KRAUJO AGARAS: PAGRINDIMAS, PANAUDOJIMAS IR PARUOŠIMAS - BIOLOGIJA - 2025

Kraujo agaras yra kietas kultūros terpė praturtintas skirtumas, bet neselektyvūs. Jis naudojamas daugybei mikroorganizmų atsigauti ir augti iš klinikinių mėginių arba subkultūroms.

Daugybė laboratorijoje gautų klinikinių mėginių sėjant turėtų būti klasikinis kraujo agaras; išskyrus išmatų pavyzdžius, kur tai nėra naudinga, nebent jie būtų paruošti su tam tikrais pakeitimais.

Kraujo agaro plokštelė

Šią terpę iš esmės sudaro praturtintas bazinis agaras ir 5% kraujo. Agaro bazė gali kisti priklausomai nuo poreikio, tačiau ją daugiausia sudarys peptonai, amino rūgštys, vitaminai, mėsos ekstraktas, natrio chloridas, agaras.

Kalbant apie kraują, paprastai reikalinga sąlytis su vivariumu, kad būtų galima gauti kraujo iš gyvūnų, tokių kaip avys, triušis ar arklys. Tačiau tai ne visada įmanoma ir kartais naudojamas žmogaus kraujas.

Kraujo agaro terpę galima paruošti laboratorijoje arba įsigyti paruoštos iš tam skirtų kompanijų. Šios terpės paruošimas yra vienas subtiliausių, bet dėl ​​neatsargumo ją ruošiant, partija bus užteršta.

Štai kodėl reikia imtis visų įmanomų atsargumo priemonių ir kokybės kontrolė turi būti atlikta inkubuojant 37 ° C temperatūroje 1 plokštelę kiekvienam paruoštam 100.

Pagrindas

Staphylococcus aureus buvo auginamas ant kraujo agaro. Nathanas skaitydamas „Flickr“ Nathanas R. „Twitter“, per „Wikimedia Commons“. Jau buvo minėta, kad kraujo agaras pasižymi praturtinta, diferencijuota ir neselektyvia terpe. Kiekvienos iš šių savybių pagrindas yra paaiškintas žemiau.

Kraujo agaras yra praturtinta terpė, nes joje kaip 5–10% kraujo yra agaro pagrindas. Abiejuose junginiuose yra daug maistinių medžiagų ir ši savybė leidžia jame augti daugiausiai auginamų bakterijų.

Tas augimas vyksta be apribojimų; dėl šios priežasties jis yra neselektyvus. Tačiau, jei į šią terpę pridedama junginių, kurie užkerta kelią vienų mikroorganizmų augimui ir teikia pirmenybę kitiems, jis tampa selektyvus. Tai taikoma tuo atveju, jei pridedami tam tikrų tipų antibiotikai ar priešgrybeliniai vaistai.

Taip pat kraujo agaras yra diferencinė terpė, nes ji leidžia atskirti 3 tipų bakterijas: beta-hemolizinę, alfa-hemolizinę ir gama-hemolizinę.

Beta hemolitikai yra tie, kurie turi galimybę visiškai lizuoti ar suskaidyti raudonuosius kraujo kūnelius, sudarydami aiškų halogeną aplink kolonijas, todėl jie gamina ß arba ß-hemolizę, o mikroorganizmai vadinami ß-hemoliziniais.

Ss-hemolizinių bakterijų pavyzdžiai yra Streptococcus pyogenes ir Streptococcus agalactiae.

Alfa hemolitikai yra tie, kurie atlieka dalinę hemolizę, kai hemoglobinas oksiduojamas iki methemoglobino, sukurdamas žalsvą spalvą aplink kolonijas. Šis reiškinys žinomas kaip α arba α-hemolizė ir bakterijos klasifikuojamos kaip α-hemolizinės.

Α-hemolizinių bakterijų pavyzdžiai yra Streptococcus pneumoniae ir Streptococcus iš viridans grupės.

Galiausiai yra vadinamosios gama hemolizinės arba neemolitinės bakterijos. Jie auga agare, nesukurdami jame pokyčių. Šis poveikis žinomas kaip γ-hemolizė, o mikroorganizmai yra γ-hemoliziniai.

Γ-hemolizinių bakterijų pavyzdys: kai kurie D grupės Streptococcus (Streptococcus bovis ir Enterococcus faecalis) kamienai.

Programos

Kraujo agaro auginimo terpė yra viena iš dažniausiai naudojamų mikrobiologijos laboratorijoje.

Tarp mikroorganizmų, galinčių augti kraujo agaro terpėje, yra: griežtos aerobinės, fakultatyvinės, mikroaerofilinės, anaerobinės, gramneigiamos ar gramneigiamos bakterijos, greitai augančios arba lėtai augančios bakterijos.

Taip pat auga kai kurios maistinių medžiagų reikalaujančios ar skoningos bakterijos, taip pat grybeliai ir mielės. Panašiai, tai naudinga subkultivuoti ar iš naujo suaktyvinti padermes, kurios metaboliškai yra labai silpnos.

