KUKURŪZŲ MILTŲ AGARAS: FONAS, PARUOŠIMAS IR NAUDOJIMAS - BIOLOGIJA - 2025

Kukurūzų miltai agaro yra kietas kultūros terpė, mažas maistinė galia, naudinga persėdami tam tikrų grybų ir parodant chlamiodiosporose padermių Candida albicans kompleksas. Anglų kalba jis žinomas kaip Corn Meal Agar.

Įprastos kukurūzų miltų terpės sudėtis yra labai paprasta, joje yra kukurūzų miltų, agaro-agaro ir vandens. Dėl mažo maistinio lygio jis idealiai tinkamas naudoti palaikant grybelių kamienus, ypač juodus grybus.

A. Grafinis Candida albicans komplekso vaizdas ant kukurūzų miltų agaro. B. Mikroskopu apžvelgiamo Candida albicans komplekso chlamydosporos, susidariusios ant kukurūzų miltų agaro. Šaltinis: A. GrahamColm / B. Autorius: CDC / Dr. Viljamas Kaplanas, mandagumas: visuomenės sveikatos įvaizdžių biblioteka.

Šioje terpėje pirmenybė teikiama Candida albicans komplekso sporuliacijai, jei ruošiant agarą pridedama 1% Tween 80. Chlamydosporų susidarymas būdingas šiai rūšiai ir praktiškai vienintelis, paveikiantis žmones.

Yra ir kitų rūšių, kurios sudaro chlamidosporą, tačiau mažai tikėtina, kad jos paveiks žmones, pavyzdžiui, Candida australis, esantis pingvinų mėšle, arba C. clausenii, kuris yra retai sutinkamas saprofitas. Be to, išimtinai C. stellatoidea ir C. tropicalis rūšys galėjo jas sudaryti.

Kita vertus, pridedant gliukozės į kukurūzų miltų terpę, pasitaiko pigmentų susidarymo Trichophytom rubrum padermėse.

Svarbu pabrėžti, kad yra grybų, kurie nesudaro hifų ar pseudohifų kukurūzų miltų agare, pavyzdžiui, Cryptococcus neoformans, besiskiriantys nuo kitų genčių.

Kukurūzų agarą galima pasigaminti namuose laboratorijoje arba taip pat galima naudoti komercinę terpę.

Pagrindas

Kukurūzų miltai yra substratas, agaras yra kietiklis, o vanduo yra tirpiklis.

Kukurūzų košės agarą galima papildyti tween 80 (sorbitano monooleatas arba polisorbato poliesteris 80). Šis junginys sumažina terpės paviršiaus įtempimą dėl savo emulsinės galios.

Tai taip pat sukuria priešišką aplinką, kuri slopina perdėtą ląstelių dauginimąsi ir skatina hifų augimą, taip pat palankią chlamidosporų gamybai; pastaroji laikė pasipriešinimo struktūras. Ši struktūra padeda nustatyti Candida albicans rūšis.

Savo ruožtu šioje terpėje esanti gliukozė padidina kai kurių grybų pigmento formavimo galimybes.

Reikėtų pažymėti, kad kukurūzų miltų terpė su gliukoze nėra naudinga chlamidosporų demonstravimui Candida albicans komplekse.

Paruošimas

Naminis kukurūzų košės agaro paruošimas

Pasverkite 47 g geltonųjų kukurūzų miltų ir ištirpinkite 500 ml distiliuoto vandens. Įkaitinkite iki 60 ° C, maišydami preparatą maždaug 1 valandą. Tada perfiltruokite per marlės ir medvilnės gabalą, pasirinktinai jį vėl galite filtruoti, perleisdami preparatą per filtrą „Whatman Nr. 2“.

Skiedžiama distiliuotu vandeniu iki 1000 ml. Įpilkite 17 g agaro-agaro, kaitinkite, kol ištirps. Autoklavas 15 minučių 121 ºC temperatūroje.

Patiekite steriliuose Petri induose. Laikyti šaldytuve.

Paruošta terpė yra balkšvos ir purios spalvos.

Jei norite paruošti kukurūzų miltus su gliukoze į aukščiau aprašytą preparatą, įpilkite 10 g gliukozės.

Komercinis kukurūzų miltų agaras

Pasverkite 17 g dehidratuotos terpės ir ištirpinkite 1 litre distiliuoto vandens. Mišinį galima kaitinti, atsargiai purtant, kad jis visiškai ištirptų. Sterilizuokite 15 minučių autoklave, esant 121 ºC, esant 15 svarų.

Supilkite į sterilius Petri indus. Leiskite sukietėti. Apverskite ir laikykite šaldytuve iki naudojimo. Prieš naudojimą atšildykite.

25 ° C temperatūroje pH turėtų būti 6,0 ± 0,2.

Kukurūzų miltų agaras su Tween 80

Kad atitiktų ISO 18416, kukurūzų miltų agaras turi būti paruoštas taip:

Pasverkite 65 g / l ir įpilkite 10 ml Tween 80. Kaitinkite ir virkite keletą minučių, kol ištirps, stengdamiesi per daug neperkaisti. Sterilizuokite 121 ° C temperatūroje 15 minučių.

