BULVIŲ DEKSTROZĖS AGARAS: PAGRINDIMAS, PARUOŠIMAS IR NAUDOJIMAS - BIOLOGIJA - 2025

Bulvių dekstrozės agaro yra vidutinio, kietas ne - selektyvus maistinių medžiagų kultūra. Jame gali augti bakterijų ir grybelių rūšys, tačiau jo vartojimas ypač nurodomas siūlinių grybų ir mielių išskyrimui. Jis taip pat žinomas kaip PDA terpė angliškam posakiui Potato Dextrose Agar.

Tai ypač naudinga fitopatogeninių grybų, tai yra tų, kurie veikia augalus, išskyrimui. Sėjant užkrėstų daržovių mėginius, galima naudoti kitas priemones, tokias kaip Sabouraud agaras arba maltos agaras, tačiau įprastiniam naudojimui pirmenybė teikiama bulvių dekstrozės agarui, kad būtų didesnė sporuliacija.

Aspergillus niger ir Sinemas atitinkamai ant bulvių dekstrozės agaro. Šaltinis: „Alextrevelian 006“ angliškoje Vikipedijoje / Joselrojas

Jis taip pat naudojamas grybelių kolonijoms suskaičiuoti kosmetikos, farmacijos produktų ir kai kurių pieno produktų mėginiuose. Taip pat jis tinkamas sėti odos įbrėžimų pavyzdžius ieškant dermatofitų, kurie šioje terpėje labai gerai auga ir išsivysto jiems būdingi pigmentai.

Bulvių dekstrozės terpė yra labai paprasta ir lengvai paruošiama terpė laboratorijoje. Kaip nurodyta jo pavadinime, jame yra bulvių, dekstrozės ir agaro-agaro užpilai. Be to, siekiant užkirsti kelią bakterijų augimui ir padidinti selektyvumą grybelinėms rūšims, gali būti pridedama slopinančių medžiagų.

Pagrindas

Bulvių dekstrozės agaras yra mitybinė terpė, teikianti maistinius elementus, reikalingus gijinių grybų ir mielių vystymuisi.

Bulvių infuzijos ir gliukozės derinys suteikia puikų energijos šaltinį patenkinamai grybų augimui. O agaras yra tas, kuris suteikia konsistenciją terpėje.

Pati terpė neslopina bakterijų augimo, todėl yra neselektyvi terpė. Kad jis būtų selektyvus, jam reikia pridėti slopinančių medžiagų, tokių kaip vyno rūgštis ar antibiotikai.

Paruošimas

- Namų (nekomercinis) bulvių dekstrozės agaro paruošimas

Petri patiekalai

Jis paruoštas taip:

Visų pirma, bulvės labai gerai nuplaunamos, pašalinant jų turimą dirvą. Jie supjaustomi plonais griežinėliais su viskuo ir lukštu. 200 gramų bulvių pasveriama ir pusvalandį virinama litre distiliuoto vandens.

Pasibaigus šiam laikui, filtruojame arba filtruojame visą gaminį per varškę.

Gautas skystis užpilamas distiliuotu vandeniu iki vieno litro. Į infuziją pridedama 20 g agaro-agaro ir 20 g dekstrozės, gerai sumaišoma ir autoklavuojama 121 ° C temperatūroje, esant 15 svarų slėgiui, 15 minučių.

Leiskite atvėsti iki 50 ° C ir patiekite steriliuose Petri induose. Paruoštos plokštelės laikomos šaldytuve.

Pleištai

Taip pat galima paruošti bulvių dekstrozės agaro pleištus.

Tokiu atveju prieš sterilizavimą autoklave 12–15 ml terpės dedama į mėgintuvėlius, vėliau jie autoklavuojami ir paliekami ant specialių atramų, kol sukietėja. Laikyti šaldytuve.

Terpės pH lygis yra 5,6 ± 0,2, tačiau kai kurios laboratorijos prideda 10% vyno rūgšties, kad sumažintų pH iki 3,1 ± 0,1, kad būtų užkirstas kelias bakterijų augimui.

Ta pati prasme kitos laboratorijos nori pridėti antibiotikų, kad jis būtų selektyvus auginant grybus ir užkirstų kelią bakterijų dauginimuisi.

