CLED AGARAS: PAGRINDIMAS, PANAUDOJIMAS IR PARUOŠIMAS - BIOLOGIJA - 2025

CLED agaro (Cistinas-Laktozės-elektrolitų-Nepakankamas) yra kietoji kultūros terpė skirtumas, diagnostikai naudojami šlapimo takų infekcijų. Kultūrinės terpės sudėtis yra skirta šlapimo ligų sukėlėjams augti ir yra ideali kolonijas sudarančių vienetų (CFU) kiekybiniam įvertinimui.

CLED kultūrinė terpė nėra selektyvi, nes joje gali augti gramneigiami ir gramteigiami mikroorganizmai. Bet tai nėra problema, nes daugumą UTI sukelia tik vieno tipo mikroorganizmai.

CLED agaras

Polimikrobinėmis infekcijomis galite užsikrėsti 2 ar 3 skirtingas bakterijas, tačiau tai labai reta atvejis ir dažniausiai tai yra užteršti mėginiai.

Tarp gramneigiamų bakterijų, kurios gali augti šioje terpėje, yra bakterijos, priklausančios Enterobacteriaceae šeimai, ir kitos žarnyno žarnyno bakterijos, kurių šlapimo mėginiuose dažniausiai išskiriami uropatogenai: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Morganella morganii, Pseudomonas aeruginosa, be kita ko.

Tarp gramneigiamų bakterijų, kurios gali augti šioje terpėje, taip pat yra Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium sp, Lactobacillus sp ir netgi mielės, pavyzdžiui, Candida albicans kompleksas.

Tačiau dėl terpės cheminės sudėties ji neleidžia augti kai kuriems reikliems Urogenitalinės sistemos patogenams, tokiems kaip Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis.

CLED agaro loginis pagrindas

CLED mitybinėje terpėje kaip energijos šaltinis yra mėsos ekstraktas, kazeino kasos hidrolizatas ir želatinos hidrolizatas. Jie suteikia maistinių medžiagų nereikalingoms bakterijoms vystytis.

Jame taip pat yra cistino - aminorūgšties, leidžiančios augti koliformoms, išsiskiriančioms dėl jų mažo dydžio.

Taip pat laktozė yra fermentuojamas angliavandenis, dėl šios priežasties ši terpė yra skirtinga; gebėjimas atskirti fermentuojančias bakterijas nuo fermentuojančios ne laktozės.

Fermentuojančios bakterijos sukelia terpės pH pokyčius dėl rūgščių susidarymo, išsivysto geltonosios kolonijos, tuo tarpu nefermentuojančios bakterijos terpėje pokyčių nesukelia, todėl jos įgauna pirminio agaro spalvą - žalią.

Fermentacijos reakcija paaiškėja dėl to, kad yra pH indikatorius, kuris šioje terpėje yra bromtimolio mėlynas.

Kita vertus, maža terpės elektrolitų koncentracija slopina tipišką invazinį Proteus genties augimą, vadinamą spiečiaus efektu. Tai sukuria pranašumą, palyginti su kitomis terpėmis, nes leidžia suskaičiuoti CFU, net jei yra Proteus gentis.

Tačiau maža elektrolitų koncentracija slopina kai kurių Šigella genties rūšių augimą, o tai, palyginti su kitomis terpėmis, yra trūkumas.

CLED agaro (Bevis) pagrindas

Yra šios terpės variantas ar modifikacija, kurią padarė Bevisas, kuris į pradinę kompoziciją įtraukė rūgštųjį fuksiną (Andrade's indikatorius). Jis veikia kartu su bromtimolio mėlyna, kad atskirtų fermentaciją nuo nefermentuojančių bakterijų.

Skirtumas tarp įprastos ir modifikuotos terpės yra spalva, kurią įgauna kolonijos. Laktozę fermentuojančių bakterijų atveju kolonijos pasidaro rausvai oranžinės su rausva arba raudona halogena, o nefermentuojančios yra melsvai pilkos.

Programos

CLED agaras naudojamas tik šlapimo mėginiams sėti. Ši terpė ypač dažnai naudojama Europos laboratorijose, tuo tarpu Amerikoje ji naudojama mažiau.

Mėginių rinkimas turi atitikti tam tikrus parametrus, kad būtų gauti patikimi rezultatai, įskaitant:

• Prieš imdami mėginius, nevartokite antibiotikų.
• Geriausia, kai šlapimas imamas ryte, nes jis yra labiau koncentruotas, kai neįmanoma paimti mėginio invaziniais metodais.
• Prieš imdami mėginį, gerai nuplaukite lytinius organus.
• Išmeskite pirmąjį šlapinimosi srautą ir padėkite indą.
• Surinkite 25–30 ml šlapimo į gerai paženklintą sterilų indą.
• Nedelsdami nuvežkite į laboratoriją, apsuptą ledo.
• Jis turi būti apdorotas per 2 valandas nuo išleidimo arba ne ilgiau kaip 24 valandas šaldytas 4 ° C temperatūroje.

