ŠOKOLADO AGARAS: PAGRINDAS, NAUDOJIMO BŪDAI IR PARUOŠIMAS - BIOLOGIJA - 2025

Šokolado agaras yra kietas kultūros terpė, praturtintas, ne - selektyvus ir ne - skirtumas. Jis daugiausia naudojamas mikroorganizmų, reikalaujančių mitybos požiūriu, išskyrimui, nors jame gali augti bet kokios rūšies bakterijos.

Dėl šios priežasties jo naudingumas ypač padidėja sėjant paprastai sterilius mėginius, tokius kaip CSF ir sąnarių skystis. Nors jis taip pat yra įtrauktas į pasirinktą polimikrobinių mėginių sėjos būdą, tačiau šiais atvejais būtina pridėti antibiotikų, kurie slopina gretutinę florą.

Šokoladinis agaras su bakterijų dauginimu

Ši terpė turi būdingą rudą spalvą, labai panašią į šokoladą, taigi ir jos pavadinimas. Preparatas labai panašus į kraujo agaro, tik tokiu atveju kraujas turi būti pašildomas, kad raudonieji kraujo kūneliai suskaidytų.

Jo paruošimas, kaip ir kraujo agaras, yra labai subtilus, nes lengvai užteršiamas. Dėl šios priežasties daugelis laboratorijų nori įsigyti šią terpę, kurią jau paruošė komercinės kompanijos ir garantuoja jos kokybę.

Pagrindas

Ši terpė susideda iš maistinių medžiagų turinčio agaro pagrindo ir pašildyto kraujo. Raudonųjų kraujo kūnelių hemolizė suteikia X faktorių (heminą) ir V faktorių (NAD), reikalingus kai kuriems mikroorganizmams, pavyzdžiui, Haemophilus genčiai, augti. Tai taip pat labai naudinga išskirti Neisserias sp.

Kaip kraujo agaras, priklausomai nuo poreikio, kaip bazinis agaras gali būti naudojamos įvairios terpės. Tarp naudojamų terpių yra smegenų širdies infuzija ir triptazės sojos agaras, nors labiausiai rekomenduojami yra Kolumbijos agaras, Müeller Hinton, GC agaras ir Thayer Martin agaras.

Kai kuriuose šokolado agaro variantuose yra parduodamas spirituotas papildas, vadinamas Isovitalex arba Polivitex.

Šiuose papilduose yra vitamino B ₁₂ , L-glutamino, adenino, guanino hidrochlorido, p-aminobenzoinės rūgšties, nikotinamido adenino dinukleotido (NAD), tiamino pirofosfato, geležies nitrato, tiamino hidrochlorido, cisteino hidrochlorido, L-cistino ir gliukozės.

Svarbu atkreipti dėmesį, kad šokolado agaras yra labiau praturtintas nei kraujo agaras, tačiau tai neleidžia stebėti hemolizės modelių.

Programos

Šaltinis: pixnio.com. Autorius:
Pete Seidel, Amanda Moore, MT, Todd Parker, PhD, Audra Marsh, USCDCP

Šokoladinis agaras paruoštas su Kolumbijos agaru

Šioje terpėje yra kasos kazeino ir širdies virškinimas, pepsinis mėsos virškinimas, natrio chloridas, agaras, mielių ekstraktas ir kukurūzų krakmolas. Jame taip pat gausu vitaminų, mineralų ir nepakeičiamų amino rūgščių.

Ši šildoma kraujo bazė yra ideali Neisseria genties bakterijų išskyrimui. Kita vertus, jei į terpę papildomai pridedamas papildas Brucella, minėtas mikroorganizmas gali būti išskirtas. Rezultatai pagerinami naudojant arklio kraują.

Šokoladinis agaras, paruoštas su GC baziniu agaru (gonokokams)

Šioje terpėje yra peptonų, kukurūzų krakmolo, vienbazių ir dvibalių buferių, natrio chlorido ir agaro.

Dauguma komerciškai paruoštų šokolado agaro patiekalų yra su šia baze ir juose nėra šildomo kraujo, o greičiau sintetinis hemino mišinys ir augimo faktorių, vitaminų, mineralų, amino rūgščių, V faktoriaus ir gliukozės cheminis papildas.

Šokoladinis agaras paruoštas su Müeller Hinton agaru

Jis naudojamas tirpių mikroorganizmų, tokių kaip Streptococcus pneumoniae, antimikrobiniam jautrumui tirti naudojant 5% pašildyto avių kraujo.

Jis taip pat naudojamas pirminiam Neisserias ir Haemophilus išskyrimui, tačiau konkrečiu atveju Haemophilus išskyrimui pirmenybė teikiama arklio kraujui, nes tai yra gausus X ir V faktorių šaltinis.

Kita vertus, jei sėjamas mėginys yra iš nesterilo ploto, rekomenduojama pridėti antibiotikų, kad būtų užkirstas kelias normaliai augmenijos plotui.

