TULŽIES ESKULINO AGARAS: PAGRINDIMAS, PARUOŠIMAS IR PANAUDOJIMAS - BIOLOGIJA - 2025

Tulžies esculin agaro yra selektyvus ir skirtumas vidutinės kieta kultūra. Jis naudojamas kaip diagnostinis tyrimas, siekiant nustatyti tam tikro mikroorganizmo sugebėjimą augti terpėje, kurioje yra tulžies, taip pat skaidyti gliukozido eskuliną į eskuletiną ir gliukozę.

Šis diagnostinis tyrimas naudojamas atskirti D grupei priklausančias Streptococcus genties rūšis (teigiama tulžies eskulino teigiama) nuo kitų Streptococcus grupių, kurios neigiamai reaguoja į šį testą.

Tulžies eskulino agaro plokštelė, pasėta enterokoko kamienu (testas teigiamas). Šaltinis: nepateiktas mašininio skaitymo autorius. „Philippinjl“ padarė prielaidą (remiantis pretenzijomis dėl autorių teisių).

Reikėtų pažymėti, kad kai kurie viridans grupės streptokokai gali hidrolizuoti eskuliną, tačiau jie nesugeba augti esant tulžiui, kurio koncentracija yra 40%, todėl šioje terpėje šios grupės reakcija yra neigiama.

Kita vertus, tulžies esculino terpė taip pat naudinga diagnozuoti Listeria monocytogenes arba Aerococcus sp rūšis, nes šie mikroorganizmai teigiamai veikia tulžies esculiną.

Esculin tulžies agarą sudaro peptonas, mėsos ekstraktas, jautienos tulžis, esculinas, geležies citratas, agaras ir distiliuotas vanduo. Kai kuriuose komerciniuose namuose terpės sudėtyje yra natrio azido.

Terpę galima paruošti laboratorijoje, jei visus junginius turite atskirai, arba ją galite paruošti iš komercinės dehidratuotos terpės.

Pagrindas

Tulžies esculino terpėje yra peptonų ir mėsos ekstrakto. Abu junginiai teikia būtinas maistines medžiagas mikroorganizmams augti.

Jame taip pat yra eskulino; Šis junginys yra glikozidas, susidarantis sujungus paprastą monosacharidą (gliukozę) su junginiu, vadinamu 6,7-dihidroksikumarinu arba eskuletinu (aglukonu), sujungtu acetaliniu arba gliukozidiniu ryšiu.

Testas grindžiamas įrodymu, ar bakterijos yra pajėgios hidrolizuoti eskuliną. Jei taip atsitinka, eskulinas suskaidomas į eskuletiną ir gliukozę. Esculetina reaguoja su terpėje esančia geležimi ir sudaro tamsiai rudą, beveik juodą junginį.

Tai reiškia, kad geležies citratas veikia kaip reakcijos vystytojas. Dėl šios savybės tulžies esculin agaras yra diferencinė terpė.

Savo ruožtu tulžis yra inhibitorius, neleidžiantis augti kai kuriems mikroorganizmams, todėl bakterija, prieš skaidydama eskuliną, turi sugebėti augti esant tulžiui. Todėl ši terpė laikoma selektyvia.

Šioje aplinkoje gali vystytis bakterijos, daugiausia esančios žarnyno aplinkoje.

Šia prasme kai kurios komercinės kompanijos prideda natrio azido į terpę, kad dar labiau sustabdytų žarninių gramneigiamų bakterijų augimą, padidindamos terpės selektyvumą Streptococcus augimui.

Galiausiai agaras terpėje suteikia kietą konsistenciją, o vanduo yra junginių tirpiklis.

Paruošimas

Tulžies eskulino agaro paruošimas namuose

Sverti:

5 g peptonų

3 g mėsos ekstrakto

40 g jautienos tulžies

1 g eskulino

0,5 g geležies citrato

15 g agaro

1000 ml distiliuoto vandens

Įpilant natrio azido, pasveriama 0,25 g / l ir pridedama prie mišinio.

Ištirpinkite komponentus litre distiliuoto vandens, kaitinkite, kol junginiai visiškai ištirps. Paskirstykite 5 ml į 16 x 125 mm užsukamo dangtelio mėgintuvėlius. Autoklavas 15 minučių esant 15 ° C, 15 svarų slėgiui.

Išimkite iš autoklavo ir pakreipkite mėgintuvėlius ant atramos, kad agaras sukietėtų plačiame fleitos snape.

Iki vartojimo laikyti šaldytuve. Prieš sėją, palaikykite kambario temperatūrą.

