Cetrimidas agaro arba cetrimidas yra selektyvus kieta kultūros terpė skirta nuo Pseudomonas aeruginosa izoliacijos. Jis pagrįstas parodant būdingų šios rūšies pigmentų gamybą ir buvo pagamintas modifikavus Tech agarą, kurį sukūrė Kingas, Ward ir Raney.
Originalioje formulėje buvo magnio chlorido, kalio sulfato druskos, kasos skaidomas želatina ir agaro agaras. Formulės modifikavimas susideda iš cetrimido (cetil-trimetil-amonio bromido) ir glicerolio pridėjimo.
Cetrimido agaras su Pseudomonas aeruginosa sėkla Šaltinis: „BiotechMichael“, iš „Wikimedia Commons“
Cetrimido agaras yra naudingas mėginių mikrobiologiniams tyrimams, kai įtariama Pseudomonas aeruginosa buvimas. Reikėtų pažymėti, kad ši bakterija yra nepaprastai svarbi, nes, nors ji yra normalios aplinkos mikrobiotos dalis, ji dažnai elgiasi kaip oportunistinis patogenas.
Dėl šios priežasties viena iš labiausiai paplitusių šio gemalo sukeliamų problemų yra nosokominės infekcijos, tai yra tos, kurios atsiranda ligoninės aplinkoje, puola pacientus, kurių imuninė sistema yra prislėgta.
Kita vertus, dėl afiniteto, kurį šis mikroorganizmas turi drėgmės, pažeidžiamiausi užteršimo tikslai yra šie: kvėpavimo pagalbinės priemonės, vaistai, purkštuvai, vandens šaltiniai, oro kondicionieriai, dezinfekavimo priemonės, muilo tirpalai, injekciniai tirpalai, atviros žaizdos , kateteriai, šlapimo vamzdeliai, be kita ko.
Šia prasme cetrimido agaras yra naudingas atliekant mikrobiologinę kontrolę ir auginant anksčiau minėtus elementus.
Pagrindas
Cetrimido agaras pagrįstas terpės gebėjimu skatinti P. aeruginosa augimą, skatinti jo pigmentų gamybą ir, savo ruožtu, slopinti kitų mikroorganizmų augimą.
Šios savybės atsiranda dėl kiekvieno jo komponento funkcijos. Esantis želatininis peptonas yra azoto, vitaminų ir mineralų šaltinis. Glicerolis arba glicerinas veikia kaip anglies šaltinis.
Savo ruožtu, cetrimidas (cetil-trimetil-amonio bromidas) yra medžiaga, slopinanti kitų nei P. aeruginosa bakterijų, įskaitant kitas rūšis, priklausančias tai pačiai genčiai, augimą.
Inhibicija atsiranda todėl, kad cetramidas veikia kaip katijoninis ploviklis, destabilizuojantis daugelio bakterijų, išskyrus P. aeruginosa ir kai kurias kitas, bakterijas, galinčias išgyventi, plazminę membraną.
Kita vertus, jame yra magnio chlorido ir kalio sulfato. Šie junginiai stimuliuoja fenotipinę raišką, susijusią su Pseudomonas aeruginosa gebėjimu gaminti įvairius pigmentus, įskaitant: pyocyanin, pyoverdin, pyorrubin, pyomelanin ir fluorescein. Galiausiai jame yra agaro-agaro, kuris suteikia jam vientisą konsistenciją.
Interpretacija
Šiame agare gautas augimas aiškinamas taip:
Stebint apvalias, lygias kolonijas su taisyklingais kraštais, gaminant melsvai žalsvus, žalius, rudus ar rausvus pigmentus, pridedant vaisių kvapo (aminoacetofenonas), galima numanyti dėl šios bakterijos buvimo minėtame pavyzdyje.
Kita vertus, pastebimas ryškiai žalsvai geltonas pigmentas kolonijose rodo P. aeruginosa, kai plokštelė yra veikiama ultravioletinės šviesos.
P. aeruginosa kolonijų fluorescencija cetrimido agare ultravioletinėje šviesoje.
Reikėtų pažymėti, kad kiekviena pastebėta spalva atsiranda dėl specifinio pigmento gamybos. Mėlynai žalias pigmentas atitinka piocianino, žalias - pyoverdin, raudonai - pyorubin, rudas - pyomelanine, o ryškiai geltonai žalia fluorescencija ultravioletinėje šviesoje virsta fluoresceinu.
Paruošimas
Pasverkite 43 g dehidratuotos terpės ir ištirpinkite distiliuotame vandenyje. Įpilkite 10 ml glicerolio. Nukelkite mišinį į šilumos šaltinį. Leiskite virti keletą minučių, kol visiškai ištirps.
