PEPTONO VANDUO: PAGRINDIMAS, PARUOŠIMAS IR PANAUDOJIMAS - BIOLOGIJA - 2025

Peptono vandens yra skystis sodrinimo terpė, neselektyvūs, daugiausia naudojami kaip skiediklis maisto produktų mėginių ar kitų medžiagų. Ši terpė cheminiu požiūriu yra labai paprasta, joje yra mėsos peptono, natrio chlorido ir vandens.

Jis turi tam tikrą maistinę vertę, leidžiančią praturtinti mėginį. Jei yra piktnaudžiaujančių bakterijų, ši terpė gali atstatyti gyvybingumą. Tai ypač naudinga atkuriant bakterijas, priklausančias Enterobacteriaceaee šeimai.

Peptono vanduo buteliuose. Šaltinis: magistrantūra. Marielsa gil

Salmonelių atsigavimo atveju rekomenduojama naudoti vandens su bufetu peptono variantą; Tai yra mėginio išankstinė sodrinimo terpė, šiuo atveju joje yra kitų elementų, tokių kaip dinatrio fosfatas ir dikalio fosfatas.

Paprastai peptono vanduo ruošiamas esant neutraliam pH, tačiau yra ir kitų variantų, kai reikia, kad pH būtų 8,5 ± 0,2 (šarminis), nes išskirtinos bakterijos yra alkalifilinės, tokios kaip Vibrio cholerae.

Be to, ši terpė gali būti naudojama kaip pagrindinė terpė angliavandenių fermentacijos tyrimams.

Pagrindas

Peptonai suteikia maistines medžiagas, reikalingas bakterijoms augti, ypač azotą ir trumpų grandinių amino rūgštis, o natrio chloridas palaiko osmosinę pusiausvyrą.

Be to, terpė leidžia išsklaidyti, homogenizuoti ir atkurti bakterijų ląsteles, kurios buvo pažeistos pramoninių procesų metu.

Kaip skiediklis yra idealus, veiksmingai pakeičiantis fiziologinį tirpalą (SSF) arba fosfato buferinį tirpalą (PBS).

Bakterijų augimas pastebimas stebint jų drumstumą.

Paruošimas

Namų ruošimas (nekomercinis)

Pasverkite 1 g peptono ir 8,5 g natrio chlorido, ištirpinkite 1 litre distiliuoto vandens. PH turėtų būti nustatytas iki 7,0. Tam gali būti naudojamas 1N natrio chloridas.

Paruošimas naudojant komercinę terpę

Pasverkite 15 g dehidratuotos terpės ir ištirpinkite litre distiliuoto vandens. Mišinį homogenizuokite. Jei reikia, mišinys virinamas 1 minutę, kad būtų lengviau ištirpti. Jei reikia, patiekite į 100 ml buteliukus arba 10 ml mėgintuvėlius. Autoklavas 15 minučių 121 ° C temperatūroje.

Atvėsinkite ir naudokite arba laikykite šaldytuve. Galutinis terpės pH yra 7,2 ± 0,2.

Dehidratuota terpė yra šviesiai smėlio spalvos, o paruošta terpė - šviesiai gintaro spalvos.

Pasirengimas fermentacijos bandymams

Į ankstesnį preparatą, prieš sterilizuojant, angliavandenių reikia pridėti iki 1% galutinės koncentracijos, pridėjus Andrade indikatorių (rūgšties fuksinas) arba fenolio raudonąjį (0,018 g / l). Vamzdeliuose turėtų būti įmontuotas Durhamo varpas, kad būtų galima stebėti dujų susidarymą.

Kiti peptono vandens variantai

Buferinis arba buferinis peptono vanduo

Jame yra fermentinis kazeino, natrio chlorido, vandenilio kalio fosfato ir natrio vandenilio fosfato dodehidro hidrolizatas. Galutinis pH yra 7,0 ± 0,2.

Jo paruošimui pasverkite 20 g dehidratuotos terpės ir ištirpinkite 1 litre distiliuoto vandens. Leiskite pailsėti maždaug 5 minutes. Kaitinkite 1 minutę, kol visiškai ištirps.

Supilkite į tinkamus stiklainius pagal poreikį. Sterilizuokite autoklavu 15 minučių esant 121 ° C temperatūrai.

-Alkalino peptono vanduo

Pasverkite 25 g dehidratuotos terpės ir ištirpinkite 1 litre vandens. Tęskite taip, kaip aprašyta aukščiau. PH svyruoja nuo 8,3 iki 8,7.

Naudokite

Inokuliavimas atliekamas tiesiogiai dedant mėginį.

