THAYER MARTINO AGARAS: PAGRINDAS, PARUOŠIMAS IR PANAUDOJIMAS - BIOLOGIJA - 2025

„ Thayer Martin “ agaras yra labai maistinga ir kieta selektyvioji terpė Neisseria meningitidis ir Neisseria gonorrhoeae išskyrimui; abi žinomos kaip patogeninės arba kliniškai svarbios Neisserias.

Viena iš svarbiausių Thayer Martin Agaro ypatybių yra didelis maisto papildų kiekis. Ši savybė yra būtina, nes Neisserias yra labai reiklūs mikroorganizmams mitybos požiūriu, todėl neauga įprastose terpėse.

„Thayer Martin“ / Agaras „Thayer Martin“ verslo terpė. Šaltinio vaizdas 1: Parašė autorius MSc. Marielsa Gil, paveikslėlis 2. „Pixinio.com“ bakterializuotas, modifikuotas, „Thayer“, „Martin“, agaras.

Kita vertus, kadangi šie mikroorganizmai paprastai randami nesteriliose vietose, norint užkirsti kelią lydinčiai florai, nepakenkiant Neisseria genties vystymuisi, būtina pridėti inhibitorių.

Šį agarą sudaro GC bazinis agaras, hemoglobinas, papildomi maisto papildai ir slopinamųjų medžiagų (antibiotikų ir priešgrybelinių medžiagų) kompleksas. Komerciniai namai parduoda kiekvieną papildą atskirai.

Šioje terpėje sėjamas mėginys priklausys nuo to, kokio mikroorganizmo ieškoma. Idealūs Neisseria gonorrhoeae pavyzdžiai yra makšties ir šlaplės išskyros. Neisseria meningitidis mėginiai dažniausiai yra CSF, ryklės ir nasopharyngeal eksudatai.

Pagrindas

Neisserijos yra mikroorganizmai, klasifikuojami kaip erzinantys, todėl juos sunku atskirti. Todėl „Thayer Martín“ yra sudėtinga terpė ir kiekvienas jos komponentas atlieka funkciją, kuri paaiškinta toliau:

GC bazinis agaras

GC agare yra peptono proteozės, kukurūzų krakmolo, natrio chlorido, dikalio fosfato, monokalio fosfato ir agaro agaro. Jo komponentai teikia pagrindines maistines medžiagas mikrobų vystymuisi, neutralizuoja toksiškas riebiąsias rūgštis, padeda palaikyti osmosinę pusiausvyrą, nusako pH ir suteikia tvirtą konsistenciją terpėje.

Hemoglobinas

Hemoglobinas suteikia V ir X faktorius (atitinkamai nikotinamido adenino dinukleotidas NAD ir heminas). Dėl šios priežasties šioje terpėje auga ir Haemophilus rūšys. Hemoglobiną komerciniu būdu galima gauti dehidratuota forma arba į terpę galima įpilti šviežio defibrinuoto galvijų kraujo.

Praturtinimo priedas

Kita vertus, į Thayer-Martin terpę taip pat reikia įpilti sodrinimo papildų, nes baziniame agare esančių maistinių medžiagų nepakanka Neisseria genties reikalavimams.

Dažniausiai naudojamas sodrinimo papildas vadinamas izovaleksiniu. Jame yra glutamino, adenino, NAD, kokarboksilazės, guanino, geležies nitrato, p-amino benzenkarboksirūgšties, vitamino B12, tiamino ir gliukozės. Visi šie junginiai yra būtini tinkamam patogeninių neisserijų vystymuisi.

Inhibitoriai

Kadangi tai yra labai maistinga terpė, reikia naudoti inhibitorius, kurie užkerta kelią mikroorganizmų augimui iš įprastos vietovės floros ir tokiu būdu skatina Neisseria genties izoliaciją.

Inhibitorių kompleksą sudaro vankomicinas, kolistinas ir nistatinas. Vankomicinas slopina gramneigiamų bakterijų augimą, kolistinas neleidžia augti gramneigiamoms bakterijoms, tokioms kaip Pseudomonas ir kai kurioms saprofitinėms Neisserijoms, o nistatinas veikia mieles, tokias kaip Candida albicans.

Tačiau vėliau Thayeris Martinas Agaras buvo modifikuotas; pokyčius sudarė trimetoprimo pridėjimas, agaro kiekio padidėjimas ir papildomos gliukozės pridėjimas. Šie pokyčiai žymiai pagerino Neisseria gonorrhoeae rūšių atsigavimą.

Reikėtų pažymėti, kad trimetoprimas slopina Proteus genties augimą ir su tuo susijusį spiečių formavimąsi. Šia prasme Thayer Martin terpei selektyvų pobūdį suteikia antibiotikai.

Paruošimas

Originalus Thayer Martin agaras

-GC agaras

Pasveriama 8,2 g dehidratuotos GC terpės ir suspenduojama 100 ml. Sumaišykite ir virkite 1 minutę, dažnai maišydami, kad visiškai ištirptų. Sterilizuokite mišinį autoklave 121 ° C temperatūroje 15 minučių.