Tačiau kraujo rūšies ir bazinio agaro pasirinkimas priklausys nuo tikėtino mikroorganizmo, kurio įtariama, kad jis pasveiks, ir nuo to, kokiu būdu plokštelė bus naudojama (kultūra arba antiiograma).

Kraujo rūšies pasirinkimas

Kraujas gali būti ėriuko, triušio, arklio ar žmogaus.

Labiausiai rekomenduojamas ėriuko kraujas, su kai kuriomis išimtimis. Pavyzdžiui, norint atskirti Haemophilus rūšis, kur rekomenduojamas arklio ar triušio kraujas, nes ėriuko kraujyje yra fermentų, slopinančių V faktorių.

Mažiausiai rekomenduojamas yra žmogus, tačiau jis dažniausiai naudojamas, galbūt todėl, kad jį lengviausia gauti.

Kraujas turi būti defibribruotas, gautas be jokių priedų ir iš sveikų gyvūnų. Vartojant žmogaus kraują, reikia atsižvelgti į keletą veiksnių:

Jei kraujas bus iš asmenų, kurie sirgo bakterinėmis infekcijomis, jie turės specifinių antikūnų. Tokiomis sąlygomis gali būti slopinamas kai kurių bakterijų augimas.

Jei jis gaunamas iš kraujo banko, jame yra citrato, o jame gali augti tam tikros bakterijos. Kita vertus, jei kraujas patenka iš pacientų, kurie vartoja antibiotikus, jautrių bakterijų augimas gali būti slopinamas.

Ir jei kraujas yra iš diabetu sergančio asmens, gliukozės perteklius trukdo tinkamai vystytis hemolizės įpročiams.

Pagrindinio agaro tipo pasirinkimas

Kraujo agaro paruošimui naudojamas bazinis agaras gali būti labai platus. Tarp jų yra: maistinis agaras, smegenų širdies infuzijos agaras, triptazės sojos agaras, Müeller Hinton agaras, Thayer Martin agaras, Kolumbijos agaras, Brucella agaras, Campylobacter agaras ir kt.

Kraujo agaro panaudojimas pagal bazinę terpę, naudojamą jo paruošimui

Maistinis agaras

Ši bazė yra naudojama mažiausiai, nes joje daugiausia augs nereiklios bakterijos, tokios kaip žarnyno bakterijos, Pseudomonas sp, S. aureus, Bacillus sp. Nerekomenduojama išskirti Streptococcus.

Smegenų širdies infuzijos agaras (BHI)

Tai vienas iš plačiausiai naudojamų kaip kraujo agaro pagrindas, nes jame yra maistinių medžiagų, reikalingų daugumai bakterijų, įskaitant Streptococcus sp ir kitas reikalaujančias bakterijas, augti. Nors nedera stebėti hemolizės modelių.

Avienos kraujas paprastai naudojamas šioje bazėje.

Taip pat gali būti paruošiami kraujo agaro variantai, kur pridedami kiti junginiai tam tikriems mikroorganizmams išskirti. Pavyzdžiui, „Francisella tularensis“ išskirti gali būti naudojamas smegenų širdies infuzijos agaras, papildytas triušio krauju, cistinu ir gliukoze.

Nors cistino telluritas yra naudingas Corynebacterium diphteriae išskyrimui. Galima naudoti žmogaus ar ėriuko kraują.

Pirmajame beta hemolizė bus laikoma siauru halo, o su antruoju - halo bus daug platesnė.

Taip pat ši bazė kartu su bacitracinu, kukurūzų krakmolu, arklio krauju ir kitais praturtinančiais papildais (IsoVitaleX) naudojama Haemophilus sp genties izoliavimui iš kvėpavimo takų mėginių.

Taip pat, jei pridedamas antibiotikų chloramfenikolio - gentamicino ar penicilino - streptomicino derinys su arklio krauju, jis yra idealus norint atskirti daug reikalaujančius patogeninius grybus, net ir gaunant didesnį derlių nei Sabouraud gliukozės agare. Tai ypač naudinga Histoplasma capsulatum izoliacijai.

Trypticase sojos agaras

Ši bazė yra labiausiai rekomenduojama norint geriau stebėti hemolizės modelį ir atlikti diagnostinius tyrimus, tokius kaip optochino taksai ir bacitracinas. Paprastai naudojamas klasikinis kraujo agaras.

Naudodami šią bazę taip pat galite paruošti specialų kraujo agarą Corynebacterium diphteriae su cistino tellurito ir ėriuko krauju .

Panašiai šio agaro derinys su ėriuko krauju ir plius kanamicinas-vankomicinas yra idealus anaerobų, ypač Bacteroides sp.

Miulerio Hintono agaras

Ši bazė, papildyta krauju, naudojama išrankiųjų mikroorganizmų, tokių kaip Streptococcus sp.

Jis taip pat naudingas tokioms bakterijoms kaip Legionella pneumophila išskirti.

Thayeris Martinas Agaras

Ši terpė yra ideali kaip kraujo agaro pagrindas, kai įtariama Neisseria gentis, ypač Neisseria meningitidis, nes N. gonorrhoeae neauga ant kraujo agaro.