Sėjimo šlapimo mėginiai

Šlapimo mėginys turėtų būti praskiedžiamas santykiu 1:50.

Praskiedimui įpilkite 0,5 ml paciento šlapimo ir praskieskite 24,5 ml steriliu fiziologiniu tirpalu.

Išmatuokite 0,1 ml praskiesto šlapimo ir paviršių paskleiskite drigalski mentele ant CLED terpės. Tai yra geriausias sėjimo būdas kolonijoms suskaičiuoti. Dėl šios priežasties jis naudojamas šlapimo mėginiuose, nes rezultatai turi būti išreikšti KSV / ml.

Norėdami kiekybiškai įvertinti gautas kolonijas, atlikite šiuos veiksmus: suskaičiuokite kolonijas ant plokštelės ir padauginkite iš 10, tada iš 50. Tai gausite šlapimo CFU / ml kiekį.

Interpretacija

Kiekis viršija 100 000 CFU / ml - rodo šlapimo infekciją

Skaičiuoja mažiau kaip 1000 KSV / ml - nėra infekcijos

Skaičiuojama tarp 1000–10 000 CFU / ml –– Abejotinas, galimas užteršimas, pakartokite mėginių ėmimą.

ID

CLED agare užaugintos kolonijos turėtų turėti gramą ir, atsižvelgiant į mikroorganizmo morfotintorines savybes, atliekama tam tikra subkultūra.

Pvz., Jei tai yra gramneigiamas bacilis, jis bus sėjamas į MacConkey agarą, kuriame patvirtinama laktozės fermentacija arba ne. Be to, oksidazės bandymui pridedamas maistinis agaras.

Jei gramas atskleidžia gramteigiamus kokcius, juos galima subkultūruoti sūriame manitolio agare ir maistiniame agare. Pastarojoje atliekamas katalazės tyrimas. Galiausiai, jei pastebimos mielės, jos bus sėjamos į Sabouraudo agarą.

Daugelis laboratorijų vengia naudoti CLED terpę ir šlapimo mėginiams renkasi tik kraujo agarą, „MacConkey“ ir maistinį agarą.

Paruošimas

Kolboje su vienu litru distiliuoto vandens ištirpinama 36,2 g CLED agaro miltelių. Po 5 minučių stovėjimo įkaitinkite pakartotinai suspenduotą agarą, nuolat maišydami virkite 1 minutę.

Tada 15 minučių sterilizuokite autoklave 121 ° C temperatūroje. Pasibaigus laikui, jis pašalinamas iš autoklavo ir leidžiamas atvėsti iki 45 ° C temperatūros. Vėliau kiekviename steriliame Petri inde yra 15-20 ml.

Plokštelių patiekimo procedūra turi būti atliekama laminaraus srauto gaubto viduje arba priešais Bunseno degiklį, kad būtų išvengta užteršimo.

Pateiktos plokštelės paliekamos sukietėti, sudedamos į apverstą stovą ir iki naudojimo laikomos šaldytuve (2–8 ° C).

Galutinis paruoštos terpės pH turėtų būti 7,3 ± 0,2.

Nuorodos

1. Šlapimo infekcijos mikrobiologinės diagnozės rekomendacijos. chil. infektolas. 2001; 18 (1): 57–63. Galima rasti: scielo.org.
2. Panchi J. Mikrobiologinio agento, sukeliančio šlapimo takų infekcijas, identifikavimas pacientams, kuriems atliekamas šlapimo pūslės kateterizavimas. 2016 m. Bakalauro darbas siekiant įgyti klinikinės laboratorijos bakalauro laipsnį. Ambato technikos universitetas. Ekvadoras.
3. „Britannia“ laboratorijos. CLED terpė. Galima rasti: britanialab.com.
4. „Renylab“ laboratorijos. Naudojimo instrukcijos, CLED agaras. 2013 m. Galima rasti: es.renylab.ind.br.
5. Kultūros laboratorijos. Pagrindinis mikrobiologijos vadovas. Galima rasti: ictsl.net.
6. Muñoz P, Cercenado E, Rodríguez-Créixems M, Díaz MD, Vicente T, Bouza E. CLED agaro galimybė šlapimo kultūros rutinoje. Perspektyvus ir palyginamasis vertinimas. Diagnostinis mikrobiolio užkrėtimo dis. 1992; 15 (4): 287–90.
7. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktinė klinikinė mikrobiologija. Kadiso universitetas, 2-asis leidimas. UCA leidinių tarnyba.