-Komercinis bulvių dekstrozės agaro paruošimas

Pasverkite 39 g parduodamos dehidratuotos terpės ir ištirpinkite viename litre distiliuoto vandens. Leiskite pailsėti 5 minutes.

Mišinys kaitinamas dažnai maišant, kol jis visiškai ištirps. Vėliau jis sterilizuojamas autoklave 121 ° C temperatūroje 15 minučių.

Galima paruošti plokštes ar pleištus. Tęskite taip, kaip aprašyta aukščiau.

PH išlieka 5,6 ± 0,2. Jei norima, kad pH būtų 3,1, prieš patiekiant į lėkštes, reikia įpilti 14 ml sterilios 20% vyno rūgšties.

Neapdorota terpė yra smėlio spalvos, o paruošta - šviesiai gintaro spalvos, šiek tiek drumstos ar opalios.

Programos

Augalų mėginių sėjos procesas bulvių dekstrozės agare

-Dėl beicuotų lapų

Lapai supjaustomi gabalėliais.

Į 50 cm3 talpos stiklinę su 50% alkoholio sudėkite lapų gabalėlius (nudažytus ir sveikus gabalėlius), kad paviršių dezinfekuotumėte 20–30 sekundžių. Išmeskite alkoholį ir įpilkite 20% natrio hipochlorito 40-50 sekundžių, jei jie yra ploni lapai, ir padidinkite laiką iki 80 sekundžių, jei tai žievė ir rąstai.

Natrio hipochloritą išmeskite, steriliais žnyplėmis paimkite dezinfekuotus gabalėlius ir padėkite ant terpės paviršiaus (daugiausia 10 vienetų). Nustatykite datą ir inkubuokite 20–30 ° C temperatūroje.

-Dėl vaisių ir gumbų

Jei vaisius yra mėsingas, atidarykite grybelio paveiktus vaisius ir steriliu skalpeliu imkite gabalėlius tiek iš sergančių, tiek iš sveikų dalių ir padėkite ant agaro paviršiaus.

Jei vaisius yra citrusinis, pavyzdžiui, citrina ar apelsinas, jis turi būti atidarytas ir jo sėklos sėjamos.

Kai pažeidžiamas vaisiaus paviršius ir pastebimos sporos, geriausia būtų naudoti lėkštėje tarkavimo būdą; Tai susideda iš sporų palietimo sterilizuota ir atvėsinta L formos mentele ir 2–3 kartus sėjant zigzagą ant agaro.

-Dėl grūdų

Jie dezinfekuojami, kaip aprašyta lapuose, ir vėliau dedami į agarą.

-Šakų ir stiebų

Žievė nulupama, o vėliau sveikos ir sergančios dalies gabalėliai paimami ir sėjami tiesiai į agarą.

Pasėtos plokštelės inkubuojamos aerobiškai 20–30 ° C temperatūroje 72 valandas.

Odos, plaukų ar nagų mėginių sėjos procesas bulvių dekstrozės agare

Mėginiai turėtų būti imami naudojant skalpelio peiliuką Nr. 11, kad būtų galima nupjauti pažeistus plaukus, odos žvynus ar nagus ieškant dermatofitų. Prieš imdami mėginį, plotą reikia dezinfekuoti 70% alkoholio.

-Odos mėginys

Esant žvynuotiems pažeidimams, pažeidimo kraštas turėtų būti subraižytas, nes grybelis ten labiau randamas.

Esant eksudaciniams pažeidimams, mėginys imamas sausu arba šlapiu tamponu. Nedelsdami sėkite į bulvių dekstrozės ar Sabouraud agarą. Venkite transporto priemonių.

Kitas mėginių ėmimo būdas yra Mariat ir Adan Campos kilimų kvadratinė technika. Tokiu atveju paveikta vieta 5 kartus trinama sterilios vilnos gabalėliu, kad vėliau būtų galima auginti.

Mėginį galima dėti tiesiai į auginimo terpę.

-Plaukų pavyzdys

Atsižvelgiant į patologiją, paveikta dalis gali būti nupjauta arba išrauta. Mėginys įdedamas į auginimo terpę.

-Nagų mėginys

Tam tikra paveikto nago dalis gali būti subraižyta ar išpjaustyta. Tai priklausys nuo sužalojimo rūšies.