Kukurūzų miltų agaras su gliukoze

Norint pagerinti Trichophyton rubrum kolonijų chromogeninę galią ir atskirti jas nuo T. mentagrophytes, į pradinę formulę galima pridėti 0,2% gliukozės. Jums nereikia turėti Tween 80, nes gliukozė slopina chlamidosporų susidarymą.

Naudokite

Kukurūzų miltų agaras daugiausia naudojamas Candida kamienams tirti, padedant juos atpažinti būdingu chlamidosporų stebėjimu albicans rūšyse. Tai yra, šio agaro naudojimas yra pagalbinis šių mielių identifikavimo metodas.

Šiame agare gali išsivystyti tiek saprofitinės, tiek patogeninės rūšys, tačiau kiekviena iš jų sudaro būdingą micelinę struktūrą. Pavyzdžiui, Torulopsis genties rūšys negamina grybienos ir dauginasi tik blastokonidijomis.

Trichosporon ir Geotrichum rūšys taip pat gamina artroconidia ant kukurūzų miltų agaro, todėl kartais sunku atskirti.

Geotrichum genties Arthroconidia gamina hifo pratęsimą, primenantį ritulio lazdą.

Taip pat nustatant Trichophytom rubrum, pigmentų gamyba naudojant kukurūzų miltų agarą, papildytą gliukoze.

Sėjama

Įtartinos Candida kolonijos, gautos pirminėje kultūros terpėje - Sabouraud agare, iš klinikinių mėginių, kosmetikos, dirvožemio, be kita ko, subkultūruojamos ant kukurūzų miltų agaro. Terpė pasėjama ir inkubuojama 22 ° C temperatūroje nuo 24 iki 48 valandų. Inkubacinį laiką prireikus galima pailginti.

Chlamydosporos demonstracija

Šiuo tikslu kukurūzų miltų agaras su Tween 80 turi būti pasėjamas naudojant Dalmau metodą. Šis metodas susideda iš įtariamos kolonijos dalies paėmimo su platinos rankena ir padarius tris lygiagrečius pjūvius viduryje, laikant rankeną 45 ° kampu. Pjūviai turėtų būti atskirti 1 cm atstumu vienas nuo kito.

Vėliau ant pasėtų dryžių dedamas anksčiau liepsnotas dangtis-objektas taip, kad pusė būtų uždengta, o kita neuždengta.

Inkubuokite pasėtas plokšteles 30–30 ° C temperatūroje 48–72 h ir po mikroskopu ištirkite per dangtelio šleifą.

Grybelinių kamienų priežiūra

Padermėms palaikyti pasėtos ir išaugintos plokštelės laikomos šaldytuve (nuo 4 iki 8 ºC). Tokiu būdu jie gali trukti kelias savaites ir būti naudojami mokymo ar tyrimų tikslams.

QA

Sterilumui kontroliuoti plokštelė inkubuojama neinokuliavus kambario temperatūros, tikimasi, kad augimas ar spalva nepasikeis.

Kokybės kontrolei galima sėti žinomus kamienus, tokius kaip: Staphylococcus aureus, ATCC 6538, Escherichia coli ATCC 25922, Aspergillus niger ATCC 16404, Candida albicans ATCC 1023, Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763.

Tikėtini rezultatai yra dalinis S. aureus ir E. coli slopinimas. Nors likusiuose štamuose tikimasi patenkinamo augimo.

Apytiksliai per 5 inkubacijos dienas Aspergillus niger auga su juodomis ir sporinėmis kolonijomis.

Candida albicans mielių kolonijos, gaminančios chlamidosporą.

Saccharomyces cerevisiae gamina dideles mielių ląsteles.

Apribojimai

Plokštės apačioje susidaro geltonos nuosėdos, kurių nereikėtų painioti su kolonijomis.

Nuorodos

1. Neogenų laboratorijos. Kukurūzų miltų agaras. Galima rasti svetainėje: foodsafety.neogen.com.
2. Kultūrų terpės mikrokompiuteris. Kukurūzų miltų agaras. Galima rasti: Medioscultivo.com.
3. Linares M, Solís F. Mielių identifikavimo vadovas. Galima rasti: http: //www.guia.revibero.
4. Urcia F, Guevara M. Rev. Perú Med.Exp. Visuomenės sveikata, 2002; 19 (4): 206-208. Galima rasti: Scielo.com
5. Casas-Rincón G. Bendroji mikologija. 1994 m. 2-asis Venesuelos centrinio universiteto leidimas. Venesuelos Karakasas.
6. „Forbes B“, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey ir Scotto mikrobiologinė diagnozė. 12 red. Redakcija Panamericana SA Argentina.
7. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinė diagnostika. 5-asis leidimas Redakcija Panamericana SA Argentina.
8. Castillo E. Kai kurių makro- ir mikroskopinių Candida genties išskyrimo ir atpažinimo metodų palyginamasis tyrimas. Kolumbijos farmacijos chemijos mokslų red. 1970; 3 (1): 33–57. Galima rasti: Ciencias.unal.edu.co