NEUBAUERIO KAMERA: ISTORIJA, CHARAKTERISTIKOS, PANAUDOJIMAS - BIOLOGIJA - 2025

„ Neubauer“ kamera , hematometras arba hemocitometras, yra laboratorinis instrumentas, sudarytas iš specialios storo stiklo plokštės. Ši kamera naudojama kai kurių tipų ląstelių, tokių kaip raudonieji kraujo kūneliai, leukocitai ir trombocitai, skaičiavimui, nors ji gali būti naudojama sporoms, spermai, parazitams ir kt.

Jis turi keletą labai savotiškų savybių, nes jį sudaro 3 zonos, centrinė skaičiavimo ir dvi atraminės zonos. Kiekvienoje kameroje yra dvi skaičiavimo zonos arba skersiniai, viena viršuje, kita apačioje.

Neubauerio kamera. Šaltinis: „SantiBadia“. Redaguotas vaizdas.

Jie turi kelis tinklinio pavidalo padalijimus. Skaičiavimo plotai yra vidutiniai kvadratai, esantys 4 abiejų taškų kampuose, pridėjus centrinę aikštę.

Fotoaparatą reikia surinkti labai atsargiai, nes visos detalės turi įtakos ląstelių skaičiui. Gali būti padaryta daugybė klaidų, tačiau jei kuri nors iš jų įvyksta, fotoaparatą reikia išardyti, išvalyti ir vėl surinkti. Pagrindinės klaidos yra šios:

Kambario perpildymas arba nepakankamas užpildymas, leidžiant kamerai išdžiūti, bandant pašalinti skysčio perteklių marle, gabenant kamerą, nuleidžiant kamerą, užpildyti nešvarią ar šlapią kamerą, nesumaišyti skiedinio ar mėginio gerai. Visos šios klaidos duos nerealią vertę.

Istorija

„Neubauer“ kamera yra tikslus instrumentas, o gamybos procesas yra griežtai kontroliuojamas. Jis buvo sukurtas tiksliam dalelių ar susiformavusių elementų , tokių kaip ląstelės įvairiuose skysčiuose, skaičiavimui per mm ³ . Jos subtili grafika išraižyta deimanto pieštuku.

Neubauerio kameros charakteristikos

Visa kamera yra normalios skaidrės dydžio, kad ją būtų galima pastatyti ant mikroskopo scenos.

Kamerą sudaro trys centriniai stačiakampiai paviršiai (a, b, c). „B“ zonoje yra R zona arba skaičiavimo zona, dar vadinama retikuliu. Po vieną kiekvienoje kameros pusėje, atskirtą „d“ zona.

Neubauerio rūmų grafinė schema. Šaltinis: Hematologijos praktinis vadovas. Carabobo universiteto bioanalizės mokykla, Venesuela.

Kiekvienas tinklelis yra nušlifuotas plotas, kuriame yra išgraviruotas skaičiavimo plotas. Jį sudaro kvadratas, kurio paviršiaus plotas yra 9 mm ^2, ir iš vidaus yra padalintas į 9 kvadratus, kurių kiekvieno paviršiaus plotas yra 1 mm ² . Keturios kampinės kvadratūros yra padalintos į 16 mažesnių kvadratų (0,0625 mm ² ploto).

Šie tinkleliai yra sudaryti iš milimetrų linijų, susikertančių tarpusavyje, ir tai sudaro nepriekaištingai nubrėžtus tinklelius, apibrėžtus nurodytais matavimais. Šios linijos buvo išgraviruotos deimanto antgaliu.

Patobulintas Neubauerio retikulumas. Šaltinis: Venesuelos Karabobo universiteto Bioanalizės mokyklos hematologijos vadovas.

Keturios pusės atitinka skaičiavimo plotą. Būtent šiose pusėse ar kampuose suskaičiuojama didžioji dalis ląstelių (raudonųjų kraujo kūnelių ir leukocitų), o trombocitai skaičiuojami centrinėje srityje.