Autoklavas 15 minučių 121 ° C temperatūroje. Leiskite pastovėti ir patiekite steriliuose Petri induose, kai temperatūra yra apie 50 ° C.
Leiskite sukietėti, apverskite, sudėkite į plakiklius ir iki naudojimo laikykite šaldytuve. Cetrimido agaro lėkšteles prieš sėjant reikia išimti iš šaldytuvo ir leisti įkaisti iki kambario temperatūros.
Galutinis terpės pH turėtų būti 7,2 ± 0,2.
Dehidratuota terpė yra smėlio spalvos, o preparatas yra nepermatomas baltas.
Programos
Cetrimido agare galima sėti visų rūšių mėginius, kuriuose įtariama, kad yra Pseudomonas aeruginosa. Todėl jis yra naudingas visose mikrobiologijos srityse (aplinkos, pramonės, klinikinėse, vandens ir maisto srityse).
Labai svarbu išanalizuoti ligoninių aplinką ir tokiu būdu sugebėti taikyti korekcines priemones, nes šis mikroorganizmas pasiekia pacientus per užterštą įrangą, vaistus, tirpalus ir reikmenis, kuriuos pacientas naudoja.
Tokiu būdu mikroorganizmas gali užkrėsti imuninę sistemą slopinančių pacientų apatinius kvėpavimo takus, šlapimo takus ir žaizdas.
P. aeruginosa kolonijas taip pat galima apskaičiuoti atliekant mikrobų ribinius tyrimus.
Sėjama
Cetrimido agaras gali būti naudojamas kaip pagrindinė kultūra. Plokštelė yra pasėjama ant vieno iš jos kraštų, o iš ten ji išpūtimo būdu paskirstoma likusiai plokštelės daliai. Skystus mėginius galima pasėti paviršiumi drigalski mentele.
Plokštės inkubuojamos aerobiškai 37 ° C temperatūroje 24 valandas.
Apribojimai
- Mažas procentas Pseudomonas aeruginosas padermių negamina piocianino, todėl klaidingą neigiamą galima suprasti.
- Šioje terpėje slopinamos kai kurios kliniškai svarbios Pseudomonas rūšys.
- Nepaisant Pseudomonas aeruginosa aprašytų charakteristikų, jos turi būti patvirtintos papildomais identifikavimo bandymais. Testas, kurio negalima praleisti, yra oksidazės testas, jis turi būti teigiamas.
- Kai kurios enterobakterijos gali augti šioje terpėje ir išsivystyti geltonas pigmentas, tačiau jis skiriasi nuo Pseudomonas aeruginosa tuo, kad kai plokštelė yra veikiama ultravioletinės šviesos, joje nėra fluorescencijos.
- Serratia marcescens sugeba išsivystyti ir gamina rausvą pigmentą.
-Jei plokštelės, kuriose sėjamas cetrimido agaras, tam tikrą laiką veikiamos kambario temperatūroje, P. aeruginosa padermės gali prarasti ultravioletinėje šviesoje stebimą fluorescenciją, tačiau nuosavybė atgaunama, jei jos vėl inkubuojamos 37 ° C temperatūroje.
QA
Geram cetrimido agaro veiksmingumui analizuoti gali būti naudojamos kontrolinės padermės, tokios kaip: Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Stenotrophomonas maltophilia ATCC 13637, Escherichia coli ATCC 25922 ir Staphylococcus aureus ATCC 25923.
Laukiami rezultatai:
- Gerai auga P. aeruginosa, turi mėlynai žalią pigmentą ir teigiamą fluoresceiną.
- S. maltophilia ir S. aureus bus iš dalies ar visiškai slopinami.
- Manoma, kad Escherichia coli bus visiškai slopinamas.
Nuorodos
- Callicó A, Cedré B, Sifontes S, Torres V, Pino Y, Callís A, Esnard S. Pseudomonas aeruginosa klinikinių izoliatų fenotipinis ir serologinis apibūdinimas. „VacciMonitor“. 2004; 13 (3): 1-9.
- „Conda Pronadisa“ laboratorijos. Cetrimido agaro pagrindas. 2014. Prieinamas adresu: condalab.com
- „Britannia“ laboratorijos. Cetrimido agaras. 2015.Atsiejama: britanialab.com
- BD laboratorijos. BD Pseudosel agaras (Cetrimido agaras). 2013.Atsiejama: bd.com
- Francisco Soria Melguizo laboratorija, CA, Cetrimido agaras. 2009.Atsiejama: http://f-soria.es