RYŠKIAI ŽALIAS AGARAS: PAGRINDIMAS, PARUOŠIMAS IR PANAUDOJIMAS - BIOLOGIJA - 2025

Briliantinis žaliasis agaras yra kietas kultūros terpė su dideliu selektyvumą. Jis naudojamas išskirtinai Salmonella genties kamienams išskirti, tačiau yra keletas išimčių, pavyzdžiui, tyfio ir paratyphi rūšys, kurios neauga šioje terpėje.

Salmonella genties dažnai ieškoma išmatų, vandens ar maisto mėginiuose. Šia prasme ši terpė gali būti labai naudinga. Šį agarą 1925 m. Sukūrė Kristensenas, Lesteris ir Jurgenas, vėliau jį modifikavo Kauffmannas.

Ryškiai žalias agaras. Fermentuojančios ir nefermentuojančios kolonijos. Šaltinis: MJ Richardson / Nematomų pasaulių paroda - 2012geograph.org.uk/photo/2815842 „Creative Commons“ licencija.

Jį sudaro pluripeptonai iš pepsinio gyvūninių audinių ir kasos virškinimo kazeino, jame taip pat yra mielių ekstrakto, natrio chlorido, laktozės, sacharozės, fenolio raudonos, ryškiai žalios ir agaro agaro.

Būdinga tai, kad daugumai bakterijų tai yra gana nenuosekli aplinka, palanki salmonelių augimui, tačiau kai kurios koliformos gali jose išlikti, silpnai vystytis.

Svarbu pažymėti, kad Shigella gentis neauga šioje terpėje, nei Salmonella typhimurium, nei Salmonella paratyphi. Todėl, jei norite išskirti šiuos mikroorganizmus, reikėtų naudoti kitas terpes, tokias kaip XLD agaras.

Pagrindas

Ryškiai žalias agaras

Kiekvienas iš terpės komponentų atlieka specifinę funkciją, kuri lemia agaro savybes ir savybes.

Pluripeptonai ir mielių ekstraktas yra maistinių medžiagų šaltinis, iš kurio mikroorganizmai pasiima jų vystymuisi reikalingą azotą ir mineralus. Laktozė ir sacharozė yra energijos šaltiniai mikroorganizmams, kurie sugeba juos fermentuoti.

Ryškiai žalia yra slopinamoji medžiaga, neleidžianti augti gramteigiamoms bakterijoms ir daugybei gramneigiamų mikroorganizmų.

Natrio chloridas suteikia osmosinį stabilumą terpei. Fenolio raudonasis yra pH indikatorius, tačiau jis pasikeičia spalva, kai aptinkama rūgšties gamyba iš angliavandenių fermentacijos.

Nefermentuojančios laktozės ir sacharozės kolonijos šioje terpėje auga rausvos arba skaidrios baltos spalvos, raudoname fone. Pavyzdžiui, Salmonella genties bakterijos.

Kol laktozę arba sacharozę fermentuojančios bakterijos, galinčios augti šioje terpėje, žalsvai geltoname fone išsivysto geltonai žalios arba geltonai žalios kolonijos. Pavyzdžiui, Escherichia coli ir Klebsiella pneumoniae.

Ryškiai žalio agaro (BGA) variantai

Yra ir kitų ryškiai žalio agaro variantų; Novobiocino briliantinės žaliosios gliukozės (NBG) agaras ir Novobiocino briliantai žalios glicerolio laktozės (NBGL) agaras.

Novobiocino ryškiai žalios spalvos gliukozės agaras

Sudėtyje yra triptazės sojos agaro, geležies amonio citrato, natrio tiosulfato pentahidrato, fenolio raudonojo, gliukozės, ryškiai žalios, novobiocino ir distiliuoto vandens.

Jis naudojamas salmonelių kolonijoms išskirti iš išmatų mėginių.

Šiuo atveju ryškiai žalia ir novobiocinas yra slopinamosios medžiagos, kurios neleidžia augti gramteigiamoms bakterijoms ir kai kuriems gramneigiamiems mikroorganizmams.

Natrio tiosulfatas yra sulfido šaltinis, o geležies citratas yra geležies šaltinis, kurie abu yra būtini norint parodyti vandenilio sulfido susidarymą susidarant juodojo geležies (sulfato) sulfido nuosėdoms.

Gliukozė yra fermentuojamas angliavandenis, o fenolio raudona - pH rodiklis.