Centrinė zona turi daugiau padalijimų, ją sudaro 1 mm ² kvadratas, padalintas į 25 kvadratus, kurių kiekvieno paviršiaus plotas yra 0,04 mm ² . Jie savo ruožtu yra padalinti į 16 tinklelių, kurių plotas yra 0,0025 mm ² .

Patobulinto Neubauerio retikulio aprašymas. a) kampų kvadratas, b) centrinė aikštė, c) centrinės aikštės vidurinė aikštė. Šaltinis: Venesuelos Karabobo universiteto Bioanalizės mokyklos hematologijos vadovas.

„A“ ir „c“ zonos naudojamos kaip atrama specialiam dangtelio objektui, vadinamam hematometriniu stikleliu ar hematimetro dangteliu, uždėti.

Aukštis tarp folijos ir skaičiavimo paviršiaus yra 0,1 mm. Talpinių dėžučių paviršiaus ploto, kameros aukščio ir mėginio praskiedimo matavimai yra duomenys, reikalingi atliekant galutinius skaičiavimus.

Programos

Jis naudojamas ląstelių skaičiavimui. Tai ypač naudinga hematologijos srityje, nes tai leidžia suskaičiuoti 3 kraujo ląstelių serijas; ty raudonieji kraujo kūneliai, leukocitai ir trombocitai.

Tačiau jis gali būti naudojamas kitose srityse, pavyzdžiui, suskaičiuoti spermą, sporas, bakterijas ar kitus svarbius daiktus, atsižvelgiant į mėginio tipą.

Kaip naudoti?

Mėginio paruošimas

Ląstelių skaičiavimas paprastai pradedamas nuo ankstesnio skiedimo. Pavyzdys: kad būtų galima suskaičiuoti baltuosius kraujo kūnelius, paruoškite 1:20 praskiedimą Turkio skysčiu. Prieš pipetės užpylimą ir Neubauerio kameros praskiedimą reikia gerai išmaišyti.

Kartais yra 1:20 praskiedimo, kad jo neskaičiuotumėte. Pavyzdžiui, pacientams, kenčiantiems nuo tam tikrų rūšių lėtinių leukemijų. Tokiais atvejais turėtų būti daromi didesni skiedimai, pvz., 1: 100.

Kita vertus, jei skaičius yra labai mažas, kaip ir sergant sunkiomis leukopenijomis, mėginiui sukoncentruoti galima mažesnius praskiedimus. Pavyzdys: galite skiesti santykiu 1:10.

Atlikti pakeitimai daro įtaką skaičiavimams.

Neubauerio kameros tvirtinimas

Neubauerio kamera surenkama uždedant hematometrinį stiklelį centrinėje srityje. Abu turi būti labai švarūs ir sausi. Norėdami įdėti lamelę, ji paimama už kraštų ir švelniai nuleidžiama ant fotoaparato.

Tai užpildoma uždedant „Thoma“ automatinės pipetės ar pipetės galiuką 35 ° kampu ties pakrovimo zonos kraštu. Skystis išleidžiamas sklandžiai, o pakrovimo vietą užpildo kapiliarumas. Tai atliekama iš abiejų pusių, kad būtų galima pakrauti du skersinius.

Tinkleliai neturėtų būti perkrauti, ir jie neturėtų būti skysčiai. Krovinys turi būti tikslus. Svarbu, kad įdaras būtų atliekamas vienodai, tai yra, neturėtų būti burbuliukų.

Surinkus kamerą, jis paliekamas 2 minutėms pailsėti, kad ląstelės nusėstų iki dugno, o jų vizualizavimas ir skaičiavimas būtų lengvesnis.

Po poilsio laiko jis montuojamas ant šviesos mikroskopo scenos stebėjimui. Pirmiausia jis fokusuojamas su 10X objektyvu ir, jei reikia, tada pereina į 40X.

Norint pagerinti jo vizualizaciją, sumažėja šviesos praleidimas iš mikroskopo. Norėdami tai padaryti, kondensatorius nuleidžiamas, o diafragma yra šiek tiek uždaryta.

