TCBS agaras yra labai selektyvus ir diferencinės kieto kultūros priemones, naudojamas atskirai ir auginimo bakterijų genties Vibrio, ypač Vibrio cholerae, V. parahaemolyticus ir V. vulnificus kaip pagrindinių patogenų šios rūšies.
Santrumpa TCBS reiškia tiosulfato citrato tulžies sacharozę. Šis agaras taip pat žinomas kaip selektyvi Vibrios terpė. Originalią formulę sukūrė Nakanishi, o vėliau modifikavo Kobayashi.
Prekybinė TCBS terpė ir TCBS agaro plokštelė, pasėta Vibrio cholerae. Šaltinis: 1 nuotrauka: padaryta autoriaus MSc. Marielsa Gil / 2 nuotrauka: „Microrao“, JJMMC, Davangere, Karnataka, Indija
Jį sudaro mielių ekstraktas, mėsos peptonas, tripteinas, natrio citratas, natrio tiosulfatas, jaučio tulžis, sacharozė, natrio chloridas, geležies citratas, bromtimolio mėlynasis, timolio mėlynasis ir agaras.
Ši kompozicija leidžia tinkamai vystytis Vibrio rūšims iš vandens, maisto ir išmatų mėginių; išskyrus Vibrio hollisae, kuris šioje terpėje neauga. Be to, TCBS terpė gali slopinti kitų lydinčių bakterijų, ypač koliforminių, augimą.
Dėl rimtų virškinimo ir žarnyno problemų, kurias sukelia kai kurios Vibrio genties rūšys, jos diagnozė yra labai svarbi. Žmonės užsikrečia daugiausia vartodami žalią ar per mažai maistą iš jūros ar užterštų vandenų, taip pat per žaizdas.
Dėl šios priežasties klinikinės laboratorijos turi įtraukti TCBS agarą į skystų išmatų mėginių kultūros išmatų tyrimus, ypač atsižvelgiant į ryžių vandenį. Ypač tuo atveju, jei pacientas praneša, kad yra buvęs kontaktas su jūros vandeniu arba išgėręs vėžiagyvių ar žuvies.
Pagrindas
Mielių ekstraktas, mėsos peptonai ir tripteinas yra šios terpės maistinis šaltinis. Tačiau TCBS agaras yra netinkama terpė daugumai bakterijų.
Didelis jo selektyvumas atsiranda pridedant natrio citrato ir jautienos tulžies; abi yra slopinamosios medžiagos, kurios terpei taip pat suteikia šarminį pH, ribodamos lydinčios floros augimą ir skatindamos V. cholerae augimą, be kitų rūšių. Reikėtų pažymėti, kad Vibrio cholerae yra labai jautrus rūgštingumui.
Natrio chloridas savo ruožtu osmosiškai balansuoja terpę. Be to, kadangi jo koncentracija yra didelė, jis taip pat veikia kaip slopinantis agentas, skatindamas halogeninių bakterijų dauginimąsi.
Sacharozė yra fermentuojamas cukrus, kuris, kartu su bromtimolio mėlynojo ir timolio mėlynojo pH rodikliais, suteikia terpei diferencinį pobūdį. Dėl šios priežasties su šia terpe galima atskirti sacharozės fermentacijos padermes nuo nefermentuojančių.
Sacharozę fermentuojančių padermių kolonijos įgauna geltonos spalvos spalvą ir dėl rūgšties susidaro terpė nuo žalios iki geltonos. Nefermentatoriai išauga permatomi, o terpė išlieka originalios spalvos (žalia).
Taip pat šioje terpėje yra natrio tiosulfato kaip sieros šaltinio ir geležies citrato kaip besivystančio agento. Abi jos rodo bakterijas, galinčias gaminti vandenilio sulfidą (bespalves dujas). H 2 S yra suformuotas iš tiosulfato, o vėliau ant reaguoja su geležies citratu, matomas juodas nuosėdos formas.
Galiausiai agaras suteikia tvirtą terpės konsistenciją.
Paruošimas
Pasverkite 89 g dehidratuotos terpės ir ištirpinkite viename litre distiliuoto vandens. Padeda tirpinti kaitinant ir dažnai maišant. Mišinį galima virti ne ilgiau kaip 2 minutes.
Ši terpė nėra autoklavuota. Ištirpinus, jis patiekiamas tiesiai ant sterilių plokštelių. Kai jie sukietėja, jie išdėstomi apverstu būdu ant trombocitų ir iki naudojimo laikomi šaldytuve (2–8 ° C).
Paruošta terpė turi išlikti pH 8,6 ± 0,2.