Prieš sėją mėginį supjaustykite 1 mm gabalėliais, kad padidėtų grybelio sąlyčio su auginimo terpe tikimybė.

Identifikavimo procedūra

Plokštėje gautos kolonijos izoliuojamos mėgintuvėliuose, kuriuose yra bulvių dekstrozės agaro, kad būtų atliktas makroskopinis kolonijų tyrimas (išvaizda, spalva, konsistencija, išsivystymo laipsnis).

Mikroskopinį tyrimą (struktūrų ir jų formacijų stebėjimą) galima atlikti atliekant mikrokultūras arba tiesiogiai stebint mikroskopu tarp skaidrės ir skaidrės.

Kolonijų skaičius

Ši terpė taip pat gali būti naudojama nustatant grybelių ir mielių kiekį augalų, maisto, kosmetikos ar vaistų mėginiuose. Šiuo tikslu naudojamas bulvių dekstrozės agaras, papildytas antibiotikais, tokiais kaip: (chloramfenikolis, chlorotetraciklinas arba abu).

Į sterilų ir tuščią Petri lėkštelę supilkite 1 ml mėginio - geriausia praskiesto -, tada ištirpinkite bulvių dekstrozės agaro padėkliuką ir leiskite atvėsti iki 45 ° C. Supilkite ant Petri lėkštelės ir sukite iki vientisos masės. Leiskite pailsėti, kol sukietės.

Inkubuokite aerobiniu būdu 20–25 ° C (pelėsiai) arba 30–32 ° C (mielėse) 5–7 dienas ar ilgiau, atsižvelgiant į ieškomą grybelio tipą ir mėginio tipą. Inkubacijai abiejose temperatūros srityse gali būti naudojamos dvi plokštelės.

Grybelinių kolonijų skaičiavimas maisto mėginyje. Bulvių dekstrozės agaras, papildytas antibiotikais. Šaltinis: „Pxhere.com“ nuotrauka / 777267

Grybelinių kamienų priežiūra

Bulvių dekstrozės agaras gali būti naudojamas gyvybingoms grybelių padermėms palaikyti keletą metų.

Dėl to grybelis auginamas ant bulvių dekstrozės agaro pleištų, o užaugęs grybelis padengiamas mineraliniu aliejumi. Aliejus turėtų būti sterilizuojamas autoklave 45 minutes, jo klampumas turėtų būti maždaug nuo 300 iki 330 Saybolt. Aliejus turi būti nuo 1 iki 2 cm virš kūgio galo.

QA

Iš kiekvienos paruoštos partijos paimkite 1 arba 2 plokšteles ir inkubuokite 48 valandas 25 ° C temperatūroje arba 96 valandas 20 ° C temperatūroje. Tinkama sterilumo kontrolė yra ta, kurioje kolonijų vystymasis nepastebėtas.

Taip pat gali būti naudojamos žinomos arba sertifikuotos kontrolės atmainos:

Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533. Visais atvejais tikimasi gero augimo.

Nuorodos

1. „Britannia“ laboratorijos. Gliukozės agaro bulvės. 2015.Atsiejama: britanialab.com
2. Neogenų laboratorijos. Bulvių dekstrozės agaras. Galima rasti svetainėje: foodsafety.neogen.com
3. „Insumolab“ laboratorija. Bulvių dekstrozės agaras. Galima rasti: insumolab.cl
4. „Forbes B“, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey ir Scotto mikrobiologinė diagnozė. 12 red. Redakcija Panamericana SA Argentina.
5. Casas-Rincón G. Bendroji mikologija. 1994 m. 2-asis Venesuelos centrinio universiteto leidimas. Venesuelos Karakasas.
6. Aceituno M. Nacionalinės gamybos laboratorijos kompaktiškų miltelių tipo akių šešėlių mikrobiologinės kokybės įvertinimas pagal pamatinį metodą „Pharmacopea Usp 2005.“. Darbai skirti farmacijos chemiko titului gauti. Gvatemalos San Karloso universitetas.
7. Cuétara M. Paviršinių mėginių apdorojimas. Iberoamerikos žurnalas apie mikologiją. 2007; psl. 1–12