Skaičiavimas

Norint nustatyti baltųjų kraujo kūnelių ar leukocitų skaičių, reikia suskaičiuoti visą keturių vidurinių kampinių kvadratų paviršių ir kiekvieno retikulio centrinę aikštę.

Skaičiavimas prasideda aikštėje, viršutiniame kairiajame kampe. Jūs pradedate nuo pirmosios eilės pirmosios aikštės, tai yra, iš kairės į dešinę, kol pasieksite priešingą galą.

Ten jūs einate žemyn ir žiūrite atgal iš dešinės į kairę, kol pasieksite kitą galą ir pan., Kiekvienos tinklelio ląstelės skaičiuojamos zigzago būdu. Suskaičiuojama 16 kiekvienos medianos kvadratų tinklelių.

Kad langelio neskaičiuotumėte du kartus, yra taisyklės apie langelius, esančius ant kiekvieno tinklelio ribinių linijų. Ląstelės kairėje ir viršutinėje eilutėse suskaičiuojamos, o dešinėje ir apatinėje eilutėse esantys langeliai ignoruojami.

Turi būti rankinis ląstelių skaitiklis, kad operatorius paspaustų įrenginio klavišą tiek kartų, kiek yra stebimų langelių. Naudodamas skaitiklį, operatorius gali suskaičiuoti nežiūrėdamas į viršų iš mikroskopinio lauko. Skaičiavimo pabaigoje matysite bendrą suskaičiuotų langelių skaičių.

Skaičiavimai

Skaičiavimus galite atlikti keliais būdais. Galima suskaičiuoti vieną tašką arba abu gali būti suskaičiuoti, o abiejų vidurkis. Šiose dviejose situacijose suskaičiuotos ląstelės turi būti padaugintos iš koeficiento, kuris šiuo atveju būtų 40. Taigi ^gaunamas bendras skaičius mm ³ .

Bet jei skaičiuojami du tinkleliai, o vidurkis nėra imamas, jis turi būti padaugintas iš skirtingo koeficiento, šiuo atveju iš 20.

- Padauginimo koeficientas

Štai kaip apskaičiuojamas dauginimo koeficientas.

Skaičiuojant atsižvelgiama į įvairius duomenis, įskaitant skiedimo titrą, kameros aukštį ir suskaičiuotą plotą.

Skiedimas

Naudojamas standartinis leukocitų skaičiaus santykis yra 1:20.

Kameros aukštis

Aukštis tarp kameros ir kraujo ląstelių lakšto yra 0,1 mm.

Skaičiuojamas plotas

Jei skaičiuojami 5 kvadratai iš 1 mm ² ploto, tai reiškia, kad bendras skaičiavimo plotas yra 5 mm ² . Šie duomenys turi būti padauginti iš kameros aukščio, kad būtų galima suskaičiuoti bendrą tūrį. Tai yra, 5 mm ² x 0,1 mm = 0,5 mm ³ .

Formulės ir skaičiavimai

Remiantis turimais duomenimis, sakoma:

Jei yra 0,5 mm ³ - nėra - suskaičiuojamas ląstelių skaičius

1 mm ³ --- bus - X ląstelių nebus

X ląstelių skaičius = (ląstelių skaičius, suskaičiuotas x 1) / 0,5 mm ³

Tačiau reikia atsižvelgti ir į skiedimą. Todėl formulė yra tokia:

(ląstelių skaičius x 1) x 20 / 0,5 mm ³

Galiausiai, apibendrinant, suskaičiuotų ląstelių skaičių galima padauginti iš 40. Taigi ^gaunama leukocitų vertė mm ³ .

Jei skaičiuojami du tinkleliai, keičiami suskaičiuoto ploto duomenys, kurie šiuo atveju būtų 10 kvadratų, tai yra 10 mm ² . Bendras suskaičiuotas tūris yra 1 mm3. Formulė būtų:

(ląstelių skaičius x 1) x 20/1 mm ³

Todėl tokiu atveju dauginimo koeficientas būtų 20.

