CZAPEK AGARAS: PAGRINDIMAS, PARUOŠIMAS, PANAUDOJIMAS IR APRIBOJIMAI - BIOLOGIJA - 2025

Czapek (CZA) yra selektyvus kieta terpė, specialiai skirtą naudoti auga Saprofitinė bakterijos ir grybeliai. Jį sukūrė lenkų kilmės botanikas Friedrichas Johanas Franzas Czapekas ir Amerikos chemikas Arthur Wayland Dox; dėl šios priežasties šis agaras taip pat žinomas kaip Czapek-Dox terpė.

Pradinė terpė buvo skysta, tačiau vėliau buvo pridėta agaro, kad ji taptų kieta terpe. „Czapek“ terpę sudaro natrio nitratas, bikalio fosfatas, magnio sulfatas, kalio chloridas, geležies sulfatas, sacharozė, agaras ir distiliuotas vanduo.

Czapego agaras A. Aspergillus parasiticus B. Aspergillus fumigatus Šaltinis: A. Medmyco / B. Nuotrauka: Dr. Davidas Midgley. Vikipedija.com

Czapek agaro pH yra 7,3, tačiau yra variantas, į kurį pridedama 10% pieno rūgšties, kurios pH išlieka 3,5. Ši rūgštinė terpė naudojama acidofilinių mikroorganizmų auginimui.

Kita vertus, kai kurie komerciniai namai pakeitė Czapek agaro sudėtį, pakeisdami magnio sulfatu ir bikalio fosfatu glicerofosfatu; šis pakeitimas neleidžia susidaryti magnio fosfato nuosėdoms, stebimoms naudojant įprastą formulę. Panašiai yra ir kitas variantas, į kurį pridedama mielių ekstrakto.

Galiausiai Czapek agarą rekomenduoja Amerikos visuomenės sveikatos asociacija APHA tiriant Actinomycetes sp, Aspergillus sp, Paecilomyces sp ir Penicillium sp. Šioms rūšims būdingi aplinkos mikroorganizmai ir oportunistiniai patogenai.

Pagrindas

Šioje terpėje yra sacharozės; Šis angliavandenis tarnauja kaip anglies šaltinis, o natrio nitratas yra azoto šaltinis, tačiau skirtingai nuo kitų terpių, pateiktas azotas yra neorganinis.

Dėl šios priežasties Czapek terpė laikoma selektyvia, nes gali augti tik mikroorganizmai, galintys neorganinius junginius naudoti kaip vienintelį azoto šaltinį.

Kaip terpės osmoliškumą reguliuojanti medžiaga yra bikalio fosfatas. Savo ruožtu magnio sulfatas, kalio chloridas ir geležies sulfatas yra būtini mineralai saprofitinių (laisvai gyvenančių) mikroorganizmų augimui. Ši formulė sudaro magnio fosfato nuosėdas.

Galiausiai agaras-agaras yra junginys, užtikrinantis kietą terpės konsistenciją, o visų komponentų tirpiklis yra vanduo.

Naudojant modifikuotą Czapek agaro formulę, nuosėdos nesusidaro ir pagerėja kai kurių grybų augimo efektyvumas.

Dėl ypatingo rūgštinio Czapek agaro rūgštingumo jis tampa selektyvesne terpe, leidžiančia augti tik acidofiliniams mikroorganizmams, galintiems panaudoti neorganinį azotą. Tuo tarpu „Czapek“ mielių agaras pagerina tam tikrų grybų veikimą.

Paruošimas

Vidutinis Czapek-Dox

Pasveriama 49 g dehidratuotos mitybinės terpės ir ištirpinama distiliuotame vandenyje. Pavirkite šilumą iki virimo. Dažnai purtykite mišinį, kol jis visiškai ištirps.

-Czapek Agaro pleištai

Ištirpintą mišinį paskirstyti į mėgintuvėlius ir 15 minučių autoklavu laikyti 121 ° C temperatūroje. Išimdami iš autoklavo, prieš padėdami mėgintuvėlius, homogenizuokite ir leiskite sukietėti.

-Czapek agaro lėkštelės

Ištirpintą mišinį autoklavuokite 15 minučių 121 ° C temperatūroje ir palikite atvėsti iki 50 ° C, homogenizuokite ir supilkite 20 ml į sterilius Petri lėkšteles. Leiskite sukietėti, apverskite ir laikykite šaldytuve iki naudojimo.

PH turėtų išlikti 7,3 ± 0,2. Dehidratuota terpė yra balta, o paruošta terpė yra šviesiai gintaro spalvos, šiek tiek drumsta dėl susidarančių flokuliacinių nuosėdų.

Czapek terpė rūgščiame pH

Paruoškite, kaip aprašyta anksčiau, bet į kiekvieną paruoštos terpės litrą pridedama 10 ml sterilios 10% pieno rūgšties. Modifikuotos Czapek terpės pH turėtų būti 3,5 ± 0,2.

Modifikuota „Czapek“ terpė

Pasveriama 45,4 g dehidratuotos terpės ir ištirpinama 1 litre vandens. Likęs preparatas yra tas pats, kas aprašyta aukščiau. Dehidratuota terpė yra balta, o paruošta terpė yra balkšva. Galutinis terpės pH yra 6,8 ± 0,2.