- 2% hemoglobino

Suspenduokite 2 g dehidratuoto hemoglobino 2 arba 3 ml karšto distiliuoto vandens, kol susidarys vientisas mišinys. Įpilkite truputį daugiau vandens, kad tūris būtų 100 ml. Prieš sterilizuojant, suspensija turi būti vienalytė.

Sterilizuokite autoklave 15 minučių.

-Mažinimo papildas

Paruoškite komercinį buteliuką skiedikliu, kurį pateikė ta pati komercinė įmonė. Gerai ismaisyti. Naudojamo skiediklio kiekis bus nurodytas rinkinio instrukcijose.

-VCN slopinimo papildas (vankomicinas, kolistinas, nistatinas)

Paruoškite buteliuką su skiedikliu, kurį pateikė komercinė įmonė. Gerai ismaisyti. Naudojamo skiediklio kiekis bus nurodytas rinkinio instrukcijose.

-Paruošta

Kiekvienam 100 ml GC agaro daroma taip:

Kai GC agaras išeina iš autoklavo, leiskite jam atvėsti iki maždaug 50 ° C temperatūros ir įpilkite 2 ml paruošto hemoglobino tirpalo, 2 ml sodrinimo papildo (izobitalekso arba britalekso) ir 2 ml slopinimo priedo. Sumaišykite ir patiekite steriliuose Petri induose.

Leiskite sukietėti ir laikykite šaldytuve iki naudojimo.

Paruoštos terpės spalva yra vyšninė raudona. Galutinis terpės pH yra 7,2 ± 0,2

Modifikuotas Thayer Martin agaras

Pasveriama 8,2 g dehidratuotos GC terpės ir suspenduojama 100 ml. Įpilkite 1 g agaro-agaro ir įpilkite 0,3 g gliukozės. Sumaišykite ir virkite 1 minutę, dažnai maišydami, kad visiškai ištirptų. Sterilizuokite mišinį autoklave 121 ° C temperatūroje 15 minučių.

Paruoškite hemoglobino ir sodrinimo priedą, kaip aprašyta anksčiau.

Naudojamas slopinimo priedas yra VCNT (vankomicinas, kolistinas, nistatinas, trimetoprimas).

-Paruošta

Tęskite taip, kaip aprašyta pradiniame Thayer Martin agare.

Naudokite

Thayer Martinui Agarui turėtų būti leista sušilti, kol mėginiai bus dryžuoti. Dažniausiai naudojami ryklės tamponai, nosies tamponai, makšties, šlaplės ir (arba) tiesiosios žarnos išskyros ir CSF.

Paimkite šviežius mėginius ir užmaukite stiprius užpilus agare. Mėginiai sėjami tiesiogiai išleidžiant medžiagas, o paskui išmatos įtempiamos ant paviršiaus.

Plokštelės inkubuojamos 35–37 ° C temperatūroje 24–48 valandas mikroaerofiliniame inde (5% CO ₂ ). Inkubacijai pasibaigus, plokštelės tiriamos, ar nėra mažų, pilkų ir kartais į mucoidą panašių kolonijų.

Atlikite įtartinų kolonijų Gram ir patvirtinamuosius biocheminius tyrimus.

QA

Thayer Martin Agar kokybės kontrolei gali būti naudojami šie mikrobų štamai.

Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 ir Neisseria meningitidis ATCC 13090; tikimasi patenkinamo vystymosi abiejose padermėse.

Taip pat turėtų būti įtrauktos šios padermės: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 ir Candida albicans ATCC 10231. Visose šiose terpėse tikimasi visiško ar dalinio slopinimo.

Apribojimai

- Turime nepamiršti, kad terpėje gali augti bakterijos, atsparios naudojamiems inhibitoriams.

- Yra Neisseria gonorrhoeae padermių, kurios gali būti jautrios naudojamo vankomicino koncentracijai. Dėl šios priežasties rekomenduojama naudoti šokolado agarą, papildytą izovaleksalu, bet be inhibitorių.

-Yra nistatinui atsparių mielių padermių, kurios gali augti šioje terpėje ir trukdyti išskirti patogenines Neisserias, ypač gonokokus.

Nuorodos

1. „Valtek“ diagnostikos laboratorijos. „Thayer-Martin Agar“, 2016 m. Galima rasti: com
2. „Britannia“ laboratorijos. „Thayer Martin“ vidutinio modifikavimo. 2010.Automa: britanialab.com
3. Vikipedijos bendradarbiai. Thayerio-Martino agaras. Vikipedija, nemokama enciklopedija. 2017 m. Spalio 26 d., 16:33 UTC. Galima rasti: wikipedia.org 4. Prisijungta 2019 m. Vasario 28 d.
4. „Britannia“ laboratorijos. GC agaras. 2010.Automa: britanialab.com.
5. Laboratorijos BBL ™ vidutinis sodrumas išrankiems mikroorganizmams. 1999. Galima rasti: bd.com
6. „Forbes B“, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey ir Scotto mikrobiologinė diagnozė. 12 red. Redakcija Panamericana SA Argentina.