Agaras Hektoen ar Hektoen enterinis agaras kietos terpės yra selektyvus ir skirtumas kultūra. Jį sukūrė King ir Metzger Hektoen institute, norėdami išskirti Shigella ir Salmonella genčių enteropatogenines bakterijas.
Terpę sudaro baltyminis peptonas, mielių ekstraktas, tulžies druskos, laktozė, sacharozė, salicinas, natrio tiosulfatas, natrio chloridas, geležies citratas, amonio citratas, bromtimolio mėlynasis, rūgštusis fuksinas ir agaras. Ši kompozicija leidžia atskirti Shigella ir Salmonella gentis nuo likusių bakterijų, galinčių augti šioje terpėje.
A. Virgin Hektoen agaras B. Sėklinis Hektoen agaras. Šaltinis: Flickr.com/ Originalus įkėlėjas buvo Philippinjl prancūzų Vikipedijoje.
Nors yra ir kitų terpių, turinčių tą pačią funkciją kaip Hektoen agaras, ji turi didesnį pranašumą, palyginti su kitomis terpėmis, ypač kai norite atkurti Shigella rūšis.
Abiejų lyčių rūšys sukelia rimtų virškinimo trakto problemų žmonėms dėl užteršto maisto vartojimo; todėl perdavimas yra išmatų - oralinis. Štai kodėl Hektoen agaro vartojimas daugiausia nurodomas atliekant mikrobiologinę išmatų ir maisto mėginių analizę.
Pagrindas
Hektoeno agare yra peptonų ir mielių ekstrakto, kurie yra maistinių medžiagų šaltinis ir yra pagrindiniai mikrobų vystymosi elementai.
Tačiau ji taip pat turi tulžies druskų, kurios slopina kai kurių bakterijų, ypač gramneigiamų ir kai kurių gramneigiamų, augimą. Būtent dėl šios priežasties ji laikoma selektyvia terpe.
Kita vertus, Hektoen agaras yra diferencinė terpė. Šią savybę suteikia fermentuojami angliavandeniai, tokie kaip laktozė, sacharozė ir salicinas, kartu su pH indikatorių sistema, kurią apibūdina bromtimolio mėlynasis ir rūgštinis fuksinas.
Visoms bakterijoms, galinčioms augti šioje terpėje, nepriklausančioms Salmonella ir Shigella genčiai, išsivystys lašišų arba apelsinų kolonijos, išskyrus Proteus gentį. Taip yra dėl to, kad fermentuojamas vienas ar daugiau esančių angliavandenių, kurie rūgština terpę, todėl pH indikatorius sukasi.
Savo ruožtu Shigella ir Salmonella gentys nesugeba fermentuoti nė vieno iš esančių angliavandenių, kaip energijos šaltinį naudodamos tik peptonus, kurie šarmina terpę, todėl jų kolonijos yra melsvai žalios.
Šioje terpėje taip pat galima išskirti bakterijas, galinčias sudaryti vandenilio sulfidą (bespalves dujas). Natrio tiosulfatas veikia kaip sieros šaltinis, o geležies citratas yra sukūrėjas. Abu junginiai leidžia susidaryti juodoms geležies sulfido nuosėdoms, kurios rodo reakciją.
Juodos nuosėdos kolonijos centre su permatomu halogeliu suteikia žuvies akiai išvaizdą. Ši savybė rodo Salmonella genties buvimą.
Galiausiai natrio chloridas palaiko osmosinę pusiausvyrą, o agaras terpėje suteikia kietą konsistenciją.
Paruošimas
Pasverkite 76 g dehidratuotos terpės ir ištirpinkite litre distiliuoto vandens. Stipriai suplakite mišinį ir palikite pailsėti 10–15 minučių. Jis gali būti kaitinamas ir virinamas, atliekant sukamuosius judesius iki visiško ištirpimo. Ši terpė nėra autoklavuota.
Kai terpė pasiekia maždaug 45 ° C temperatūrą, 20 ml tūrio tirpalas pilamas tiesiai į sterilius Petri lėkšteles.
