VOGEL-JOHNSON AGARAS: PAGRINDIMAS, PARUOŠIMAS IR PANAUDOJIMAS - BIOLOGIJA - 2025

Agaro Vogel-Johnson yra kieta terpė selektyvus ir skirtumas kultūra, specialiai suformuoti Staphylococcus aureus izoliacijos. Šią terpę 1960 m. Sukūrė Vogelis ir Johnsonas, pakeitę tellurino glicino agarą, kurį 1955 m. Suformulavo Zebovitz, Evans ir Niven.

Modifikacija buvo padidinta terpėje esančio manitolio koncentracija ir įtrauktas pH rodiklis. Dabartinę formulę sudaro tripteinas, mielių ekstraktas, manitolis, dikalio fosfatas, ličio chloridas, glicinas, fenolio raudonasis, agaras, 1% kalio tellurito tirpalas ir vanduo.

Šaltinis: Pixinio.com/Laboratorio de la Clínica ProcreaTec. Flickr.

Reikėtų pažymėti, kad yra ir kitų terpių, tokių kaip sūrus manitolio agaras ir Bairdo Parkerio agaras, kaip ir Vogelio-Johnsono agaras, selektyvūs S. aureus išskyrimui. Šia prasme galima būtų pasakyti, kad Vogel-Johnson agaro pagrindas yra sūrus manitolio agaras ir Baird Parker agaras.

Pirmajame S. aureus kolonijos išsiskiria fermentuojant manitolį ir paverčiant pH indikatorių geltona. Kita vertus, antrajame S. aureus būdingas tellurito redukcija į telurį ir pilkų iki juodų kolonijų susidarymas. Abi savybės stebimos Vogel-Johnson agare.

Ši terpė, kaip ir jos kolegos, yra naudinga Staphylococcus aureus aptikti maisto mėginiuose, pramoninių gaminių sanitarinėje kontrolėje ir klinikiniuose mėginiuose.

Pagrindas

Maistinių medžiagų tiekimas

Vogel-Johnson terpėje yra tripteino ir mielių ekstrakto; Abi medžiagos suteikia ilgos grandinės aminorūgštis, kurios yra anglies ir azoto šaltiniai, reikalingi bakterijoms augti. Bakterijos, galinčios augti šioje terpėje, pasiims maistines medžiagas iš šių medžiagų.

Atrankinė galia

Vogel-Johnson agaras gali slopinti gramneigiamų bakterijų ir net kai kurių gramneigiamų bakterijų augimą, skatindamas koaguliazės teigiamų stafilokokų vystymąsi. Slopinamosios medžiagos yra kalio telluritas, ličio chloridas ir glicinas.

Diferencialinė galia

Medžiagos, kurios sudaro šią diferencinę terpę, yra manitolis ir kalio telluritas. Manitolis yra angliavandenis, ir kai jis fermentuojamas, susidaro rūgštys, kurios daro terpę nuo raudonos iki geltonos, o tai įvyksta dėl raudonojo fenolio pH indikatoriaus.

Tuo tarpu bespalvis telluritas, redukuojant jį į laisvą metalinį telūrį, įgauna nuo tamsiai pilkos iki juodos spalvos.

Staphylococcus aureus fermentuoja manitolį ir mažina tellurito kiekį iki telurio. Dėl šios priežasties tipiškos S. aureus kolonijos šioje terpėje yra pilkos arba juodos, apsuptos geltona terpe.

Bakterijos, augančios šioje terpėje ir nesumažinančios tellurito ar fermentuojančio manitolio, dėl terpės šarminimo naudojant peptonus suformuos skaidrias kolonijas, apsuptas raudonos spalvos terpės, netgi intensyvesnės už pradinę spalvą.

Kita vertus, bakterijos, mažinančios telluritą, bet nefermentuojančios manitolio, augs kaip pilkos arba juodos kolonijos, apsuptos giliai raudona terpe.

Jei terpė būtų paruošta be kalio tellurito, S. aureus kolonijos vystytųsi kaip geltonos kolonijos, apsuptos geltona terpe, kaip ir sūriame manitolio agare.

Osmosinis balansas ir kietėjantis agentas

Dikalio fosfatas palaiko terpės osmosinę pusiausvyrą ir sureguliuoja pH iki neutralumo. 7.2. Kol agaras suteikia terpėje kietą konsistenciją.

