XLD AGARAS: PAGRINDIMAS, PARUOŠIMAS IR PANAUDOJIMAS - BIOLOGIJA - 2025

XLD agaro arba ksilozė lizinas desoxycholate agaro terpėje yra selektyvus ir skirtumas kieta kultūra izoliuoti enteropatogenų. Taylor sukūrė XL agaro (ksilozės, lizino) formulę, kad pagerintų Shigella genties izoliaciją.

Jis pastebėjo, kad ši gentis buvo slopinama daugumoje terpių, skirtų enteropatogenams išskirti. Vėliau, siekiant padidinti jo selektyvumą, buvo pridėta natrio deoksicholato, natrio tiosulfato ir geležies amonio citrato. Ši formulė pasirodė esanti naudinga izoliuojant Shigella ir Salmonella.

Shigella, salmonelių ir koliformų kolonijų skirtumai XLD agare. A. Shigella sp, B. Salmonella sp, C. Coliforms. Šaltiniai: A. Autorius: CDC / Amanda Moore, MT; Toddas Parkeris, PhD; Audra Marsh, mandagumas: Visuomenės sveikatos vaizdų biblioteka. JJ ūkininkas, malonumas: visuomenės sveikatos vaizdų biblioteka

XLD agarą sudaro mielių ekstraktas, natrio deoksicholatas, ksilozė, lizinas, laktozė, sacharozė, natrio tiosulfatas, geležies amonio citratas, natrio chloridas, fenolio raudonasis ir agaras. XLD agaro ir SS agaro duetas yra naudojamas daugumoje bakteriologijos laboratorijų tiriant išmatų mėginius Šigella ir salmonelėms nustatyti.

Kitos laboratorijos, be kitų galimų variantų, renkasi CHROMagar Salmonella ir XLD agaro derinį. Šiuos duetus galima paruošti dvigubais „Petri“ patiekalais. Iš vienos pusės jie deda XLD agarą, o iš kitos pusės - kitą pasirinktą terpę.

Pagrindas

-Nepareigojanti galia

XLD agaras turi mielių ekstraktą, kuris yra maistinių medžiagų šaltinis mikroorganizmams, kurie auga šiame agare. Be to, angliavandeniai (ksilozė, sacharozė ir laktozė) suteikia energijos bakterijoms, kurios gali jas fermentuoti.

- Terpės selektyvumas

Kaip slopinanti medžiaga, jame yra natrio deoksicholato; Tai užkerta kelią gramteigiamų bakterijų augimui, suteikia terpei selektyvų pobūdį.

-Diferencinė galia

Tipiškos Shigella kolonijos

Kaip jau minėta, XLD agare yra ksilozės; Šį angliavandenį fermentuoja visos šioje terpėje augančios bakterijos, išskyrus Shigella gentį.

Tai yra viena iš savybių, suteikiančių jai skirtingą pobūdį, nes Shigella kolonijos išsiskiria iš kitų, plėtojant raudonas kolonijas, o kitos bakterijos sukuria geltonąsias kolonijas.

Tipiškos salmonelių kolonijos

Salmonella gentis taip pat fermentuoja ksilozę, iš pradžių sudarydamas geltonąsias kolonijas. Tačiau, išeikvojęs angliavandenių ksilozę, jis puola liziną dėl jo fermento lizino dekarboksilazės. Lizino dekarboksilinimas sukuria šarmus, kurie kolonijos ir ją supančios terpės spalvą paverčia pradine raudona.

Tokį elgesį vykdo tik salmonelės, nes koliformos, kurios dekarboksilina liziną, negali šarminti terpės. Taip yra todėl, kad koliformos fermentuoja ir esančią laktozę bei sacharozę; todėl rūgščių gamyba yra labai didelė, todėl šiose bakterijose liko geltonoji kolonija.

Reikėtų pažymėti, kad Salmonella gentis nefermentuoja sacharozės ar laktozės.

H gamyba

XLD agaro taip pat leidžia aptikti H ₂ S- gaminti Salmonella rūšių ; Tam jis remiasi sieros šaltiniu, kurį atstovauja natrio tiosulfatas, ir reakcijos vystikliu, kuris yra geležies amonio citratas.

Pastarieji reaguoja su H ₂ S (bespalvis dujų) ir formų matomas netirpi juoda nuosėdoms, iš geležies sulfato. Šia prasme salmonelių kolonijų savybės bus raudonos su juodu centru.

Reikia pažymėti, kad H ₂ S formavimas reakcija į atsirasti , šarminė pH yra reikalingas. , Kad yra, kodėl kita Enterobacteriaceae, kad forma H ₂ S negali tai padaryti arba tai padaryti prastai šioje terpėje, nuo didelio rūgštingumo, pagamintos fermentuojant angliavandenių kiekis, esantis slopina, ar trukdo reakcijos.

-Natrio chloridas, agaras ir fenolio raudona spalva

Galiausiai natrio chloridas palaiko osmosinę pusiausvyrą; agaras yra kietėjantis agentas, o fenolio raudonasis nustato pH pokyčius, pakeisdamas kolonijų ir terpės spalvą.

Paruošimas

Pasveriama 55 g dehidratuotos XLD terpės ir ištirpinama 1 litre vandens. Šildykite ir maišykite mišinį, kol jis pasiekia virimo temperatūrą. Neperkaitinkite, nes šiluma sugadina terpę ir sukuria nuosėdas, kurios keičia tipiškų kolonijų morfologiją.

