TRYPTICASEIN SOJOS AGARAS: PAGRINDIMAS, PARUOŠIMAS IR PANAUDOJIMAS - BIOLOGIJA - 2025

Sojos agaro triptono arba triptikazės sojos agaro yra kietas kultūros terpė, ir maistinę neselektyvūs. Jis žymimas raidėmis TSA dėl savo akronimo anglų kalba Trypticase Soy Agar. Jį sudaro tripteinas, sojos peptonas, natrio chloridas ir agaro agaras.

Dėl savo didelės maistinės galios jis yra idealus vidutinio sunkumo ir nereikalaujantiems mikroorganizmams auginti. Pagrindinėms kultūroms nerekomenduojama vartoti terpės be papildomų priedų, tačiau ji labai naudinga grynoms padermėms auginti ir išlaikyti gyvybingas.

Trypticasein sojos agaro pleištai vamzdeliuose su bakelito dangteliais. Šaltinis: nuotrauka padaryta autoriaus magistrantūros. Marielsa Gil.

Šis agaras taip pat naudojamas kaip pagrindas paruošti praturtintas terpes, tokias kaip kraujo agaras, ypač kai reikia stebėti hemolizės įpročius ir sumontuoti optochino ir bacitracino taksus, reikalingus atitinkamai diagnozuojant Streptococcus pneumoniae ir Streptococcus pyogenes.

Kita vertus, kartu su antibiotikais naudinga išskirti kliniškai svarbius fakultatyvius ir griežtus anaerobinius mikroorganizmus iš mėginių su mišria flora.

Galiausiai, triptazaseino sojos agaro sudėtis ir jo veikimas atitinka skirtingų farmakopėjų (Europos, Japonijos ir Šiaurės Amerikos) nustatytus reikalavimus.

Pagrindas

Norint tinkamai vystytis bakterijoms, būtinas energijos tiekimas, pavyzdžiui, aminorūgštys, vitaminai, purinės ir pirimidinės bazės.

Šia prasme tripteinas ir sojos peptonas teikia šias maistines medžiagas mikroorganizmams, leisdami jiems visapusiškai vystytis. Tačiau, norint išrankias bakterijas, šį agarą reikia papildyti defibrinuotu krauju arba pašildytu krauju, kad padidėtų jo praturtėjimas.

Kita vertus, jei į terpę pridedami antibiotikai, ji tampa selektyvia terpe. Taip pat galima pridėti 0,6% mielių ekstrakto, kad būtų lengviau atskirti Listeria genties rūšis, tuo tarpu Corynebacterium diphteriae idealiai tinka papildyti cistino telluritu ir ėriuko krauju.

Galiausiai natrio chloridas sukuria terpės osmosinę pusiausvyrą, o agaras suteikia kietą konsistenciją.

Paruošimas

Trypticasein Soy agaro plokštelės

Norint paruošti trypticasein sojos agarą, skaitmeniniu mastu turėtų būti pasveriama 40 g dehidratuotos komercinės terpės. Jis ištirpinamas viename litre distiliuoto vandens kolboje.

Mišinys paliekamas 5 minutes pailsėti, po to nukreipiamas į šilumos šaltinį, kad terpė ištirptų. Jis turėtų būti dažnai maišomas ir virinamas 1 - 2 minutes. Po to terpė 15 minučių sterilizuojama autoklave 121 ° C temperatūroje.

Leiskite atvėsti iki 50 ° C ir paskirstykite į sterilius Petri lėkšteles. Leiskite sukietėti, apverskite, uždėkite ant plokštelių ir laikykite šaldytuve.

Galutinis terpės pH turėtų būti 7,3 ± 0,2.

Reikėtų pažymėti, kad dehidratuota terpė yra šviesiai smėlio spalvos, ją reikia laikyti sausoje vietoje nuo 10 iki 35 ° C.

Savo ruožtu paruoštas agaras yra šviesios gintaro spalvos. Paruoštas plokšteles iki naudojimo reikia laikyti šaldytuve (2–8 ° C).

Prieš naudojimą plokštelės turi pasiekti kambario temperatūrą.

Trypticasein sojos agaro plokštelės, papildytos krauju

Kraujo agaras paruošiamas įpilant 5% defibrinuoto kraujo, atvėsinus triptinį sojos agarą iki 50 ° C. Mišinys homogenizuojamas sukant švelniais judesiais.

Patiekite steriliuose Petri induose. Vidurinė spalva turėtų būti vyšninė raudona.

Trypticasein sojos agaro plokštelės, papildytos pašildytu krauju

Norėdami paruošti TSA pagrindu pagamintą kraujo agarą, atlikite tuos pačius veiksmus, kurie jau aprašyti, tačiau išeidami iš autoklavo leiskite jam pailsėti, kol terpės temperatūra bus maždaug nuo 56 iki 70 ° C. Tuo metu kraujas dedamas ir maišomas, kol terpė pasidaro ruda.