Klaidos

- Jei kraunant fotoaparatą jis viršijamas ar viršijamas skysčiu, kameros aukštis kinta. Dėl to skaičius yra didesnis nei tikras. Jei bandysite pašalinti perteklių marle ar medvilne, tai yra didžiulė klaida. Dėl šio veiksmo ląstelės susitelks, padidės skaičius.

-Jei jis pakraunamas prastai, skaičius bus mažesnis nei tikras.

-Jei fotoaparatas sumontuotas ir jam leidžiama išdžiūti, nebeįmanoma suskaičiuoti, nes tai duos neteisingus rezultatus.

-Jei mėginio skiedinys prieš įkeliant kamerą nebus gerai sumaišytas, gali būti klaidų rodinyje, nes ląstelės nebus paskirstytos vienodai. Todėl ląstelių koncentracija bus mažesnė ar didesnė, atsižvelgiant į tai, ar mėginys imamas atitinkamai iš skysčio paviršiaus, ar iš vamzdelio dugno.

- Dėl burbuliukų sumažėja skysčio, kuris turi patekti į tinklainę, kiekis, trukdantis tinkamai vizualizuoti ir paskirstyti ląsteles. Visa tai reikšmingai veikia rezultatus.

- Skaičiuodami nežiūrėkite į viršų iš mikroskopo, kol nebus užpildyta kiekviena didelė aikštė, kad nepasiklystumėte.

-Viena klaidos priežastis yra pakreipus fotoaparatą po montavimo. Dėl šios priežasties reikia atsargiai pakelti mikroskopo stadiją.

Rekomendacija

Jei dėl kokios nors priežasties aptikote kameros užpildymo anomalijų, rekomenduojama tą gaminį išardyti, išvalyti kamerą ir vėl surinkti iš naujo.

Valydami fotoaparatą, būkite labai atsargūs, kad nesubraižytumėte kryžminių plaukų. Kita vertus, žinokite, kad hematometrinis stiklelis yra subtilus ir trapus. Netinkamas valdymas gali jį sugadinti.

Prieš pradėdami skaičiuoti, įsitikinkite, kad ląstelės yra gerai paskirstytos. Netinkamai sumaišius ar praskiedus, ląstelės pasiskirsto nevienodai. Jei taip atsitiks, surinkimą reikia pakartoti.

Vienas iš būdų sužinoti, ar langeliai yra gerai pasiskirstę, yra lyginti kiekvieno didžiojo kvadrato skaičių, ląstelių skaičius, skaičiuojamas kiekvienam kvadratui, neturėtų per daug skirtis.

-Jei baltųjų kraujo kūnelių skaičius viršija 50 000 mm ^3, patartina pakartoti, darant didesnį tirpalą.

-Jei pakeisite skiedimą, turite perskaičiuoti daugybos koeficientą, nes tai turi įtakos formulei.

Nuorodos

1. Cardona-Maya W, Berdugo J, Cadavid A. Spermos koncentracijos palyginimas naudojant Maklerio ir Neubauerio kamerą. Actas Urol Esp 2008; 32 (4): 443–445. Galima rasti: „scielo“.
2. Neubauerio kamera. (2018 m. Kovo 27 d.). Vikipedija, nemokama enciklopedija. Konsultacijų data: 2019 m. Birželio 23 d., 04:10, iš es.wikipedia.org
3. Meneses A, Rojas L, Sifontes S. Alternatyvaus skaičiavimo metodo taikymas Neubauerio rūmuose norint nustatyti Trichomonas vaginalis koncentraciją. „Cub Med Trop“, 2001 m. 53 (3): 180–8. Galima rasti: researchgate.net
4. Gómez-Pérez Roald E. Spermogrammos analizė. Venesas. Endokrinolis. Metab. 2007; 5 (2): 19-20. Galima rasti: ve.scielo
5. Karabobo universiteto Bioanalizės mokyklos hematologijos praktinis vadovas. Venesuela.1998 m