Ši terpė neturi būti autoklavuota. Tirpstant jis turi būti perpilamas į vandens vonią 50 ° C temperatūroje. Atvėsus, jis turėtų būti patiekiamas tiesiai ant sterilių Petri patiekalų. Jie gali būti pilami į atskiras arba dvigubas plokšteles. Jie paliekami sukietėti ir iki naudojimo laikomi šaldytuve.

Prieš naudojimą atšildykite. Kadangi tai yra nesterili terpė, ją rekomenduojama paruošti arti vartojimo dienos.

Galutinis terpės pH turėtų būti 7,4 ± 0,2. Paruošta terpė yra oranžinės raudonos, permatomos, be nuosėdų.

Jei turite ksilozės lizino (XL) bazinį agarą, galite pridėti natrio deoksicholato, natrio tiosulfato ir geležies amonio citrato. Tokiu būdu gaunama XLD agaro formulė.

Programos

XLD agaras naudojamas enteropatogenų, daugiausia Shigella genties, o antrą kartą - Salmonella genties, atkūrimui. Tai naudinga norint įvertinti išmatų, vandens ir maisto mėginius.

Mėginių tipai

Išmatos

Išmatų mėginius galima sėti tiesiai į XLD agarą, gerai paskirstant medžiagą, kad gautumėte izoliuotas kolonijas.

Norint pagerinti salmonelių atsistatymą, XLD agarą galima perbraukti iš Salmonella praturtinimo terpės.

Maistas

Maistui gali būti naudojami sodrinimo sultiniai, skirti Salmonella ir Shigella. Salmonelėms, be kitų, galite naudoti selenito cistino sultinį, ryškiai žalią tetrationato sultinį.

Shigella atveju jis gali būti praturtintas Shigella sultiniu 0,5 μg / ml novobiocino, inkubuojamas 42 ° ± 1 ° C temperatūroje 16-20 valandų.

Vanduo

Atliekant vandens analizę, be kita ko, rekomenduojama naudoti membranos filtravimo metodą ir naudoti XLD agarą.

Sodinimo ir identifikavimo sąlygos

Pasėta terpė inkubuojama aerobiškai 35 ° C temperatūroje nuo 24 iki 48 valandų.

Stebimos tipiškos kiekvienos genties kolonijos, kad būtų galima nustatyti įtartinas kolonijas, turėtų būti atlikti biocheminiai tyrimai.

QA

Norint įvertinti terpės kokybės kontrolę, gali būti naudojamos šios bakterijų padermės: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella abony DSM 4224, Shigella flexneri ATCC 12022, Shigella sonnei ATCC 25931, Escherichia coli ATCC 25971, Proteus miCi303. , Klebsiella pneumoniae ATCC 33495.

Salmonella genčiai būdinga tai, kad šioje terpėje yra raudonos kolonijos su juodu centru arba visiškai juodos kolonijos. Kadangi Shigella gentyje kolonijos turi būti raudonos, tai yra terpės spalva.

Escherichia coli atveju tikimasi, kad jis bus visiškai arba iš dalies slopinamas; jei jis auga, kolonijos yra geltonos. Tikimasi, kad Proteus mirabilis augimas bus silpnas su rožinėmis kolonijomis su juodu centru arba be jo. Galiausiai Klebsiella gentis išaugs kaip geltonos kolonijos.

Galutinės mintys

XLD agaras yra plačiai naudojamas bakteriologijos laboratorijose dėl jo didelio efektyvumo atgaunant Shigella, be to, jis gerai atstato Salmonella gentį.

Rall ir kt. (2005) savo darbe „Trijų sodrinimo sultinių ir penkių kietų terpių, skirtų aptikti naminių paukščių salmonelę, įvertinimas“ parodė, kad iš trijų išbandytų klasikinių terpių (ryškiai žalias agaras, SS agaras ir XLD agaras) , Geriausias buvo XLD agaro atsigavimo laipsnis.

Atsigavimo procentai buvo tokie: 13,8% ryškiai žaliam agarui, 27,6% SS ir 34,5% XLD. Rambacho agarą su 48% atsistatymu ir CHROMagar su 79,3% aplenkė tik chromogeninės terpės.

Nuorodos

1. Maistu plintančios ligos. Šigeliozė. Galima rasti: anmat.gov.ar
2. "XLD agaras". Vikipedija, nemokama enciklopedija. 2019 vasario 9, 11:46 UTC. 2019 m. Balandžio 10 d., 19:25 wikipedia.org
3. BBL laboratorijos. „CHROMagar Salmonella“ / BD XLD Agar (biplate). 2013. Galima rasti: bd.com
4. Laboratorija, Neogenas. XLD agaras. Galima rasti svetainėje: foodsafety.neogen
5. Francisco Soria Melguizo laboratorija. XLD agaras. Galima rasti: http://f-soria.es/Inform
6. „Rall L“, „Rall R“, „Aragon C“, „Silva M.“. Trijų sodrinimo sultinių ir penkių dengimo terpių įvertinimas salmonelėms nustatyti naminiuose paukščiuose. Brazas. J. Mikrobiolis. 2005; 36 (2): 147–150. Galima įsigyti: scielo.br
7. „Forbes B“, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey ir Scotto mikrobiologinė diagnozė. 12 red. Redakcija Panamericana SA Argentina.