Jis naudojamas bandiniams skiesti, ypač kai įtariama, kad ten gali būti pažeistų bakterijų. Paprastai skiediniai yra 1:10 ir 1: 100.

Inkubuokite 24 valandas aerobiozėje 35–37 ° C temperatūroje.

Išmatų mėginiai

Salmonelių išmatų mėginiams kaip priešsodinamąją terpę rekomenduojama naudoti buferinį arba buferinį vandenį.

Norėdami tai padaryti, atlikite šiuos veiksmus:

Jei susidaro išmatos, paimkite 1 g mėginio. Jei jie skysti, paimkite 1 ml išmatų ir suspenduokite mėgintuvėlyje su 10 ml buferinio peptono vandens. Jei tai yra tiesiosios žarnos tamponai, tampone esančią medžiagą į mėgintuvėlį išpilkite buferiniu peptono vandeniu.

Visais atvejais labai gerai sumaišykite ir homogenizuokite mėginį.

Inkubuokite 18–24 valandas 37 ° C temperatūroje. Vėliau subkultiruokite sodrinimo sultinyje, tokiame kaip selenito cistino sultinys arba tetrationato sultinys, esant 37 ° C, dar 18–24 valandas. Galiausiai kultivuokite pasirinktose Salmonella terpėse, tokiose kaip SS agaras, XLD agaras, Hektoen agaras ir kt.

Maisto mėginiai

Vanduo peptone naudojamas kaip sodrinimo terpė arba kaip paprastas skiediklis, tačiau, jei ieškoma Salmonella rūšių, jis naudojamas kaip priešsodrinimo terpė, kaip jau aprašyta.

Maiste elkitės taip:

Kietam maistui sveriama 25 g mėginio, o skystam maistui - 25 ml mėginio. Minėta porcija supilama į kolbas, kuriose yra 225 ml peptono vandens. Mišinys sumaišomas ir homogenizuojamas.

Jei įtariama, kad mikrobų apkrova yra didelė, kolonijas sudarančių vienetų (CFU) skaičiavimui palengvinti galima atlikti nuoseklųjį ar dešimtainįjį skiedimą.

Skiedimų skaičius priklausys nuo mėginio rūšies ir analitiko patirties.

Jei, priešingai, įtariama, kad mikrobų apkrova yra labai maža, skiedimų atlikti nereikia. Vėliau subkultūra selektyviose terpėse.

Maistui iš jūros, pavyzdžiui, vėžiagyviams, žuvims, be kita ko, ieškant Vibrio cholerae ar kitų rūšių Vibrio, turėtų būti naudojamas peptono vanduo, kurio pH yra 8,5 (šarminis peptono vanduo).

QA

Iš kiekvienos paruoštos partijos vienas ar du mėgintuvėliai turėtų būti inkubuojami 24 valandas, neinokuliavus aerobiozės 37 ° C temperatūroje. Laiko pabaigoje neturėtų būti stebimas drumstumas ar spalvos pokytis.

Jų efektyvumui įvertinti taip pat gali būti naudojamos žinomos kontrolės atmainos:

Tam gali būti naudojamos šios bakterijų padermės: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.

Visais atvejais tikimasi patenkinamo mikrobų vystymosi, kurį lemia terpės drumstumas.

Apribojimai

- Dehidratuota terpė yra labai higroskopiška, todėl ją reikia laikyti atokiau nuo drėgmės.

- Terpė neturėtų būti naudojama, jei pastebimas bet kokio pobūdžio pablogėjimas.

- Dehidratuotą terpę reikia laikyti 10–35 ° C temperatūroje

- Paruoštą terpę reikia laikyti šaldytuve (2–8 ° C).

Nuorodos

1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B ir Velázquez O. Maisto produktų mikrobiologinės analizės metodai. 2009 m., 2-asis leidimas UNAM Chemijos fakultetas. Meksika. UNAM Chemijos fakulteto vadovų ir dokumentų administratoriaus (AMyD) versija. Galima rasti: http://depa.fquim.unam.mx
2. „Britannia“ laboratorijos. Buffetinis peptono vanduo. 2015.Atsiejama: britanialab.com
3. Neogenų laboratorijos. Peptono vanduo. Galima rasti svetainėje: foodsafety.neogen.com
4. „Britannia“ laboratorijos. Peptono vanduo. 2015.Atsiejama: britanialab.com
5. „Merck“ laboratorijos. Buferinis peptono vanduo. Galima rasti: merckmillipore.com
6. „Conda Pronadisa“ laboratorijos. Šarminis peptono vanduo. Galima rasti: condalab.com
7. „Forbes B“, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey ir Scotto mikrobiologinė diagnozė. 12 red. Redakcija Panamericana SA Argentina.