Taip pat galima paruošti tulžies eskulino agaro plokšteles; tokiu atveju visas mišinys autoklavuojamas kolboje ir vėliau paskirstomas steriliuose Petri induose. Leiskite jiems sukietėti ir laikykite šaldytuve.

Terpės pH turi būti 6,6 ± 0,2.

Tulžies esculino agaro paruošimas iš komercinės terpės

Pasverkite įdėklo nurodytą kiekį. Tai gali skirtis skirtinguose verslo namuose. Vėliau atlikite tai, kas aprašyta aukščiau.

Terpės pH turėtų būti 6,6 ± 0,2. Dehidratuota terpė yra šviesiai smėlio spalvos, o paruošta terpė - tamsiai gintaro spalvos.

Komercinė tulžies eskulino terpė. Šaltinis: autoriaus nuotr. Magistrantūra. Marielsa Gil.

Programos

Tulžies esculino terpė daugiausia naudojama D grupės streptokokui (tulžies eskulino teigiamame) atskirti nuo likusių Streptococcus grupių (tulžies eskulino neigiama).

Derinant hipersalto sultinio augimo testą su tulžies esculino tyrimu, galima nustatyti specialią D grupės streptokokų grupę, vadinamą Enterococcus.

Ši ypatinga Streptococcus grupė priklauso minėtos genties D grupei ir jie, kaip ir kiti D grupės nariai, gali hidrolizuoti esculiną esant tulžiui, tačiau jie taip pat geba vystytis hipersaltintoje terpėje (BHI su chloridu 6,5% natrio) savybė, kuri daro įtaką.

Todėl streptokokai, kurie hidrolizuoja esculin tulžį, bet neauga hipersaltintame sultinyje, yra vadinami ne enterokokais D grupės streptokokai.

Sėjama

Geriausiai terpę užpilkite terpe iš gryno Todd-Hewitt sultinio.

Įlašinkite 2 lašus į terpės paviršių „Pasteur“ pipete ir paskleiskite terpėje platinos kilpa.

Inkubuokite 35 ° C temperatūroje 48 valandas, kol inkubacijos laikas pasibaigė. Galima stebėti, ar nėra teigiamos reakcijos. Jei pasibaigus laikui reakcija išlieka neigiama, ją galima inkubuoti iki 72 valandų.

Interpretacija

Teigiama reakcija : tamsiai rudos, beveik juodos spalvos fleitos snapo išvaizda (mėgintuvėlio mėgintuvėlio atveju) arba agaro juodinimas aplink kolonijas (plokštelės bandymo atveju).

Neigiama reakcija : terpė nejuodinama arba mažiau nei pusėje mėgintuvėlio po 72 inkubavimo valandų būna juoda spalva. Kita vertus, bakterijų augimas terpėje, neatsirandant juodai spalvai, turėtų būti laikomas neigiamu bandymu.

QA

Norint įvertinti terpės kokybę, reikia turėti Enterococcus faecalis ATCC 29212 padermę kaip teigiamą kontrolę, o Streptococcus padermę, nepriklausančią D grupei, kaip neigiamą kontrolę.

Apribojimai

- Medžiagos, kurių sudėtyje nėra natrio azido, leidžia augti žarnyne esančioms gramneigiamoms bakterijoms. Kai kurie iš jų gali pajuodinti vidurį.

- Kai kuriuose komerciniuose namuose yra nedidelė tulžies koncentracija (10%) ir dėl šios priežasties kai kurie D grupei nepriklausantys streptokokai gali išsivystyti terpėje ir hidrolizuoti eskuliną, o tai gali sukelti interpretavimo klaidų.

Nuorodos

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinė diagnostika. 5-asis leidimas Redakcija Panamericana SA Argentina.
2. „Forbes B“, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey ir Scotto mikrobiologinė diagnozė. 12 red. Redakcija Panamericana SA Argentina.
3. Macas Faddinas J. (2003). Biocheminiai tyrimai klinikinės svarbos bakterijoms nustatyti. 3-asis leidimas Redakcija Panamericana. Buenos Airės. Argentina.
4. Lab. Britannia. Esculino tulžis su azido agaru. 2015.Atsiejama: britanialab.com
5. "Tulžies esculino agaras". Vikipedija, nemokama enciklopedija. 2017 Rugpjūčio 22, 17:30 UTC. 2019 m. Balandžio 22 d., 17:35 val. es.wikipedia.org.
6. „Laboratorios Bd. 2015.Atsiejama: bd.com
7. Neogenų laboratorijos. Tulžies eskulino agaras. Galima rasti svetainėje: foodsafety.neogen.com