Agarui leidžiama sukietėti. Tuo metu jie yra paruošti naudojimui. Rekomenduojama juos naudoti nedelsiant. Jei tai neįmanoma, jie iki naudojimo laikomi šaldytuve.
Prieš sėjant plokšteles iš anksto reikia išimti iš šaldytuvo, kad jos būtų kambario temperatūros.
Terpės pH turėtų būti 7,5 ± 0,2. Dehidratuota terpė yra purpurinė, o paruošta terpė yra rusvai žalia.
Naudokite
Ieškant Shigella ir Salmonella genties bakterijų išmatose ir maisto mėginiuose, rekomenduojama naudoti Hektoen agarą.
Šių bakterijų išskyrimo galimybė žymiai padidėja, jei mėginys anksčiau buvo praturtintas specialiais sultiniais, tokiais kaip selenito sultinys, cistino selenito sultinys, tetrationato sultinys ir kt.
Inokuliantas turi būti stiprus, o sėjama sėjant. Plokštės inkubuojamos 37 ° C temperatūroje nuo 24 iki 48 valandų aerobiozės metu.
Rekomenduojama inkubuoti 48 valandas, nes šiuo metu aiškėja kolonijų savybės aiškinti ir diferencijuoti.
QA
Kokybės kontrolei šioje terpėje naudojami sertifikuoti bakterijų štamai, tokie kaip: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 ir Shigella sonnei ATCC 25931.
Laukiami šie rezultatai: Salmonella typhimurium ir Salmonella enteritidis turėtų išsivystyti mėlynai žalios kolonijos su juodu centru arba be jo. Tuo tarpu Shigella rūšys augs kaip mėlynai žalios kolonijos.
Taip pat galima įtraukti Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 ir Staphylococcus aureus ATCC 25923 padermes.
Tokiais atvejais stebimos šios savybės: E. coli ir K. pneumoniae šioje terpėje susidarys lašišos-oranžinės kolonijos, aplink jas susidarys tos pačios spalvos nuosėdos. Tuo tarpu „Proteus“ vystysis mėlynai žalios kolonijos su juodu centru arba be jo.
Nors S. aureus ir E. faecalis reikia slopinti, E. faecalis retkarčiais sugeba užaugti kaip labai mažos geltonos kolonijos.
Kita vertus, kadangi ši terpė nėra autoklavuota, svarbu įvertinti terpės sterilumą. Todėl iš kiekvienos paruoštos partijos viena ar dvi neinokuliuotos plokštelės turėtų būti inkubuojamos 37 ° C temperatūroje 24 valandas aerobiozės metu.
Akivaizdu, kad lėkštėje jokio augimo nesitikima.
Apribojimai
- Šioje terpėje gali vystytis „Proteus“ rūšys, o jų kolonijų savybes galima supainioti su Salmonella ar Shigella rūšimis. Dėl šios priežasties bet kokia įtartina kolonija turi būti patvirtinta atliekant biocheminius tyrimus.
- Naudojant šią terpę būtina kartu su kitais mažiau selektyviais agarais, nes jei ieškomas mikroorganizmas yra mažoje koncentracijoje, jis gali nesusidaryti šioje terpėje.
- Paruošimo metu nekaitinkite, nes per didelis karštis keičia terpės sudėtį.
- Paprastai gali atsirasti laktozės, fermentuojančios salmonelę, kolonijų, kurios gali likti nepastebėtos.
Nuorodos
- Vikipedijos bendradarbiai. Hektoeno enterinis agaras. Vikipedija, nemokama enciklopedija. 2019 m. Kovo 13 d., 23:38 UTC. Galima rasti: .wikipedia.org / Prieinama 2019 m. Kovo 16 d.
- BD laboratorijos. BD Hektoen enterinis agaras (HE agaras). 2013.Atsiejama: bd.com
- „Britannia“ laboratorijos. Hektoeno enterinis agaras. 2015.Atsiejama: britanialab.com
- „Difco Francisco Soria Melguizo“ laboratorijos. Hektoeno agaras. Galima rasti: f-soria.es
- „Difco & BBL“ vadovas, Hektoeno žarnyno agaras. 2-asis leidimas. Galima rasti: bd.com/europe