Bismuto sulfito agaras yra kieta terpė selektyvus ir skirtumas kultūra, specialiai sukurta izoliacijos Salmonella enterica porūšis enterica serotipas typhi, tarp kitų rūšių Salmonella. Terpė yra žinoma kaip BSA agaras dėl savo sutrumpinimo angliškai Bismuth Sulfite Agar.
Originalią bismuto sulfito agaro formulę 1927 m. Sukūrė Wilsonas ir Blairas (Gliukozės bismuto sulfito geležies terpė); jame buvo natrio sulfito, gliukozės, bismuto tirpalo, amonio citrato, geležies sulfato ir agaro agaro.
48 valandų Salmonella sp inkubavimo bismuto sulfito agare augimas. Šaltinis: Pixnio.com Autorius: Dr. WR Erving, USCDCP
Šiandien yra modifikuota pirminė terpė, susidedanti iš mėsos ekstrakto, mėsos ir kazeino peptonų, bismuto sulfito indikatoriaus, gliukozės, dinatrio fosfato, geležies sulfato, ryškiai žalios ir agaro-agaro.
Salmonella rūšių išskyrimui yra daug būdų, tačiau atkuriant Typhi serotipą, bismuto sulfito agaras turi pastebimą pranašumą prieš juos, nes dažniausiai šio mikroorganizmo atsigavimas yra labai menkas arba jo nėra. .
Tačiau bandant išskirti enteropatogenus būtina naudoti daugiau nei vieno tipo terpę, nes bismuto sulfito agaras yra mažiau efektyvus kitoms Salmonella rūšims ir Shigella genčiai, kurios slopinamos arba vystosi labai blogai. šiame agare.
Reikėtų pažymėti, kad iš visų Salmonella rūšių Typhi serotipas yra vienas iš svarbiausių enteropatogenų žmonėms, nes tai yra vienintelis jo rezervuaras. Ši serovarka sukelia vidurių šiltinę, gastroenteritą, bakteriemiją ir septicemiją.
Dėl šios priežasties svarbu įtraukti šį agarą analizuojant vandens, išmatų ar maisto mėginius, jei įtariama, kad jo yra.
Pagrindas
Kaip ir daugumoje kultūrinių terpių, bismuto sulfito agare yra maistinių medžiagų, skatinančių bakterijų augimą, tokių kaip peptonai ir mėsos ekstraktas. Taip pat gliukozė veikia kaip energijos ir anglies šaltinis.
Tačiau ne visos bakterijos augs šioje terpėje, nes bismuto sulfito agaras yra selektyvi terpė. Jame yra junginių, kurie slopina gramteigiamų mikroorganizmų ir tam tikrų gramneigiamų bakterijų augimą. Šie junginiai yra: indikatorius bismuto sulfitas ir ryškiai žalia.
Savo ruožtu dinatrio fosfatas palaiko terpės osmoliškumą ir pH.
Papildomai, bismuto sulfito agaras yra skirtumas vidutinių dėka geležies sulfatu, kuris parodo H formavimas buvimo 2 S. H 2 S, sudarytos iš bakterijų reaguoja su geležies sulfatu ir formų aiškiai matomas netirpi juoda nuosėdų.
Galiausiai agaras-agaras terpėje suteikia kietą konsistenciją.
Paruošimas
Pasveriama 52,3 g dehidratuotos terpės ir ištirpinama viename litre vandens. Šildykite mišinį iki virimo 1 minutę, dažnai maišydami, kol jis visiškai ištirps. Neperkaitinkite. Ši terpė nėra autoklavuota, nes didelis karštis kenkia kultūrinei terpei.
Leiskite atvėsti iki 45 ° C ir prieš patiekdami steriliuose Petri induose suplakite. Rekomenduojama gaminti gero storio plokštes. Norėdami tai padaryti, į kiekvieną plokštelę reikia supilti 25 ml. Leiskite sukietėti. Kadangi tai yra nesterilizuota terpė, įprasta nedelsiant ją naudoti.
Tačiau 1977 m. D'aoust atliktas tyrimas parodė, kad geriau yra Salmonella typhimurium ir Salmonella enteritidis, nes vidutinio amžiaus bismuto sulfito agaras atsigauna, o tai neturi įtakos Tyro ir Paratyphi B serumo rodikliams.