Patiekite steriliuose Petri induose. Terpės spalva yra šokolado ruda.

Trypticasein Soy agaro pleištai

Agra paruošimo procedūra yra tokia pati, kaip aprašyta lėkštelėse, tuo skirtumu, kad, užuot padėjus terpę Petri lėkštelėse, prieš sterilizuojant, ji paskirstoma 10–12 ml tūbelėse su Bakelite dangteliais.

Vėliau mėgintuvėliai autoklavuojami 15 minučių 121 ° C temperatūroje. Išeidami jie pasileidžia atramos pagalba ir jiems leidžiama sukietėti.

Paruošti pleištai sėjami pagal paviršiaus plotą ir yra skirti tam tikriems nereikalaujantiems mikroorganizmams išlaikyti gyvybingumą nustatytą laiką.

Programos

Trypticasein Soy Agar yra naudojamas šiais atvejais:

- Kaip pagrindas paruošti klasikinį kraujo agarą, kuris įprastai naudojamas daugelyje laboratorijų.

- Reikalingų bakterijų išskyrimas.

-Hemolizės modelio stebėjimas.

-Diagnostinių tyrimų atlikimas.

- Kaip pagrindas paruošti specialų kraujo agarą Corynebacterium diphteriae, turint cistino tellurito ir ėriuko kraują.

- Kaip pagrindas paruošti ėriukų kraujo agarą ir plius kanamiciną-vankomiciną anaerobų, ypač Bacteroides sp.

- nereikalaujančių kamienų (Bacterioteca) priežiūrai.

- Aerobinis mikrobų skaičius tiriant vandens, aplinkos, maisto ir kosmetikos mėginių mikrobų ribas.

Sėjama

Mėginius galima sėti tiesiai į Trypticasein Soy Agar, papildyto krauju ar kitais priedais, paviršių. Jis sėjamas išsekimas.

Tuo tarpu mikrobiologinių padermių (bakterijų ar mielių) subkultūrai paprastai naudojami triptazeininės sojos agaro plokštelės be priedų.

QA

Sterilumo kontrolė

Norint patikrinti skirtingų terpių, paruoštų naudojant trippticasein sojos bazinį agarą, sterilumą rekomenduojama: iš kiekvienos paruoštos partijos 1 arba 2 neinokuliuotos lėkštelės ar mėgintuvėliai turėtų būti inkubuojami 37 ° C temperatūroje 24 valandas, kad būtų įrodytas jų sterilumas. Visais atvejais jis neturi likti be augimo.

Jei randama užteršimo, visa partija turi būti išmesta.

Augimo kontrolė

Tinkamam trypticasein sojos agaro veikimui ištirti gali būti naudojamos šios bakterijų padermės: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aerugiosa ATCC 9027 ir Enterococcus faecalis ATCC 29212.

Padermės sėjamos ir aerobiškai inkubuojamos 37 ° C temperatūroje 24 valandas.

Visais atvejais augimas turi būti patenkinamas.

Taip pat gali būti naudojami grybeliai, tokie kaip Candida albicans Complex ATCC 10231 ir Aspergillus niger ATCC 16404. Gero augimo tikimasi iš abiejų padermių.

Trypticasein sojos agaro, papildyto krauju, augimo kontrolė ir hemolizės schema

Norint patikrinti, ar tinkamai paruoštas kraujo agaras, paruoštas naudojant šią bazę, galima naudoti šiuos štamus: Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 ir Streptococcus pneumoniae ATCC 49619.

Jie sėjami ir inkubuojami 37 ° C temperatūroje mikroaerofiliškumu 24 valandas.

Visais atvejais augimas turėtų būti patenkinamas, atsižvelgiant į tai, kad S. pyogenes organizme turėtų būti stebima beta hemolizė (lengvas halogenas aplink koloniją), o abiejuose S. pneumoniae kamienuose turėtų būti stebima alfa hemolizė (žalsvas halogenas aplink koloniją). kolonijos).

Nuorodos

1. Vikipedijos bendradarbiai. Trypticase Aš agaras. Vikipedija, nemokama enciklopedija. 2018 m. Gruodžio 17 d., 15:47 UTC. Galima rasti: https://en.wikipedia.org
2. „Britannia“ laboratorijos. Tripteino sojos agaras. 2015.Atsiejama: britanialab.com
3. Neogenų laboratorijos. Tryptinis sojos agaras. Galima rasti svetainėje: foodsafety.neogen.com
4. „Forbes B“, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey ir Scotto mikrobiologinė diagnozė. 12 red. Argentina. „Panamericana SA“ redakcija
5. BD laboratorijos. Trypticase Aš esu agaras. 2014. Prieinamas: .bd.com