Jis taip pat naudojamas jautrumui Neisseria meningitidis nustatyti.

Kolumbijos agaras

Ši bazė puikiai tinka skleisti skrandžio biopsijos mėginius Helicobacter pylori.

Terpė ruošiama pridedant 7% ėriuko kraujo, defibrifikuoto antibiotikais (vankomicinu, trimetoprimu, amfotericinu B ir cefsulodinu), siekiant apriboti kitų tipų bakterijų, kurios gali būti, augimą.

Ta pati bazė, papildyta žmogaus ar ėriuko krauju, nalidikso rūgštimi ir kolistinu, yra naudinga izoliuojant Gardnerella vaginalis. Tai taip pat idealiai tinka įvertinti antimikrobinį jautrumą to paties mikroorganizmo antibiotikams.

Be to, jis naudojamas ruošiant kraujo agarą, skirtą auginti anaerobus, pridedant aminoglikozidų ir vankomicino.

Ši bazė leidžia tinkamai stebėti hemolizės pokyčius.

Brucella agaras

Ši terpė, naudojama kaip kraujo agaro pagrindas kartu su vitaminu K, yra ideali priemonė auginant anaerobines bakterijas. Tokiu atveju rekomenduojama vartoti ėriuko kraują.

Campylobacter agaras

Campylobacter agaras, papildytas 5% avių kraujo ir 5 antibiotikais (cefalotinu, amfotericinu B, trimetoprimu, polimiksinu B ir vankomicinu), yra terpė, naudojama Campylobacter jejuni išskirti išmatų mėginiuose.

Paruošimas

Kiekvienas komercinis namas prideda instrukcijas, kaip paruošti litrą kultūrinės terpės konteinerio gale. Atliekant norimą kiekį, atsižvelgiant į pasirinktą bazinį agarą, galima atlikti atitinkamus skaičiavimus.

Pasverkite ir ištirpinkite

Bazinis agaras yra dehidratuotas (milteliai), todėl jį reikia ištirpinti distiliuotame vandenyje, kurio pH yra 7,3.

Kiekis, nurodytas pasirinktu baziniu agaru, pasveriamas ir ištirpinamas atitinkamame vandens kiekyje kolboje, po to kaitinamas ant vidutinės ugnies ir maišomas sukamaisiais judesiais, kol visi milteliai ištirps.

Sterilizuokite

Ištirpinus, 20 minučių sterilizuokite autoklave 121 ° C temperatūroje.

Kraujo agregatas

Palikdami autoklavą, kolbai leidžiama atvėsti, kol temperatūra svyruos nuo 40 iki 50 ° C; Tai yra temperatūra, kurią palaiko žmogaus oda, ir tuo pačiu metu agaras dar nesukietėjo.

Norėdami tai padaryti, kolba paliečiama ranka ir, jei šiluma yra toleruojama, yra ideali temperatūra įpilti atitinkamą kiekį defibrinuoto kraujo (50 ml kiekvienam litrui agaro). Švelniai sumaišykite, kad homogenizuotumėte.

Kraujo agregacija yra labai svarbi, nes jei tai daroma, kai terpė yra labai karšta, raudonieji kraujo kūneliai suskaidomi, ir terpė nebus naudojama hemolizei stebėti.

Jei jis pridedamas per šaltas, jis sulimpa ir terpės paviršius nebus lygus, kad būtų galima tinkamai įvertinti.

Supilkite į Petri lėkštes

Patiekite steriliuose Petri induose iš karto po to, kai homogenizuojate kraują. Į kiekvieną „Petri“ indą pilama maždaug 20 ml. Ši procedūra atliekama laminaraus srauto gaubte arba šalia degiklio.

Patiekiant kraujo agarą Petri lėkštelėse, lėkštės paviršiuje neturėtų likti oro burbuliukų. Tokiu atveju „Bunsen“ degiklio liepsna greitai praeina per plokštę, kad būtų pašalinta.

Plokštelėms leidžiama sukietėti ir laikomos šaldytuve (2–8 ° C) apverstos iki naudojimo. Prieš naudodami kraujo agaro lėkštes, jie turi būti atvėsinti (leisti pasiekti kambario temperatūrą), kad būtų galima pasėti.

Paruoštos plokštelės trunka maždaug 1 savaitę.

Nuorodos

1. Bayona M. Mikrobiologinės sąlygos Helicobacter pylori kultūrai. Kolonijos „Gastroenterol“ 2013 m .; 28 (2): 94–99
2. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktinė klinikinė mikrobiologija. Kadiso universitetas, 2-asis leidimas. UCA leidinių tarnyba.
3. "Kraujo agaras". Vikipedija, nemokama enciklopedija. 2018 10 10, 14:55 UTC. 2018 12 27, 01:49 en.wikipedia.org.
4. „Forbes B“, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey ir Scotto mikrobiologinė diagnozė. 12 red. Argentina. „Panamericana SA“ redakcija
5. CEDIVET laboratorinės veterinarinės diagnostikos centras. Gvatemala. Galima rasti: trensa.com.
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinė diagnostika. (5-asis leidimas). Argentina, „Panamericana SA“ redakcija