Agaro-endo arba endo terpė yra kieta terpė, skirtumas ir su tam tikra selektyvumas yra kultūros laipsnis. Originalią formulę Endo sukūrė 1904 m., Kad atskirtų laktozės fermentaciją nuo nefermentuojančių bakterijų. Iš pradžių jis buvo skirtas Salmonella typhi izoliuoti, tačiau vėliau terpės tikslas buvo ieškoti koliforminių bakterijų.
Endo agaro principas išliko, tačiau jo formulavimas bėgant metams patyrė daugybę pokyčių. Šiuo metu terpę sudaro pepsinis gyvūninio audinio virškinimas, laktozė, dikalio vandenilio fosfatas, natrio sulfitas, bazinis fuksinas ir agaras.
A: Virgin Endo agaras B: sėklinis endo agaras, agaro viduryje galite pastebėti metalinį E. coli padermės blizgesį. Šaltinis: A: „Strolch1983“ / B: „LenkaM“
Pagrindinis terpės panaudojimas buvo susijęs su gramneigiamų bakterijų, priklausančių Enterobacteriaceae šeimai ir kitoms artimoms šeimoms, išskyrimu ir diferenciacija.
Ilgą laiką jis buvo naudojamas aptikti koliformas vandens, pieno ir maisto mėginiuose, tačiau šiandien šią terpę pakeitė kiti, turintys panašias funkcijas. Tačiau kai kurios mikrobiologijos laboratorijos naudoja šį agarą Enterobacteriaceae išskyrimui iš klinikinės kilmės mėginių.
Pagrindas
Endo agare yra peptonų, kurie yra amino rūgščių, azoto, anglies ir energijos šaltinis, būtini nereikalingiems mikroorganizmams augti.
Kita vertus, šiek tiek selektyvus agaro pobūdis atsiranda pridedant natrio sulfito ir bazinio fuksino; abu komponentai iš dalies arba visiškai slopina daugumos gramteigiamų bakterijų augimą.
Skirtingą pobūdį suteikia fermentuojamas angliavandenis, kuris šiuo atveju yra laktozė ir bazinis fuksinas, kuris taip pat naudojamas kaip pH rodiklis.
Gramneigiamos bakterijos, augančios šiame agare ir gebančios fermentuoti laktozę, suformuos stiprias rausvas kolonijas; būdamas patogenominis Escherichia coli, tamsiai raudonos kolonijos gali susidaryti su žvilgančiu žalsvu metaliniu blizgesiu. Taip yra dėl to, kad fermentuojant angliavandenius susidaro didelis rūgščių kiekis.
Reikėtų pažymėti, kad terpė aplink kolonijas taip pat tampa ryškiai rausva spalva. Tuo tarpu nelaktozės būdu fermentuojantys gramneigiami strypai sudaro blyškiai rausvas kolonijas, panašias į vidutines arba bespalves.
Dikalio vandenilio fosfatas subalansuoja terpės pH, o agaras yra komponentas, užtikrinantis kietą konsistenciją.
Paruošimas
Endo agaras
Pasveriama 41,5 g dehidratuotos terpės ir ištirpinama 1 litre distiliuoto vandens. Šildykite mišinį dažnai maišydami, kol terpė visiškai ištirps. Sterilizuokite autoklave, esant 121 ° C, esant 15 svarų slėgiui, 15 minučių.
Išimdami iš autoklavo, leiskite atvėsti iki maždaug 45-50 ° C temperatūros, prieš patiekdami mišinį suplakite, kad homogenizuotųsi. Supilkite 20 ml į sterilius Petri lėkšteles.
Prieš laikydami šaldytuve, leiskite plokštėms sukietėti, apverskite ir laikykite plokštelėje arba apvyniokite tamsiu popieriumi. Labai svarbu paruoštą terpę apsaugoti nuo tiesioginės šviesos. Geriausia praktika yra paruošti tikslią jums reikalingą sumą.
Jei lėkštės laikomos šaldytuve, prieš naudojimą joms reikia leisti sušilti.
Terpės pH turėtų būti nuo 7,2 iki 7,6, o paruoštos terpės spalva yra šviesiai rausva.
M-Endo agaro variantas
Yra dar viena Endo agaro versija (m-Endo), atitinkanti McCarthy, Delaney ir Grasso formulę, kurioje yra daugiau junginių ir jos skiriasi paruošimo forma.