Paruošimas

1% m / v kalio tellurito tirpalas

Šis tirpalas neįeina į dehidratuotą terpę, nes jo negalima sterilizuoti autoklave. Dėl šios priežasties jis paruošiamas atskirai ir pridedamas prie jau sterilizuotos terpės.

Kai kuriuose komerciniuose namuose parduodamas paruoštas naudoti 1% kalio tellurito tirpalas. Jei norite paruošti laboratorijoje, atlikite šiuos veiksmus:

Pasverkite 1,0 g kalio tellurito ir išmatuokite 100 ml distiliuoto vandens. Kalio telluritą ištirpinkite toje vandens dalyje ir užpilkite vandens kiekiu, kol pasieksite 100 ml. Sterilizuokite tirpalą filtravimo metodu.

Vogel-Johnson agaro bazinė terpė

Pasverkite 60 g dehidratuotos terpės ir ištirpinkite 1 litre distiliuoto vandens. Mišinys kaitinamas iki virimo, kad būtų galima visiškai ištirpti. Tirpinimo metu terpė dažnai maišoma.

Sterilizuokite autoklave 15 svarų slėgyje ir 121 ° C temperatūroje 15 minučių. Išimkite iš autoklavo ir leiskite jam pailsėti, kol terpė pasieks maždaug 45–50 ° C temperatūrą. Įpilkite 20 ml anksčiau paruošto 1% kalio tellurito tirpalo.

Sumaišykite ir supilkite į sterilius Petri indus. Leiskite sukietėti ir uždėkite apverstą ant plokštelių laikiklių, kad vėliau galėtumėte laikyti šaldytuve iki naudojimo.

Galutinis paruoštos terpės pH turėtų būti 7,2 ± 0,2.

Prieš sėjant mėginį, palaukite, kol plokštelė pasieks kambario temperatūrą.

Paruoštos terpės spalva yra raudona.

Naudokite

Nors jis gali būti naudojamas S. aureus išskirti iš bet kokio tipo mėginių, jis daugiausia naudojamas farmacinių produktų, kosmetikos ir maisto produktų mikrobiologinei analizei.

Inokuliantą rekomenduojama naudoti tankiai. Sėti galima darant rankeną su platinos rankena arba paviršiumi su Drigalski mentele.

Plokštelės inkubuojamos 35–37 ° C temperatūroje 24–48 valandas aerobiozės metu.

QA

Kokybės kontrolei Vogel-Johnson terpėje gali būti naudojamos šios kontrolės atmainos:

Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 arba Proteus mirabilis ATCC 43071.

Laukiamas toks rezultatas: S. aureus padermių augimas patenkinamas, kai juodosios kolonijos yra apsuptos geltona terpe. Sergant S. epidermidis, reguliariai auga permatomos arba juodos kolonijos, apsuptos raudona terpe.

Panašiai tikimasi visiško E. coli slopinimo ir dalinio ar visiško Proteus mirabilis slopinimo; jei jis augs, tai darys saikingai, o kolonijos bus juodos, raudonos spalvos.

Nuorodos

1. BD laboratorijos. V. J. (Vogelis ir Johnsonas Agaras). 2006. Prieinamas: bd.com
2. „Britannia“ laboratorijos. Vogelis- Johnsono agaras. 2015.Atsiejama: britanialab.com
3. „Britannia“ laboratorijos. Kalio telluritas. 2015.Atsiejama: britania.com
4. „Himedia“ laboratorija. Vogel- Johnsono agaro terpė. 2018.Automa: himedialabs.com/TD/MU023.pdf
5. „Vogel- Johnson Agaro bazė“. „Merck“ mikrobiologijos vadovas. 12-asis leidimas, p. 502-503. Galima rasti: Vartotojai / Komanda / Siuntiniai
6. „Wikipédia“ bendradarbiai „Ágar Vogel Jonhson“, „Wikipédia“ nemokama enciklopedija, kurią galima rasti: wikipedia.org.
7. Venesuelos standartinis koveninas 1292–89. (1989). Maistas. Staphylococcus aureus išskyrimas ir išvardijimas. Galima rasti: sencamer.gob.ve