Czapek-mielių terpė

Taip pat vadinamas „Czapek“ mielių ekstrakto agaru (CYA). Jame yra klasikinio Czapek agaro plius mielių ekstraktas.

Naudokite

„Czapek“ terpė naudojama saprofitinių mikroorganizmų paieškai dirvožemyje, daržovėse, grūduose, ore, vabzdžiuose ir kt.

Czapeko agaras esant rūgščiam pH yra naudojamas acidofiliniams mikroorganizmams augti, o modifikuotas Czapek agaras yra ypač naudingas chlamidosporų susidarymui Candida albicans komplekso rūšyse.

Galiausiai Czapek-mielių agaras yra labai naudingas Aspergillus ir Penicillium išskyrimui.

Sėjama

-Czapeko agaras

Norėdami ieškoti aktinomicetų dirvožemyje, atlikite šiuos veiksmus: mėginys 30 minučių apdorojamas fenolizuotu vandeniu, po to 1 ml suspensijos pasėjamas Czapeko agare. Inkubuokite 5–7 dienas 28 ° C temperatūroje.

Daržovių, grūdų ir vabzdžių mėginiams jie dedami tiesiai ant agaro. Jūs taip pat galite praskiesti ir užpilti 0,1 ml agaro paviršiaus.

-Modifikuotas Czapeko agaras

Sėjimui naudojama tiesi kilpa arba adata, ji yra impregnuota tamponu, o agaras pasėjamas atliekant punkciją, kol jis palies plokštelės pagrindą. Inkubuokite 24 valandas 28 ° C temperatūroje ir mikroskopu ištirpinkite virš plokštelės ir žemiau ir patikrinkite, ar nėra susidarę chlamidosporų.

Inkubacinė temperatūra ir laikas

Inkubacinė temperatūra ir laikas skiriasi priklausomai nuo išskirtų mikroorganizmų rūšies. Plokštelės paprastai inkubuojamos vieną – dvi savaites 20–25 ° C temperatūros intervale.

Tačiau kai kurioms padermėms yra specifinės sąlygos. Pavyzdžiui, dauguma Aspergillus genties augalų rūšių auga optimaliai 30 ° C temperatūroje; tačiau A. fumigatus auga 50 ° C temperatūroje.

Inkubacinis laikas yra dvi ar dvi savaites, tačiau Candida albicans 25 ° C temperatūroje gali išsivystyti per 24–48 valandas.

Kai kurių kolonijų šioje terpėje charakteristikos

-Penicillium atrovenetum

Jis vystosi per 12 dienų inkubaciją 27 ° C temperatūroje. Jų kolonijos yra mažos (25 mm).

Kolonijos yra aksominės išvaizdos, su apibrėžtu baltu kraštu ir melsvai žaliu atspalviu centre, kuris senstant tampa pilkas. Užpakalinė kolonijos pusė yra oranžinė, todėl vidurys yra tokios pat spalvos, nes gaminasi pigmentas.

-Aspergillus niger

Jis vystosi su balta arba gelsva grybiena ir juodomis sporomis.

-Candida albicans

Susidaro kreminės šviesiai smėlio spalvos kolonijos. Modifikuotame Czapeko agare jis sudaro chlamidosporas.

-Aspergillus parasiticus

Tamsiai žalia grybiena išsivysto per 7 dienas 25 ° C temperatūroje.

QA

Norint įvertinti kultūrinės terpės kokybę, galima sodinti sertifikuotas kontrolines padermes, tokias kaip: Aspergillus niger MKTA 16404, Candida albicans MKTA 10231.

Aspergillus niger apytiksliai per 5 dienas išsivysto balta arba gelsva grybiena ir juodos sporos, o Candida albicans augimas bus patenkinamas per 24 inkubacijos valandas 25 ° C temperatūroje; kolonijos yra kreminės spalvos.

Apribojimai

Kai kurie tyrimai atskleidė, kad norint gauti Actinomycetes, geriausiai gaunamas agaras yra bulvių dekstrozės agaras, o Czapek agaras yra antroje vietoje, tačiau Aspergillus ir Penicillium atsigavimui Czapek agaras yra tas, kuris suteikia didžiausią atsigavimo procentą.

Nuorodos

1. Dávila M ir kt. Antagonistiniai aktinomicetai prieš žemės ūkio svarbos fitopatogeninius grybus. Mev. Mokslas. Agríc 2013, 4 (8): 1187-1196. Galima rasti: scielo.org.
2. „Luna M“, „Lozada Y“, kviečiai Á. Aspergillus niger padermių, iš kurių gaminamas ochratoksinas A, išskyrimas laikomoje žalioje kavoje (Coffea arabica). Mev. Mic. 2010; 32: 63-68. Galima rasti svetainėje.scielo.org.
3. Vikipedijos bendradarbiai. „Czapek“ terpė. Vikipedija, nemokama enciklopedija. 2019 m. Sausio 13 d., 20:30 UTC. Galima rasti: en.wikipedia.org
4. „Conda Pronadisa“ laboratorijos. Modifikuotas Czapek-Dox agaras. Galima rasti: condalab.com
5. Kultūrų terpės mikrokompiuteris. Czapek-Dox agaras. Diosponuojamas: Medioscultivo.com