida ir BIGGY agaro atlikimas mielių rūšims nustatyti. Ann Clin mikrobiolio antimikrobas. 2003; 2 (8): 1–7.
- MCD LAB. Techninių duomenų lapas BIGGY agaras. Galima rasti: mcdlab.net/
- Lab Neogen. BIGGY agaras. Galima rasti svetainėje: foodsafety.neogen.com
- „Conda Pronadisa“ laboratorijos. BIGGY agaras. Galima rasti: condalab.com
- BD laboratorijos. BD BiGGY agaras (bismuto gliukozės glicino mielių agaras). 2011. Prieinamas adresu: bd.com