Kvėpavimo organų mėginių, kuriuose įtariamos Haemophilus genties bakterijos, pavyzdys, bacitracinas yra naudojamas Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus ir saprofitinių Neisserias augimui slopinti.

Lytinių organų šankų mėginiuose, kai įtariama, kad Haemophilus ducreyi buvo sėkmingai naudojamas šokolado agaras, paruoštas taip: Müeller - Hinton agaras su 5% šokoladuoto arklio kraujo, 1% sodrinimas Isovitalex ir 3 μg / ml vankomicino.

Šokolado agaras paruoštas su Thayer Martin agaru

Ši terpė yra ypatinga Neisseria gonorrhoeae izoliacijai. Jame turi būti antibiotikų, slopinančių lydinčią florą. Naudojamas ėriuko kraujas.

Paruošimas

Turėtumėte pamatyti nurodymus, kaip paruošti bazinį agarą. Jie randami dehidratuotos terpės talpyklos gale. Jie paprastai apibūdina, kiek turite sverti paruošti litrą kultūrinės terpės.

Tikslų reikiamą kiekį galima paruošti laboratorijoje, jo gali būti daugiau ar mažiau nei litras.

Skaičiavimai

Norint apskaičiuoti, kiek sverti norint paruošti norimą tūrį, naudojama taisyklė trys. Pavyzdys:

Jei 1 litrui reikia sverti 40 gr, o laboratorijai reikia 800 ml, sakoma:

1000 ml ----------- 40 gr

800 ml -----------– X

Formulė bus tokia:

X = 32 gr (kiekis, kurį reikia pasverti 800 ml).

Pasverkite ir ištirpinkite

Reikiamas kiekis pasveriamas ir supilamas į kolbą su vandeniu.

Kaitinkite ant vidutinio stiprumo ugnies ir švelniai maišykite sukamaisiais judesiais, kol dehidratuota terpė visiškai ištirps ir leis jai virti 1 minutę.

Sterilizuokite

Kolba dedama į autoklavą, kad terpė 20 minučių būtų sterilizuojama 121 ° C temperatūroje.

Kraujo agregatas

Išėmus iš autoklavo, jam leidžiama pastovėti, kol terpės temperatūra bus maždaug tarp 56 ir 70 ° C, kad įpiltų kraujo, ir maišyti, kol terpė pasidaro ruda.

Jei pridedate papildų, atėjo laikas tai padaryti. Vėliau sumaišykite ir įpilkite 20 ml į kiekvieną sterilų Petri indą.

Visa procedūra turėtų būti atliekama laminaraus srauto gaubte arba aplink Bunseno degiklį.

Leiskite pastovėti, kol jie sukietės, ir laikykite apverstą šaldytuve.

Kitas būdas paruošti šokoladinį agarą nenaudojant kraujo

Pagrindinė terpė paruošiama taip, kaip aprašyta aukščiau, komerciškai gautas dehidratuotas hemoglobinas ištirpinamas ir sterilizuojamas autoklave.

Abiems tirpalams leidžiama atvėsti iki 50 ° C, jie sujungiami ir pridedamas priedas. Maišykite aseptinėmis sąlygomis ir patiekite steriliuose Petri induose.

QA

Svarbu, kad kraujas būtų pateiktas nurodytoje temperatūroje, nes jis yra idealiausias, kad būtų galima lizuoti raudonuosius kraujo kūnelius ir tuo pačiu palaikyti šilumą jautrų V faktorių.

Agaro paviršiuje neturi likti burbuliukų. Iš kiekvienos 100 plokštelių partijos vieną ar dvi plokšteles reikia inkubuoti orkaitėje 37 ° C temperatūroje 24 valandas, kad būtų patikrintas jų sterilumas.

Norint gauti geriausius rezultatus, šokolado agarą reikia naudoti netrukus po paruošimo.

Kontrolinės bakterijų padermės turėtų būti laikomos laboratorijoje, kad būtų įvertintas šviežios terpės veiksmingumas pagrindinių klinikinės svarbos išrankiems mikroorganizmams.

Nuorodos

1. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktinė klinikinė mikrobiologija. Kadiso universitetas, 2-asis leidimas. UCA leidinių tarnyba.
2. „Forbes B“, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey ir Scotto mikrobiologinė diagnozė. 12 red. Argentina. „Panamericana SA“ redakcija
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinė diagnostika. (5-asis leidimas). Argentina, „Panamericana SA“ redakcija
4. Llanes R, Reyes A, Rodríguez C, Guzmán D, Llop A. GC-Biocen Agar bazinės kultūros terpės panaudojimo mikrobiologijos laboratorijoje galimybė. „Cubana Med Trop“, 2004; 56 (3): 237-238. Galima rasti: scielo.sld.
5. Vikipedijos bendradarbiai. Šokoladinis agaras. Vikipedija, nemokama enciklopedija. 2018 m. Gruodžio 17 d., 19:54 UTC. Galima rasti: en.wikipedia.org.