D'aoust rekomenduoja plokšteles naudoti 4-ą šaldymo dieną, nors įspėja, kad senstant vidutinis selektyvumas mažėja, o Proteus vulgaris padermės vystosi lengviau.
Dėl šios priežasties labai užterštiems mėginiams, pavyzdžiui, išmatoms, geriau naudoti šviežiai paruoštą terpę. Priešingu atveju naudokite jo paruošimo 4 dieną. Kiti autoriai rekomenduoja naudoti plokšteles kitą dieną po jų paruošimo, laikyti šaldytuve.
Prieš naudojimą atšaldytos plokštelės turi būti atvėsintos. Terpės pH turėtų būti 7,5 ± 0,2. Neapdorota terpė yra smėlio spalvos, o paruošta terpė yra žalsvai pilkos spalvos, opalinės.
Programos
Tarp mėginių, kuriuos galima sodinti šioje terpėje, yra išmatų, geriamojo ar nuotekų ir maisto mėginiai.
Norint pagerinti izoliatus, prieš sėjant į bismuto sulfito agarą, rekomenduojama atlikti išankstinį sodrinimą laktozės sultiniu ir praturtinti tetrationato sultiniu arba cistino selenito sultiniu.
Plokštės inkubuojamos 35 ° C ± 0,2 temperatūroje nuo 24 iki 48 valandų aerobiozės metu.
Bismuto sulfito agaro kolonijų charakteristikos
Salmonella Typhi kolonijos paprastai pastebimos šiame agare per 24 valandas su juodu centru ir apsuptu ryškiai žalios spalvos halo. Tuo tarpu po 48 valandų jie pasidaro visiškai juodi dėl susidariusio vandenilio sulfido.
- Ši terpė slopina daugumą Shigella genties augalų rūšių.
- S. Typhi ir S. arizonae gali duoti labai panašias kolonijas.
-The bendro bakterijų, kurios gamina H 2 S, tokių kaip Proteus ir Cttrobacter gaminti kolonijų, panašios į Salmonella, todėl būtina atlikti biocheminių identifikavimo testus.
- Norint gauti izoliuotas kolonijas, reikia atlikti gerą striamą; Tai yra vienintelis būdas stebėti tipiškas Salmonella genties kolonijų savybes.
QA
Sterilumui kontroliuoti neinokuliuota plokštelė inkubuojama 37 ° C temperatūroje, tikimasi, kad augimas ar spalva nepasikeis.
Kokybės kontrolei žinomos tokios padermės kaip:
Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella Typhi ATCC 19430, Shigella flexneri ATCC 12022, Enterococcus faecalis ATCC 29212.
Manoma, kad Escherichia coli ir Shigella flexneri iš dalies bus slopinamos atitinkamai žalsvai rudos ir rudos kolonijos. Kadangi abi lašišos turi turėti puikų išsivystymą su juodosiomis kolonijomis su metaliniu blizgesiu, o galiausiai Enterococcus faecalis turi būti visiškai slopinamos.
Nuorodos
- Wilsonas, W., ir EM McV. Blairas. Gliukozės bismuto sulfito geležies terpės panaudojimas B. typhosus ir B. proteus išskyrimui. Higienos žurnalas, 1927; 26 (4), 374-391. Gauta iš .jstor.org
- D'aoust JY. Bismuto sulfito agaro laikymo sąlygų poveikis. J Clin mikrobiolis. 1977; 5 (2): 122–124. Galima rasti: ncbi.nlm.nih.gov
- IVD laboratorijos. Bismuto-sulfito agaras pagal WILSON-BLAIR. 2009.Atsiejama: „BismuthSulfitagar_span_Jan_2009% 20“ (2) .pdf
- „Himedia“ laboratorijos. Bismuto sulfito agaras. 2017.Atsiejama: himedialabs.com
- „Forbes B“, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey ir Scotto mikrobiologinė diagnozė. 12 red. Redakcija Panamericana SA Argentina.
- „Morales R“, „de la Cruz D“, „Leyva G“ ir „Ybarra M.“ Žalio ožkų pieno, pagaminto Miravalles mieste, Puebloje, bakteriologinė kokybė. Rev Mex de Ing Quím 2012 m .; 11 (1): 45–54