Šiame variante yra: laktozė, triptozė, fermentinis kazeino skiedinys, fermentinis gyvūninių audinių skiedinys, natrio chloridas, dvibazis kalio fosfatas, natrio sulfitas, mielių ekstraktas, vienbazis kalio fosfatas, bazinis fuksinas, natrio deoksicholatas, laurilsulfatas. natris ir agaras.
Tokiu atveju pasveriama 51 g dehidratuotos terpės ir suspenduojama 1 litre distiliuoto vandens, kuriame yra 20 ml etanolio.
Šiek tiek kaitinkite maišant, kol terpė visiškai ištirps. Jis neturėtų būti perkaitintas ir neturėtų būti autoklavuotas. Kai mišinys taps vienalytis, patiekite steriliuose Petri induose ir leiskite sukietėti.
Naudokite
Kai kuriose šalyse jis vis dar naudojamas skaičiuojant bendras ir išmatų koliformas maisto ir vandens mėginiuose, ypač Escherichia coli buvimas kaip pagrindinis užterštumo rodiklis.
„M-Endo agarą“ rekomenduoja Amerikos visuomenės sveikatos asociacija (APHA) dezinfekavimo ir nuotekų tvarkymo programų stebėsenai ir kontrolei, taip pat geriamojo vandens kokybei vertinti.
Plačiausiai naudojamas metodas yra membraninis filtravimas, 2–4 valandas praturtinus mėginį Lauryl sulfato sultiniu.
Jis taip pat gali būti naudojamas kaip EMB agaro pakaitalas atliekant mikrobiologinę maisto ir vandens analizę, naudojant labiausiai tikėtiną skaičių metodą (MPN), ypač per visą patvirtinamąją fazę, siekiant patvirtinti E. coli buvimą iš drumstų EB sultinių.
QA
Paruoštos Endo agaro partijos kokybei įvertinti sėjamos žinomos arba sertifikuotos kontrolinės atmainos.
Tarp štamų, kurie gali būti naudojami šiam tikslui, yra: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Enterobacter cloacae ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC1400 ir EnterCiCoCoCoCo 120C, Proteus miCiCoCoCoCoCoCoCoCoCoCoCoClCC12022. .
Padermės sėjamos išsekimo būdu ir 24 valandas inkubuojamos 37 ° C temperatūroje aerobiozės metu.
Laukiami rezultatai:
- Escherichia coli: stiprios raudonos kolonijos, turinčios metalinį blizgesį.
- E. cloacae ir K. pneumoniae kolonijos turėtų būti rausvos gleivinės.
- S. typhimurium, S. flexneri ir P. mirabilis atveju kolonijos paprastai būna šviesiai rožinės arba bespalvės.
- Galiausiai tikimasi, kad E. faecalis bus iš dalies slopinamas, todėl jo augimas turi būti prastas su labai mažomis, stipriomis rausvomis kolonijomis.
Apribojimai
-Endo terpė turi mažai selektyviosios galios, todėl įmanoma, kad gali augti kai kurie gramteigiami mikroorganizmai, tokie kaip stafilokokas, enterokokas ir netgi mielės.
- Šioje terpėje gali išsivystyti kitos bakterijos, nepriklausančios Enterobacteriaceae šeimai, pavyzdžiui, Pseudomonas sp ir Aeromonas sp. Šiems kamienams būdingos bespalvės netaisyklingos kolonijos.
-Ši paruošta terpė yra labai jautri šviesai, todėl ilgalaikis jos veikimas pablogina indikatorių sistemą ir negrįžtamai sugadina terpę.
- Terpės komponentai laikomi kancerogeniškais, todėl reikia vengti tiesioginio kontakto.
- Dehidratuota terpė yra labai higroskopinė ir turi būti laikoma originalioje talpykloje kambario temperatūroje, sandariai uždarytoje ir sausoje aplinkoje.
Nuorodos
- BD laboratorijos. Endo agaras. 2013.Atsiejama: bd.com
- Neogenų laboratorijos. M Endo agaras. Galima rasti svetainėje: foodsafety.neogen.com
- Endo agaras. Vikipedija, nemokama enciklopedija. 2017 m. Rugsėjo 7 d., 08:27 UTC. 2019 m. Vasario 28 d., 22:55. Galima rasti: en.wikipedia.
- „MercK“ laboratorija. Endo agaras. 2019.Galima rasti: merckmillipore.com
- Techninių duomenų laboratorijos. M - Panaikinti agaro LES. 2015. Prieinamas šiuo adresu: liofilchem.net