Dehidratuota terpė yra šviesiai smėlio arba žalsvai smėlio spalvos, o terpė - miško žalia arba melsvai žalia.
Prieš sėjant mėginius, svarbu leisti plokštelėms sušilti.
Naudokite
Dažniausias Vibrios išskyrimo pavyzdys yra viduriavimas išmatose.
Išmatų mėginiai, jei jų negalima iš karto sėti į selektyviąją terpę, turėtų būti vežami į Cary Blair terpę.
Norėdami padidinti kultūros jautrumą, išmatos gali būti praleidžiamos per peptono vandenį, kurio pH 8,4 yra kaip sodrinimo terpė, ne ilgiau kaip 8 valandas, iš ten jis subkultūruojamas į TCBS terpę.
Taip pat reikia atsižvelgti į tai, kad kai kurie Vibrios štamai gali sukelti septicemiją pacientams, kuriems nusilpusi imuninė sistema, todėl juos galima išskirti iš kraujo kultūrų. Taip pat gali būti analizuojami vandens ir maisto iš jūros mėginiai, kai yra choleros ligos epidemijos protrūkiai.
Sėjama
Tiriamojo mėginio užpildas turi būti matomas, sėjama sijojimo metodu išnaudojant. Plokštelės 24 valandas inkubuojamos 37 ° C temperatūroje aerobiozėje.
Manoma, kad Vibrio cholerae kolonijos yra vidutinio dydžio, lygios, nepermatomos, dėl sacharozės rūgimo yra plonos briaunos ir geltonos spalvos.
Panašiai auga ir V. alginolyticus, V. fluvialis, V. hareyi, V. cincinnatiensis, V. furnissii, V. metschnikovii ir kai kurie V. vulnificus rūšys. Kitos kliniškai svarbios Vibrios rūšys, tokios kaip V. parahaemolyticus, nefermentuoja sacharozės ir vystosi kaip alyvuogių žaliosios kolonijos.
TCBS agaro plokštelė, pasėta Vibrio parahaemolyticus. Šaltinis: „isis325 Flickr“
Kita vertus, reikia nepamiršti, kad šioje terpėje gali augti kai kurie „Aeromonas“ ir „Plesiomonas“ štamai, kurie yra oksidazės (+), išsivysčius geltonoms kolonijoms, kurios gali supainioti gydytoją. Nors kai kurie Pseudomonas padermės taip pat auga oksidazės (+) pavidalu, kaip žalios kolonijos kaip V. parahaemolyticus.
Ribojimas
Vibrio genčiai teigiamas oksidazės testas niekada neturėtų būti atliekamas iš kolonijų, gautų iš TCBS agaro, nes gautas rezultatas bus klaidingai neigiamas. Viduryje esantys junginiai labai trukdo atlikti šį bandymą. Todėl jis turi būti pagamintas iš subkultūrų ant kraujo agaro.
QA
Norint įrodyti, kad terpė yra geros būklės, patartina sėti žinomus ar sertifikuotus kontrolinius štamus ir stebėti, ar augimas atitinka numatytas savybes.
Tam galite naudoti:
-Vibrio cholerae - patenkinamas augimas (geltonos kolonijos, permatomas kraštas).
-Vibrio parahaemolyticus - patenkinamas augimas (kolonija su žaliu centru ir permatoma kraštu).
-Vibrio alginolyticus ATCC 17749 - patenkinamas augimas (geltonos kolonijos su tos pačios spalvos halomis aplink koloniją).
-Enterococcus faecalis ATCC 29212 - visiškas arba dalinis slopinimas (mažos geltonos arba permatomos kolonijos).
-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853–– dalinis arba visiškas slopinimas (mėlynosios kolonijos).
-Escherichia coli ATCC 25922 - Visiškai slopinamas.
-Proteus mirabilis ATCC 43071 - Visiškas ar dalinis slopinimas. (Mažos kolonijos, žalias centras, permatomas kraštas).
Neinokuliuotos terpės inkubacija turėtų būti nepakitusi.
Nuorodos
- „Difco Francisco Soria Melguizo“ laboratorijos. TCBS agaras. 2009. Prieinamas adresu: f-soria.es
- BD laboratorija. BD. TCBS Agaras 2003. Prieinama šiuo adresu: bd.com
- „Britannia“ laboratorijos. TCBS terpė. 2015.Atsiejama: britanialab.com
- „Acumedia“ laboratorijos. TCBS agaras. 2016. Prieinamas adresu: foodsafety.neogen.com
- „Forbes B“, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey ir Scotto mikrobiologinė diagnozė. 12 red. Redakcija Panamericana SA Argentina.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinė diagnostika. 5-asis leidimas Redakcija Panamericana SA Argentina.