Šioje terpėje išsivysto didelės Salmonella kolonijos, kurių juodas centras yra apsuptas rausvai halo, o po juo yra aiškiai matoma sritis. Kai kurios Citrobacter freundii padermės sukuria tokias pat kolonijas, kaip Salmonella.

Novobiocin briliantinis žalias glicerolio laktozės agaras (NBGL)

Šioje terpėje yra triptazės sojos agaro, geležies amonio citrato, natrio tiosulfato, laktozės, glicerolio, ryškiai žalios spalvos, novobiocino ir distiliuoto vandens.

Skirtumas tarp šios ir ankstesnės terpės yra tas, kad gliukozė yra pakeista laktoze, o glicerolis, o fenolio raudona nenaudojama.

Terpė taip pat naudojama Salmonella rūšims išskirti, dėl vandenilio sulfido susidarymo kolonijos išsivysto juodai.

Tik kolonijos, kad pagamina ne rūgšties iš glicerolio arba laktozės pasiekti pakankamai H ₂ S gamybą , nes žemo pH interferuoja su H ₂ S formavimo . Šis rezultatai bespalvį kolonijų daugumos rūšių „Proteus“ ir „Citrobacter“.

Paruošimas

- Pasverkite 58 gramus komerciškai gautos dehidratuotos terpės. Įpilkite į litrą pakartotinai distiliuoto vandens. Sumaišykite, leiskite pastovėti kelias minutes ir padėkite mišinį ant šilumos šaltinio, kol jis visiškai ištirps.

-Autoklavas 121 ° C temperatūroje 15 minučių, neviršykite sterilizacijos laiko.

- Leiskite pailsėti ir patiekite karštą steriliuose Petri induose. Galutinis pH turėtų būti 6,9 ± 0,2.

- Leiskite sukietėti ir laikykite šaldytuve iki naudojimo. Prieš sėjant lėkštes reikia palaikyti kambario temperatūrą.

- Miltelių pavidalo terpė yra žalios spalvos ir paruošta, atsižvelgiant į pH ir komercinę įmonę, įgauna oranžinės-rudos arba rausvai žalios spalvos. Labai ruda spalva rodo, kad agaras buvo perkaitęs.

-Agarui sukietėjus, nerekomenduojama išdėstyti nauja redakcija, nes terpė blogėja.

Naudojimas / programos

Ši terpė naudojama Salmonella genties padermių paieškai, be kita ko, išmatose ir pieno produktuose.

Kadangi tai gana nenuodinga aplinka, patartina sėti gausų užpilą, jei naudojamas tiesioginis mėginys. Priešingu atveju prieš sėjant į šią terpę, bandiniai turėtų būti iš anksto praturtinti ir praturtinti.

Kadangi kai kurios Salmonella padermės slopinamos arba auga sunkiai, patartina šią terpę papildyti kitu selektyviu agaru, skirtu Salmonella.

Kiekvienai kolonijai, kuriai būdingos salmonelėms būdingos savybės, reikia atlikti biocheminius bandymus, kad būtų galima galutinai identifikuoti.

QA

Norint patikrinti, ar ryškiai žalio agaro terpė veikia gerai, ATCC padermės gali būti naudojamos stebėti, kaip jos vystosi.

Kokybės kontrolei naudojamos dažniausios padermės: Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Escherichia coli ATCC 25922, Shigella flexneri ATCC 12038, Staphylococcus.

Pirmieji 3 turėtų duoti rausvos arba skaidrios baltos kolonijos raudoname fone. Gerai išsivysčiusios salmonelės ir mažai ar reguliariai augantis baltymas.

Tikimasi, kad Klebsiella ir Escherichia geltonai žalios kolonijos bus geltonos spalvos, o Shigella ir Staphylococcus atveju jos turėtų būti slopinamos.

Dehidratuota terpė turi būti laikoma kambario temperatūroje, sausoje vietoje, nes terpė yra labai higroskopiška.

Nuorodos

1. „Laboratorio Difco Francisco Soria Melguizo SA“ nuostabus žalias agaras. 2009 metai
2. Britanijos laboratorija. Ryškiai žalias agaras. 2015 metai.
3. BD laboratorija. BD Briliantinis žalias agaras. 2013 metai.
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinė diagnostika. (5-asis leidimas). Argentina, „Panamericana SA“ redakcija
5. „Forbes B“, Sahm D, Weissfeld A. 2009. „Bailey & Scott“ mikrobiologinė diagnozė. 12 red. Argentina. „Panamericana SA“ redakcija